高效液相色谱法定性鉴别人参口服液中人参皂苷Rg1、Re的方法研究

2017-12-20 20:59杜进王雪
科学与财富 2017年29期
关键词:专属性耐用性高效液相色谱法

杜进+王雪

摘 要:为了确保人参口服液产品原料用药的真实,本文通过查阅大量文献,不断进行实验摸索以及分析方法学验证工作,建立了人参口服液定性鉴别的测定方法。方法:采用高效液相色谱法对人参皂苷Rg1、Re进行定性鉴别。结果:本方法专属性、耐用性良好,能准确进行定性鉴别。结论:建立的新方法准确可靠,适用于人参口服液鉴别分析。

关键词:人参皂苷;专属性;耐用性;高效液相色谱法

人参口服液大补元气,生津止渴。用于气虚所致的身倦乏力,食欲不振,心悸气短,失眠健忘等。人参口服液主要成分为人参。人参作为滋补佳品,其成分极其复杂,而人参皂苷被视为人参中的核心成分。例如人参皂苷Rg1可快速缓解疲劳、改善学习记忆、延缓衰老,具有兴奋中枢神经、抑制血小板作用;Rg2具有抗休克作用,快速改善心肌缺血和缺氧,治疗和预防冠心病;Rb1具有增强胆碱系统的功能,增加乙酰胆碱的合成和释放以及改善记忆力作用;人参皂苷Re具有抑制中枢神经,促进DNA,RNA合成,升高血浆皮质酮,扩张血管的作用。人参加工产品大多以总皂苷形式定量,而因种植及提取方法不同各单组分皂苷含量差异较大,为使同类产品更具使用针对性及防范合成式假冒投产本文采用高效液相色谱法建立了人参口服液定性鉴别人参皂苷Rg1、Re的测定方法,严格控制产品质量,确保药品真实可靠。

1 材料

1.1 供试品

人参口服液(市售样品,规格10ml/支)

1.2 对照品

(1)人参皂苷Rg1(中国药品生物制品检定所 批号:110703-201128 含量93.4%)。贮存条件:冷藏。使用条件:使用前无需干燥,可直接使用。(2)人参皂苷Re(中国药品生物制品检定所 批号:110754-201324 含量92.7%)。贮存条件:冷藏。使用条件:使用前无需干燥,可直接使用。

1.3 阴性空白样品

技术部门提供阴性空白样品为按人参口服液工艺生产,但不含人参功效成分的空白混合物。

1.4 仪器与试药

1.4.1 仪器。高效液相色谱仪( 美国Waters e2695)、分析天平等。

1.4.2 试药。甲醇、乙腈为无末端吸收色谱纯级试剂,其他试剂为分析纯,均购自合格的供应商。

2 测定方法

2.1 色谱条件

仪器:美国Waters e2695高效液相色谱仪紫外检测器。流动相:乙腈-水为流动相,进行梯度洗脱(见表1)。检测波长:203nm。柱温:30℃。流速:1.0ml/min。进样量:20μl。色谱柱:Agilent C18(250×4.6mm,5μm)

2.2 对照品和供试品溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备。取人参皂苷Rg1、Re对照品适量,加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液,作为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备。精密量取人参口服液20ml置分液漏斗中,以水饱和正丁醇提取3次,每次20ml,合并提取液,至水浴锅上蒸干,残渣加甲醇溶解至5ml量瓶中,定容至刻度,摇匀,过滤,作为供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液的制备。取阴性空白混合液20ml置分液漏斗中,与供试品溶液同法制成阴性对照溶液。

3 试验研究

3.1 鉴别方法的专属性考察

用供试品溶液,对照品溶液以及阴性空白对照溶液验证本方法的专属性。(图1)

实验结果如上重叠色谱图,阴性空白对照溶液在对照品溶液峰处无干扰。

3.2 鑒别方法的耐用性考察

通过改变色谱的条件,用对照品溶液验证耐用性。

3.2.1 柱温。分别在柱温25℃、30℃、35℃下进行测定,记录色谱图,观察分离度、保留时间、理论塔板数的变化。

结果表明:温度在25℃-35℃区间内理论塔板数按人参皂苷Re峰计≥30000时,Rg1、Re分离度均符合要求。

3.2.2 流速。调节流速0.9ml/min,1.0ml/min, 1.1ml/min,记录色谱图,观察分离度、保留时间、理论塔板数的变化。

结果表明:流速在0.9-1.1ml/min区间内理论塔板数按人参皂苷Re峰计≥30000时,Rg1、Re分离度均符合要求。

3.2.3 不同品牌色谱柱。选择以下牌号的C18色谱柱:Diamonsil C18色谱柱,Inertsil ODS-3 C18色谱柱,Agilent C18色谱柱,记录色谱图,观察分离度、保留时间、理论塔板数的变化。

结果表明:不同品牌C18色谱柱均可完成鉴别分离。

3.3 检出限考察

精密量取对照品溶液用甲醇逐步稀释成一定浓度的溶液,按上述色谱条件进行测定,记录色谱图,信噪比为3时,最小检测限为5ug/mL。

4 结论

经过以上分析方法学验证表明,本方法适用于人参口服液中人参皂苷Rg1、Re成分的定性鉴别。

5 讨论

本方法在样品提取过程中,尝试过三氯甲烷提取,正丁醇提取、乙醚提取等萃取方式,并尝试提取液是否需要洗涤过程。试验结果表明,水饱和正丁醇提取效果较好,并且不需要洗涤过程既可得到Rg1、Re较好的分离峰型图。水饱和正丁醇提取次数考察结果说明2~3次提取基本已经将皂苷提尽。流动相选择乙腈-水梯度洗脱,尝试更换流动相比例,洗脱时间等因素,试验结果表明,现比例分离效果最好,峰型尖锐,阴性无干扰。

参考文献

[1]中华人民共和国药典(一部).化学工业出版社,2015.

[2]罗云,金城,李果等.高效液相色谱法同时测定姜参胶囊中人参皂苷Rg1及Re的含量[J].中国药房,2007(3):451-452.

[3]伍毅.高效液相色谱法测定复方田七滴丸中人参皂苷Re1含量[J].中国药房,2005(16):1737-1738.

[4]乔雪,李月茹.黑参中7种人参皂苷含量测定[J].医药卫生科技,2012(1):886-887.

[5]牛春颖,张凤清,解耸林.蒸参水中人参皂苷的鉴别及测定[J].中国酿造,2013(5):1445-1446.endprint

猜你喜欢
专属性耐用性高效液相色谱法
考虑EPR规制和“以旧换新”模式的耐用品生产与回收策略
HPLC测定真菌及其制品中麦角甾醇含量
婚礼主持文案的四种特性
高效液相色谱法用于丙酸睾酮注射液的含量测定
山苓祛斑凝胶剂提取物质量标准研究
HPLC法测定康尔心胶囊中丹参酮ⅡA的含量
跨组织网络中的知识流动性与知识专属性对创新绩效的影响研究
斯巴鲁有多少与众不同