CIP2A在甲状腺乳头状癌组织中的表达及临床意义

芮昆昆++++++章波++++++冯联忠++++++邰小华

[摘要] 目的 探讨CIP2A在甲状腺乳头状癌、甲状腺腺瘤、结节性甲状腺肿及甲状腺正常组织中的表达及临床意义。 方法 应用免疫组化法检测67例甲状腺乳头状癌、26例甲状腺腺瘤、23例结节性甲状腺肿、22例甲状腺正常组织中CIP2A蛋白的表达情况。 结果 CIP2A在甲状腺乳头状癌组织中的表达明显高于甲状腺腺瘤、结节性甲状腺肿及正常组织，差异有统计学意义（P<0.05）；CIP2A在甲状腺乳头状癌中的表达水平与淋巴结转移相关（P<0.05），与甲状腺乳头状癌患者的性别、年龄、肿瘤大小及pTNM分期等无关（P>0.05）。结论 CIP2A在甲状腺乳头状癌组织中过表达，且与其恶性临床病理特征紧密相关，提示CIP2A作为一个新的靶点可能为甲状腺乳头状癌的临床诊断与治疗策略提供新的方向。

[关键词] CIP2A；甲状腺乳头状癌；淋巴结转移；免疫组织化学

[中图分类号] R736.1 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2017）32-0008-04

[Abstract] Objective To investigate the expression and clinical significance of CIP2A in papillary thyroid carcinoma， thyroid adenoma， nodular goiter and thyroid normal tissue. Methods Immunohistochemical method was used to detect the expression of CIP2A protein in 67 cases of thyroid papillary carcinoma， 26 cases of thyroid adenoma， 23 cases of nodular goiter and 22 cases of normal thyroid tissues. Results The expression of CIP2A in papillary thyroid carcinoma tissues was significantly higher than that in thyroid adenoma， nodular goiter and normal thyroid tissues， and the differences were statistically significant（P<0.05）； the expression level of CIP2A in papillary thyroid carcinoma was correlated with lymph node metastasis（P<0.05）， but was not associated with gender， age， tumor size and pTNM staging of patients with papillary thyroid carcinoma（P>0.05）. Conclusion CIP2A is overexpressed in papillary thyroid carcinoma， and is closely correlated with its malignant clinical and pathological characteristics， suggesting that CIP2A， as a new target， may provide a new direction for the clinical diagnosis and treatment strategy of papillary thyroid carcinoma.

[Key words] CIP2A； Papillary thyroid carcinoma； Lymph node metastasis； Immunohistochemistry

甲狀腺癌是最常见的内分泌恶性肿瘤之一。近年来，甲状腺癌的发病率以每年4%增幅逐年上升，尤以甲状腺乳头状癌为主，约占80%，不但导致甲状腺癌相关医疗费用支出增加，也使因甲状腺癌伤残导致的疾病负担处于上升趋势[1-3]。尽管甲状腺乳头状癌的预后良好，10年生存率达90%以上，但其发生、发展机制仍不明确，随着近年来对癌基因、抑癌基因及肿瘤分子标志物的研究，人们认识到同其他恶性肿瘤一样，甲状腺乳头状癌的发生发展也是一个多因素、多阶段、多靶点共同作用的结果。蛋白磷酸酶2A（Protein Phosphatase 2A，PP2A）的癌性抑制因子（Cancerous Inhibitor of Protein Phosphatase 2A，CIP2A）是近几年发现的一种癌蛋白，主要通过抑制PP2A对c-Myc蛋白的去磷酸化作用以维持其结构稳定性，从而促进细胞的增殖，参与肿瘤的发生发展。现有研究表明，CIP2A在多种实体肿瘤中过表达[4]，并且CIP2A过表达与多种恶性肿瘤的浸润深度、TNM分期或淋巴结转移等临床病理学参数间具有相关性，可作为潜在的诊断标志物或不良预后的预测因子[5]。但是，截至目前CIP2A在甲状腺乳头状癌中的表达及与临床病理学参数之间有无相关性的研究仍较少。本研究应用免疫组化方法分析CIP2A在甲状腺良恶性组织中的表达及其与甲状腺乳头状癌临床病理学参数之间的关系，现报道如下。

1资料与方法

1.1 一般资料

收集67例甲状腺乳头状癌、26例甲状腺腺瘤、23例结节性甲状腺肿、22例甲状腺正常组织石蜡组织标本，均来自2015年11月～2016年11月间在嘉兴学院附属第二医院肿瘤外科行手术治疗的患者。本研究选取的病例术前均未进行药物及碘131等治疗，所有组织标本均经HE染色及病理学检查确诊；依据美国癌症联合委员会（AJCC）制定的第7版《肿瘤分期指南》进行TNM分期；本研究经医院伦理委员会批准通过。67例甲状腺乳头状癌中，男14例，女53例，年龄23～82岁，中位年龄50岁。所有标本均经100 mL/L甲醛固定，石蜡包埋后保存，对石蜡标本行4 μm厚度连续切片。endprint

1.2 方法

鼠抗人CIP2A單克隆抗体购自美国santa cruz公司。采用免疫组织化学法进行染色，具体实验步骤按操作说明书进行。CIP2A主要表达于细胞质，显微镜下见细胞质中棕黄色物质判定为阳性。阳性对照参考试剂公司提供的阳性对照片，阴性对照以磷酸盐缓冲液代替一抗。所有玻片经显微镜观察并拍照，以作后续分析。

1.3 免疫组化染色结果评估

所有玻片染色结果均由2位病理科专家采用阳性细胞平均百分比和染色强度两种指标联合评价。具体打分方法如下：①每张玻片随机选取5个显微镜下视野，根据阳性细胞平均百分比打分：没有阳性细胞为0分，阳性细胞≤25%为1分，阳性细胞26%～50%为2分，阳性细胞51%～75%为3分，阳性细胞76%～100%为4分。②染色强度评分：阴性为0分，弱染色为1分，中度染色为2分，强染色为3分。每张切片的最终得分为两种方法评分的乘积，最终可有四种结果：乘积为 0，记为“-”，表达阴性；乘积≤4，记为“+”，低表达；乘积为5～8，记为“++”，中度表达；乘积≥9，记为“+++”，强表达。若2位专家对同一张染色切片打分结果有差异，则弃用该数据。

1.4 统计学方法

对所有数据资料采用SPSS19.0统计软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，经方差齐性检验后采用t检验；计数资料采用χ2 检验；对临床病理学资料采用χ2 检验进行单因素分析，P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CIP2A蛋白在甲状腺各种组织中的表达情况

CIP2A阳性表达的免疫组化结果为：细胞质中见大量棕黄色颗粒，细胞核中也有少量表达（图1）。甲状腺乳头状癌标本中CIP2A阳性表达率显著高于甲状腺腺瘤、结节性甲状腺肿、甲状腺正常组织，且各类型病变中的表达有统计学差异（χ2=30.9，P<0.05）。与甲状腺正常组织相比，各类型病变CIP2A阳性表达率差异均有统计学意义（χ2=13.1、16.7、20.5，P<0.05）（表1）。

2.2 CIP2A蛋白表达水平与甲状腺乳头状癌临床病理特征的关系分析

CIP2A蛋白表达情况与甲状腺乳头状癌患者淋巴结转移有关，差异有统计学意义（P<0.05），与患者的年龄、性别、临床病理分期（pTNM分期）、肿瘤直径及是否有腺外浸润无关（表2）。

3 讨论

CIP2A最初由Nagase T等[6]从人胎脑的cDNA文库中克隆出，也称为KIAA1524、P90，后由Junttila MR等[7]最终命名为CIP2A，定位于人类3号染色体上，分子量为102 kDa，是近年来新发现的一种能抑制PP2A活性的蛋白质。其可以通过抑制PP2A介导的c-Myc蛋白上的第62位丝氨酸（S62）去磷酸化作用，以减少c-Myc蛋白的泛素化水解，维持其结构稳定，发挥促进细胞增殖和恶性转化的作用[8，9]，并且c-Myc作为转录调节因子又能上调CIP2A的表达，两者之间的正反馈循环共同增强了CIP2A的生物学作用。通过基因敲除CIP2A基因后研究发现，c-Myc蛋白表达水平及细胞增殖率均降低，此研究证实CIP2A在促进细胞增殖及肿瘤形成方面起重要作用，且c-Myc蛋白作为一个重要靶点参与该作用[10]。除此之外，CIP2A过表达还可以延缓细胞衰老[11]。近年来研究发现，良性组织中CIP2A几乎不表达，而在人类头颈部鳞状细胞癌[9]、胃癌[12]、结肠癌[13]、宫颈癌[14]、肝细胞癌[15]等多种实体恶性肿瘤中均为高表达，而且在急、慢性粒细胞白血病（acute myelocytic leukemia，AML；chronic myelocytic leukemia，CML）患者体内也发现CIP2A过表达[16，17]，由此可见，CIP2A 可能参与多种肿瘤的发生发展，并可能成为指导多种恶性肿瘤诊断、治疗及预后的新靶点。

本研究使用免疫组织化学法检测CIP2A的表达，结果显示，67例甲状腺乳头状癌标本中CIP2A阳性表达率为71.6%，26例甲状腺腺瘤中阳性表达率为30.7%，23例结节性甲状腺肿中阳性表达率为21.7%，22例癌旁正常组织中阳性表达率为13.6%。可见，CIP2A在甲状腺乳头状癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织，差异有统计学意义（P<0.05）。此结果与其在胃癌、乳腺癌等肿瘤组织中表达结果相似[11，12]。

甲状腺乳头状癌是甲状腺最常见的恶性肿瘤，大部分起源于甲状腺滤泡上皮细胞，临床上难以与某些良性甲状腺疾病如滤泡性腺瘤、结节性甲状腺肿鉴别。所以，临床上甲状腺癌的鉴别常联合多种肿瘤分子标志物，如galectin-3、HBME-1、CK19等。近年来，有研究表明CIP2A与HBME-1或galectin-3联合应用，对于甲状腺癌诊断的阳性预测值可高达96.2%，并且CIPA高表达水平与不良预后相关[18]。本研究结果显示，CIP2A 的表达与甲状腺乳头状癌淋巴结转移有关，差异有统计学意义（P<0.05）；且CIP2A的表达与甲状腺乳头状癌患者的性别、年龄、肿瘤的直径大小、腺外浸润、pTNM分期均无关，差异无统计学意义（P>0.05）。Li W等[19]研究也提示CIP2A在胃癌中的表达与患者的性别、年龄以及肿瘤的大小、分化程度等无明显相关。而CIP2A在胆管癌组织的表达除与上述病理学参数无关，与患者肿瘤的位置、神经浸润、淋巴结转移及吸烟、HBV感染也均无相关性[20]。截止目前关于CIP2A与肿瘤临床病理学参数之间的关系尚没有较统一定论，还需更多的研究数据来支持。

综上所述，CIP2A在甲状腺乳头状癌中过表达，且与甲状腺乳头状癌的临床病理特征紧密相关，提示CIP2A 基因及蛋白的表达调控可能参与甲状腺乳头状癌的发生发展。因此，CIP2A表达情况的检测可能为甲状腺乳头状癌的临床诊断和治疗策略提供新的思路及新的靶点。endprint

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（收稿日期：2017-09-20）endprint