拉米夫定和奈韦拉平检测方法的研究进展

吴彦

（儿童发展与学习科学教育部重点实验室，东南大学生物科学与医学工程学院，江苏南京 210096）

目前，我国艾滋病的防治形势依然严峻。截至2017年7月底，全国报告现存活HIV病毒感染者/AIDS病人728 270例，死亡223 798例[1]。我国实行艾滋病免费抗病毒治疗政策，采用多种药物联合用药的高效抗逆转录病毒疗法，以实现疾病防治。拉米夫定和奈韦拉平是我国一线免费用药方案中的重要组成部分。在实际服药过程中，由于药物毒副作用和外部环境的影响，患者往往不遵从医嘱服药，导致用药依从性低，从而降低抗病毒治疗效果。而监测患者体内药物浓度能有效评价服药依从性，提高治疗效果。

目前研究者建立了不同生物样品中拉米夫定和奈韦拉平药物浓度准确定量的方法，但方法优缺点各有不同。张丽军等[2]曾从药物理化性质、LC-MS检测方法以及药代动力学参数三方面详细阐述LC-MS法用于检测血浆中抗艾滋病药物浓度的研究进展，但未提及从头发中检测药物浓度，以及其他分析检测技术。

本文从生物样品和检测技术角度，总结近年从不同生物样品中检测拉米夫定和奈韦拉平浓度的方法的优缺点，进而为后续抗HIV药物浓度的检测研究提供参考。

1 生物样品的选取

生物样品是药物检测研究中重要的实验对象，合适的生物样品更有利于实验研究。现有研究已选取多种生物样品定量检测人体内拉米夫定和奈韦拉平药物浓度。

本文对近几年来研究选用的生物样品进行梳理，发现选择的生物样品主要分为两大类。

（1）体液，如血浆、血液和尿液等。样品中药物浓度较高，对仪器检测要求低，可反映药物短时间内的浓度变化，但血浆的采集成本较高，储存要求严苛。

（2）固体组织，如头发等。样品中药物浓度较低，对检测方法要求高，但样品的采集成本低，易于储存，可反映药物长期的浓度变化。因此，血浆等样品适合短时间内药物浓度监测和用药依从性，而头发则更适合于长期服药依从性评价。

2 拉米夫定和奈韦拉平检测技术

为适应不同样品的检测要求，分析仪器从单一化向多种仪器联用发展，越来越多先进的分析方法被开发，并用于定量检测生物样品中拉米夫定和奈韦拉平。本文通过比较各种方法的技术参数，对国内外先进的检测方法进行分析，见表1。

2.1液相色谱法

由于血浆中药物浓度较高，邹尚荣等[3]就选用液相色谱，配以C18反相色谱柱，与紫外检测器相连，在波长为268 nm处进行检测，建立了液相色谱-紫外法（LC-UV），同时检测血浆中拉米夫定和奈韦拉平浓度。但该方法的定量限较高，不适合低浓度样品的检测。

2.2气相色谱法

相较于LC-UV法，气相色谱串联质谱法（GC-MS）能减少杂质峰的干扰，具有更好的灵敏度和特异性。Vogel等[4]建立了检测血浆中奈韦拉平浓度的GC-MS法，该方法的定量限低于LC-UV法。但抗HIV药物不易气化，需要衍生为易气化的化合物，从而导致实验操作繁琐。

表1 生物样品中拉米夫定和奈韦拉平检测的方法参数

2.3 液相色谱串联质谱法（LC-MS）

液相色谱串联质谱法（LC-MS）具有高灵敏度和高选择性，样本的前处理简单，尤其适合低浓度生物样品检测，可实现多种物质快速分离和同时定量分析，被广泛用于药物浓度检测研究。质谱系统常用的电喷雾电离离子化源（ESI）适合极性和弱极性物质检测，而抗HIV药物的极性也较强，现有研究主要采用ESI为离子化源。Kromdijk等[5]和李力等[6]就选用ESI正离子模式，分别建立检测血浆中拉米夫定浓度的LC-MS法。Valluru等[7]则选用ESI负离子模式建立LC-MS法，实现同时检测血浆中拉米夫定和奈韦拉平浓度，但回收率稍低于检测标准。对于药物浓度低的头发样品，Yan等[8]和Huang等[9]也选用ESI正离子模式，分别建立检测头发中拉米夫定和奈韦拉平浓度的LC-MS法。上述LC-MS方法均表现出良好的检测性能，并被用于长期依从性评价研究。

Sichilongo等[10]以 LC-UV、GC-MS和 LC-MS三种方法检测血浆中奈韦拉平浓度，对比发现LC-MS法检测限、定量限最低，方法特异性更好。

3 结论

梳理近年来抗HIV药物研究可以看出，由于血浆中药物浓度高，对检测要求低，研究者选用的生物样品以血浆等居多，用于临床药物浓度监测，评价短期用药依从性。随着检测技术的发展，头发作为新型生物样品，也逐渐被用于检测药物浓度，评价长期用药依从性。

较之HPLC-UV和GC-MS等方法，LC-MS法具有更高的灵敏度和选择性，是目前生物样品中拉米夫定和奈韦拉平的主要检测方法。此外，ESI离子化源检测范围较广，常用于LC-MS法测定拉米夫定和奈韦拉平。

生物样品中药物浓度的检测可评价患者服药依从性、指导个性化用药，对艾滋病抗病毒治疗具有重要意义。本文对国内外有关拉米夫定和奈韦拉平检测方法研究进行详细综述，将为后续拉米夫定和奈韦拉平等药物浓度检测方法研究提供参考。

[1]中国疾病预防控制中心.2017年7月全国艾滋病性病疫情[J].中国艾滋病性病,2017,(8):473.

[2]张丽军,姚亚敏,孙建军,等.LC-MS检测艾滋病常用药物浓度的研究进展[J].中国现代应用药学杂志,2009,26(13):1112-1115.

[3]邹尚荣,李燕青,周波,等.HPLC法同时测定人血浆中拉米夫定、齐多夫定和奈韦拉平的浓度[J].中国药房,2014,25(18):1665-1668.

[4]N.B.M.Vogel,J.C.Wasmuth,J.Emmelkamp,et al.Determination of Nevirapine in Plasma by GC-MS[J].Journal of Chromatographic Science,2010,48(2):91-94.

[5]W.Kromdijk,S.A.Pereira,H.Rosing,et al.Development and Validation of an Assay for the Simultaneous Determination of Zidovudine,Abacavir,Emtricitabine,Lamivudine,Tenofovir and Ribavirin in Human Plasma Using Liquid Chromatography-tandem Mass Spectrometry[J].Journal of Chromatography B,2013,919-920(12):43-51.

[6]李力,关业勍,沈琦,等.高效液相色谱质谱联用法同时测定人血浆中5种核苷类抗病毒药物浓度[J].中国临床药理学杂志,2015,31(9):747-750.

[7]R.K.Valluru,B.R.B.Phani,S.S.Kalyan,et al.High Throughput LC-MS/MS Method for Simultaneous Determination of Tenofovir,Lamivudine and Nevirapine in Human Plasma[J].Journal of Chromatography B,2013,931(6):117-126.

[8]J.Yan,J.Liu,B.Su,et al.Lamivudine Concentration in Hair and Prediction of Virologic Failure and Drug Resistance among HIV Patients Receiving Free ART in China[J].Plos One,2016,11(4):e0154421.

[9]Y.Huang,Q.Yang,K.Yoon,et al.Microanalysis of the Antiretroviral Nevirapine in Human Hair from HIV-infected Patients by Liquid Chromatography-tandem Mass Spectrometry[J].Analytical &Bioanalytical Chemistry,2011,401(6):1923-1933.

[10]K.Sichilongo,M.Chinyama,A.Massele,et al.Comparative Chromatography-mass Spectrometry Studies on the Antiretroviral Drug Nevirapine-analytical Performance Characteristics in Human Plasma Determination[J].Journal of Chromatography B,2014,945-946(2):101-109.