重组禽流感病毒（H5-H7）二价灭活疫苗（H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株）在种鸽中免疫的试验效果观察

王瑞深 陈艺强 陈 杰 梁柱良 钟冠环

（1.深圳市光明新区动物卫生监督所，广东深圳 518107；

2.深圳市光明集团有限公司光明鸽饮食发展分公司，广东深圳 518107）

疫苗免疫仍是预防禽流感的有效手段之一，被一些国家和地区采用。为满足H7亚型流感疫情防控急需，国家禽流感参考实验室研制了重组禽流感病毒（H5-H7）二价灭活疫苗（H5N1 Re-8株 H7-Re1株）。作为一种新结合型疫苗，此二价苗在鸡中的免疫已在两广推开，但在种鸽中的应用还较少，缺少相关的资料，并且有相当一部分鸽子养殖场对禽流感的防治不太重视，只免疫一次或只进行饮水免疫，甚至不免疫。基于此，为了探讨此种新型二价灭活疫苗在种鸽中的免疫效果，本实验选择了一个大型种鸽场进行接种免疫试验，在接种免疫后随机采集鸽血进行实验室检测，通过免疫不同的剂量和免疫后各时间段的抗体水平对比，得出更为有效的免疫方案，以期为该疫苗在种鸽中的推广使用提供参考。具体试验情况如下：

1 临床试验基本信息

1.1 重组禽流感病毒（H5-H7）二价灭活疫苗（H5N1 Re-8株 H7-Re1株）疫苗说明：

疫苗名称 作用与用途 用法与用量 贮藏与有效期重组禽流感病毒（H5-H7）二价灭活疫苗（H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株）2-8℃保存，有效期12个月批准文号 生产批号 生产厂家 生产日期 有效期兽药临字080012297 2017028 哈尔滨维科生物技术开发公司 20170630 20180629用于预防由H5亚型和H7亚型禽流感病毒引起的禽流感胸部肌肉或颈部皮下注射。2-5周龄鸡，每只0.3ml；5周龄以上鸡，每只0.5ml

1.2 临床免疫情况

1.2.1 免疫对象：种鸽。

1.2.2 免疫数量：2100羽。

1.2.3 免疫方式：胸肌注射。

1.2.4 免疫剂量（分三组）：（1）未进行免疫；（2）免疫0.3ml/羽；（3）免疫0.5ml/羽。

1.2.5 免疫后的应激反应：以未免组为参照。

（1）免疫0.5ml/羽的种鸽组第一个月死亡数量和死胎数量大幅度提高，产蛋数量同时大幅度下降，之后第二、第三个月死亡数量与参照组基本一致，死胎数量略高于参照组，产蛋数量开始回升，但对比参照组还是有着较大的下降。

（2）免疫0.3ml/羽的种鸽组在死亡数量和死胎数量上都高于未免参照组，产蛋数量同时下降，但对比免疫0.5ml/羽的种鸽组，免疫0.3ml/羽的种鸽组应激反应要轻微了许多。

1.3 血清采集

在免疫后21d、28d、60d、90d都分别随机采集三组种鸽的血清样本进行实验室检测。

2 实验室检测情况

2.1 检测项目

H5亚型禽流感抗体、H7N9亚型禽流感抗体。

2.2 检测方法

高致病性禽流感诊断技术（GB/T 18936-2003）：血凝与血凝抑制试验。

2.3 检测试剂（抗原、阳性血清）

2.3.1 试剂厂家：哈尔滨维科生物技术开发公司。

2.3.2 试剂批号：H5N1 Re-8株抗原（2017001），H5N1 Re-8株阳性血清（2016002）；H7N9 H7-Re1株抗原（2017003），H7N9 H7-Re1株阳性血清（2017002）。

2.4 仪器

90度V型血凝板，微量移液器，微量振荡器，离心机。

2.5 主要试剂

0.1mol/L PBS（PH7.2），阿氏液，1%的鸡红细胞悬液。

2.6 实验检测结果统计

2.6.1 未免组的检测结果：在免疫后21d、28d、60d、90d采集的血清样本经H5N1 Re-8株和H7N9 H7-Re1株的抗体检测未发现有抗体。

2.6.2 免疫0.5ml/羽的检测结果，见表1。

2.6.3 免疫0.3ml/羽的检测结果，见表2。

3 结果分析与讨论

（1）免疫0.3ml/羽的种鸽与免疫0.5ml/羽的种鸽经实验室检测，抗体水平有一定差异，免疫0.5ml/羽的抗体水平在免疫成功的种鸽中表现要稍微好些，但差异不大，而免疫0.5ml/羽的种鸽组在应激反应上表现得比较重，不利于企业的持续化生产，对企业造成了一定的影响，建议重组禽流感病毒（H5-H7）二价灭活疫苗（H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株）在种鸽中的免疫剂量以0.3ml/羽比0.5ml/羽为宜。

（2）通过免疫后不同时间段的对比，可以发现抗体水平在2个月后开始呈现显著的下降，在三个月后已经基本呈现在预警区，因此，只进行一次免疫的种鸽，在抗体水平上难以长时间保持在较高的水准，建议应当加强免疫，增强种鸽的抵抗力，且二次免疫时间应当间隔3个月以上。

（3）免疫二价苗后，种鸽H7N9的抗体水平在免疫后21d和免疫后28d都呈现较高的水准；通过各时间段的对比，H7N9的抗体水平都基本比H5N1的稍高，但由于血清采集是从大群体中随机抽取的，缺乏针对性，并且数量也不多，因此数据比对存在一定的偏差，并不能代表H5N1 Re-8株的免疫效果比H7N9 H7-Re1株的免疫效果差，也有可能与疫苗在制备过程中的抗原量配比有关。

表1

表2

（4）由于整个试验涉及面广，施行过程中避免不了各方面因素的影响，试验结果会存在一定的偏差，因此，本次试验结果只作为参考用。