八珍益母丸中芍药苷的HPLC法测定结果的不确定度评价

马晓静，崔业波，高楠楠

(四平市食品药品检验所，吉林 四平 136000)

·中药工业·

八珍益母丸中芍药苷的HPLC法测定结果的不确定度评价

马晓静*，崔业波，高楠楠

(四平市食品药品检验所，吉林 四平 136000)

目的对八珍益母丸中芍药苷的HPLC法测定结果的不确定度进行分析，找出影响不确定度的因素。方法参照《中华人民共和国药典》2015版一部八珍益母丸含量测定方法，对测定过程和步骤进行量化分析，计算合成不确定度，并确定测量结果在95%置信区间下的扩展不确定度。结果采用HPLC法测定八珍益母丸中芍药苷含量的扩展不确定度为每丸0.20 mg。结论对照品的称量是本次实验不确定度的主要来源，对称量过程的严格控制有利于提高检测结果的可靠性、准确性。

八珍益母丸；芍药苷；含量测定；不确定度；高效液相色谱法

测量不确定度是表征合理地赋予被测量之值的分散性，是与测量结果相联系的参数。在实验室引入不确定度评价对评估检验结果的可靠性和检验报告质量合格具有重大意义，通过不确定度的评定，可以得到被测量值合理的分布区间，有效地提高检验结果的准确性[1-2]。而中成药由于成分复杂，其质量控制的不确定度来源要大于化学药品，近些年来中成药的不确定度评定也越来越得到重视[4-6]。为此，本研究依据2015年版《中华人民共和国药典》一部八珍益母丸含量测定项下的方法，参照《化学分析中不确定度的评估指南》(CNAS-GL06)和《测量不确定度评定与表示》(JJF 1059.1-2012)，对八珍益母丸中芍药苷的含量测定不确定度的来源进行分析，并对实验过程中产生的不确定度分量进行评价，为该实验过程的控制和检验报告的评估提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

AgiLent1260高效液相色谱仪；BP211D型电子天平(赛多利斯)；KQ-300DE型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2

芍药苷(中国食品药品检定研究院，批号：110736-201438，含量：94.9%)；乙腈为色谱纯；水为高纯水。

八珍益母丸(大蜜丸)均为市售(药都制药集团股份有限公司，批号：150202)；吉林市鹿王制药股份有限公司，批号分别为：140901、141102)。

2 方法

2.1 色谱条件

以InertsiL ODS-3(250 mm×4.6 mm，5 μm)为色谱柱；以乙腈-0.1%磷酸(13∶87)为流动相；检测波长为230 nm；柱温为30 ℃；进样量为10 μL。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取芍药苷对照品14.38 mg，置于100 mL量瓶中，加稀乙醇溶解并稀释至刻度，作为对照品储备液。精密量取上述对照品储备液1 mL，置于10 mL量瓶中，加稀乙醇稀释至刻度，即得浓度为14.38 μg·mL-1的对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

取10丸八珍益母丸，精密称定，剪碎，混匀，取约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25 mL，密塞，称定重量，超声处理40 min，放冷，再精密称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，即得[7]。

2.4 重复性试验

取八珍益母丸样品(批号：150202)，按供试品溶液制备的方法平行处理6份供试品溶液，按照2.1项下色谱条件进行测定，八珍益母丸中芍药苷的含量为7.05 mg/丸，RSD为1.84%。

2.5 加样回收率

取八珍益母丸样品(批号：150202)约1 g，精密称定，共6份，分别精密加入对照品储备液1 mL，按供试品溶液制备方法同法处理，按2.1项下色谱条件进行测定，计算得芍药苷的回收率为101.57%，RSD为1.94%。

2.6 样品测定

取3批八珍益母丸各适量，按供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，再按2.1色谱条件进行测定，按外标法计算含量，结果见表3。

3 检验结果的不确定度分析

3.1 建立数学模型

八珍益母丸中芍药苷含量测定的数学模型：

期中X：每丸中芍药苷的含量(mg/丸)，A样：样品的峰面积，A对：对照品峰面积，W对：对照品的称取量，W样：样品的称取量，W平均：供试品的平均丸重，P：对照品纯度，V样：样品稀释倍数，V对：对照品稀释倍数。

3.2 不确定度来源分析

八珍益母丸中芍药苷含量测定的不确定度来源主要有以下几个方面：对照品、供试品的称量(W对、W样、W平均)引入的不确定度、对照品和供试品溶液制备过程中稀释体积(V样、V对)引入的不确定度、对照品和样品峰面积(A样、A对)的重复性和准确性引入的不确定度。测定中由重复性所引起的不确定由方法学验证中的重复性数据表达，由准确性及其他诸多因素带来的不确定度由回收率测定的不确定度表达。

3.3 不确定度分量的量化

3.3.1 对照品纯度引入的相对标准不确定度 芍药苷对照品由中国食品药品检定研究院提供，仅给出纯度为94.9%，并未给定其不确定度信息，故在此不对其进行评定。

表1 对照品稀释过程玻璃量具校准和温度变化引入的标准不确定度

表2 重复性及回收率试验结果(n=6)

3.3.9 合成标准不确定度 将以上不确定度分量合成，得到八珍益母丸每丸含芍药苷的相对标准不确定度：

试验中测得样品中每丸芍药苷的含量为7.09 mg(批号：150202)，得到合成标准不确定度u(X)=1.43×10-2×7.09=0.10 mg。

3.3.10 计算扩展不确定度 U=Κ·u(X)，K取2，P=95%，则八珍益母丸每丸中芍药苷的扩展不确定度为0.20 mg。

3.3.11 测定结果的表示 根据不确定度评定结果，八珍益母丸每丸中芍药苷含量的测定结果可表示为X=(7.09±0.20)mg，其他批次结果及扩展不确定度见表3。

表3 样品含量测定结果

4 讨论

本研究通过检验检测过程和数学模型确定不确定度的来源，并通过计算各分量的合成不确定度来确定各个分量对总不确定度的贡献。研究结果表明，对照品的称量是主要的不确定度来源，其次是由测量的准确度和重复性引起的不确定度，供试品称量和稀释体积等分量对不确定度影响较小。因此，在检验工作中应使用高精度天平和增大对照品的取样量、定期对HPLC色谱仪进行校准检定，提高检验人员操作技术水平来提高检验结果的可靠性。通过对八珍益母丸中芍药苷测定的不确定度评价，明确了不确定来源，可以通过相应的措施减少误差，在进行结果判定时加入不确评定，是保证结果公平公正的有效方式。

[1] 国家质量监督检验检疫总局.测量不确定度评定与表示：JJF1059.1-2012[S].北京：中国计量出版社，2013.

[2] 中国合格评定国家认可委员会.化学分析中不确定度的评估指南：CNAS-GL06[S].北京：中国计量出版社，2006.

[3] 栗建明，候慧婵，顾利红，等.HPLC法测定白灵片中芍药苷的含量及不确定度评价[J].中国药房.2015，26(36)：5152-5154.

[4] 王磊，姚令文，程显隆，等.甘遂中大戟二烯醇HPLC定量方法的测量不确定度[J].中国药事，2015，29(2)：147-152.

[5] 寇光，刘玲，陶松，等.HPLC测定桉叶止咳糖浆中盐酸麻黄碱的不确定度评价[J].中国实验方剂学杂志，2013，19(17)：41-44.

[6] 赵昕，温瑞卿，王鑫，等.不确定度评估在双黄连口服液定量检验中的应用探讨[J].中国药事，2015，29(9)：951-957.

[7] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2015.

UncertaintyEvaluationonPaeoniflorinContentDeterminationofBazhenYimuPillsbyHPLC

MAXiaojing*，CUIYebo，GAONannan

(SipingCityInstituteforFoodandDrugControL，JiLinSiping136000，China)

Objective：To analyze the uncertainty of determination of paeoniflorin in Bazhen Yimu Pillls by HPLC and find out the effect factors of uncertainty.MethodsThe content determination method for Bazhen Yimu Pills in Chinese Pharmacopoeia(CP)2015 was applied for the study.The determination process and procedures were analyzed，and the combined uncertainty was calculated and finally the extended uncertainty were obtained in 95% confidence intervals.ResultsThe expanded uncertainty for the HPLC determination of paeoniflorin is 0.20 mg in each pill.ConclusionThe uncertainty of the experiment is mainly caused by the weight of standard，strict control of the weighing process will help to improve reliability and accuracy of test results.

Bazhen Yimu Pills；paeoniflorin；content determination；uncertainty；HPLC

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.12.020

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马晓静，主管药师，研究方向：药品检验；E-mail：maxiaojing1982@163.com

2017-01-25)