蔬菜农药残留快速检测——酶抑制法检测常见问题

鄯善县七克台镇农技推广站,新疆吐鲁番 838203

蔬菜农药残留快速检测作为一种定性的检测技术，因其快速、简便、灵敏、经济，适用于大样品的筛查检测，较多地应用于农产品批发市场、蔬菜生产基地、各大超市以及基层农产品质量安全检测机构的日常检测工作。

1 规范检测操作环节

1.1 检测室管理

检测室必须保持清洁、整齐、安静，禁止在检测室吸烟、饮食。各种仪器、器皿、试剂标志清晰。所有器具及药品应分类有序存放，并张贴明显的标签。仪器设备、物品使用完毕后，清洗或擦洗干净归还原处。严格按照标准要求保管好检测试剂，管理、维护、使用好检测设备，保持仪器设备始终处于良好状态。检测人员必须严谨务实，操作规范、准确，客观公正地做好检测记录结果，检测完毕后，必须切断水、电源，关好门窗后离开检测室。

1.2 药品的存放

酶、底物、显色剂易变质失效（通常药品的保质期为一年），其中酶是检测成功的关键。酶的种类、活性、纯度都会对检测结果造成很大影响，因此药品的日常存放非常重要。通常药品需在冷藏条件下存放，0～5℃为宜。已配置好的液体药剂（如没有用完的提取液、底物和显色剂）也要在此条件下存放，切勿冷冻结冰。另外，建议将配置好的溶液采取分装制存放，即取即用。

1.3 药品的配置

提取液（也称缓冲液）作为其他试剂配制的稀释剂，它的配置是关键的。提取液需用蒸馏水配置，规定值pH=0.8，在实际配置中应对pH值进行校正。底物用蒸馏水配置，显色剂用提取液配置。以上三种药品的配置要严格按照试剂瓶上规定的量加入蒸馏水和提取液，同时注意温度控制。这三种药品以及酶试剂需在室温条件下使用，即药品的温度在15～20℃之间为宜。

1.4 样品的选择和处理

叶菜类应去烂叶、枯叶、蕊叶;果实类从表皮至果肉1～2 cm处，果肉不宜取过多;含叶绿素和其他色素较高的蔬菜应采取整株（体）浸提，尽量避免过多色素浸出，干扰测定。若实验室有条件，对色素干扰严重的过滤液，可用活性碳脱色处理，过滤或离心后，取清液作为待测液。

葱（含有挥发性硫化物）姜（姜辣素）、蒜类（含硫挥发物，硫化亚磺酸如大蒜素等）、萝卜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中，含有对酶有影响的植物次生物质，往往由于基质效应引起的干扰产生假阳性。处理这类样品时，可采取整株（体）浸提，避免次生物质干扰。

1.5 移液器和试剂使用

使用移液器时，必须遵循器具专用原则:吸取酶、显色剂、底物的移液器贴上专用标签，移取试剂时一一对应使用，避免混用污染试剂。使用试剂时，严格遵循只出不进原则:从酶、显色剂、底物试剂瓶中移出的试剂，不得返回原试剂瓶中，以免污染原试剂。

2 检测值常出现的异常问题和解决办法

2.1 对照值偏小

首先要保证仪器良好的稳定性，同时确保提取液和药品均在室温状态下;其次将显色剂和底物加入提取液后的时间要严格控制，加入底物后应立即检测（加入底物10 s内即将比色皿放入仪器开始检测为宜），尽量缩短操作时间，否则对照值会偏小。

2.2 样品吸光值偏高

这种现象是由于酶本身活性低，样品待测液颜色深以及反应中化学、物理的干扰造成的。解决办法:一是将酶和其他药品的温度提高至室温;二是按上面提到的方法对这类蔬菜样品进行特殊处理。

2.3 检测结果中抑制率为负值

当样品出现较小的负值误差-10%以内，是在允许范围之内的。这是由检测员人为因素导致的。酶分解底物，分解物与显色剂结合的过程很快，检测员稍有耽搁或不熟练都会产生人为误差，导致抑制率为负值。

2.4 检测结果抑制率无效

一是试剂从冰箱取出后，未恢复至室温即进行检测。二是对照测试时间与样品测试时间相隔太久，导致对照与样品测试温度条件相差较大。三是被测样品色素干扰较严重。四是反应试剂取用量是否准确。

3 假阳性与假阴性

假阳性是由于酶活性降低或失活，底物不与之反应，从而不能被水解，无法与显色剂结合显色。假阴性是因为某些农药对酶抑制作用很小或无作用而产生的，表现出无农药残留的假象。另外，在反应过程中化学、物理干扰都有可能导致假阳性、假阴性的发生。