氟保护漆Duraphat对恒牙釉质再矿化影响的体外研究

高文秀 佘睿 杨帆 孙宇 霍丽珺 雷雅燕

碳酸饮料对牙体硬组织的危害主要有两个方面［1－2］：①饮料中的酸对牙齿表面直接脱矿、破坏，其特有的发泡机制促进酸对牙釉质的脱矿作用；②饮料中的糖经微生物发酵产酸引起龋病。目前有研究表明氟保护漆可防止釉质脱矿，而对其促进再矿化的研究较少。本实验通过体外研究氟保护漆Duraphat对碳酸饮料引起恒牙釉质脱矿后再矿化的影响及作用，为碳酸饮料导致恒牙釉质脱矿的微创治疗提供实验依据和临床参考。

1 材料与方法

1.1 实验试剂及仪器

可口可乐（可口可乐饮料中国有限公司，pH＝2.77）；氟化钠（天津市风船化学试剂科技有限公司，中国）；氟保护漆Duraphat（高露洁棕榄有限公司，德国）；金刚砂片（DFS-Diamon，德国）；pHScan2（Eutech，马来西亚）；打磨机（Strong，南韩）；电热恒温培养箱（北京市永光明医疗仪器厂）；扫描电子显微镜（FEIQuanta200，荷兰）；X线能谱分析仪（FEIQuanta200，荷兰）。人工唾液：用ISO／TR10271标准配置。

1.2 方法

1.2.1 实验牙的收集及保存 收集12～25岁因正畸减数拔除的前磨牙30颗。纳入标准：牙体表面釉质完整、无龋、无裂纹、无白斑、非四环素牙、非氟斑牙，未经牙体和牙髓治疗。贮存于0.9%生理盐水中备用。

1.2.2 实验分组及处理 选择30颗前磨牙，用不含氟的抛光糊剂在低速涡轮机上用橡皮杯抛光牙冠，选择釉质颊、舌侧平滑面，制备成4 mm×4 mm×2 mm釉质切片，在釉面中心暴露2 mm×2 mm的开窗区，其余部分用两层抗酸性指甲油封闭。30颗前磨牙随机分为2组，每组15颗前磨牙，第1组每颗离体牙制备2个釉质切片，2个釉质切片随机分入A组，B组。A组釉质切片置于10 m l可口可乐中10 min后，去离子水冲洗，再置于人工唾液中1 h，每天循环4次，处理间隙置于人工唾液中，共7 d。可口可乐每次处理后更换，人工唾液每天更换，同样的方法用去离子水处理B组，实验过程所有样本置于37℃恒温箱中完成。第2组每颗离体牙制备3个釉质切片，3个釉质切片随机分入C、D、E组，每组15个样本，C组为Duraphat组，D组为2%NaF组，E组为空白对照组。采用A组方法处理所有釉质切片7 d后。C组釉质切片用Duraphat反复涂擦1 min，静置2 min后置于人工唾液中；D组釉质切片用2%NaF溶液反复涂擦1 min，静置4 min后置于人工唾液中；E组釉质切片不做处理，直接置于人工唾液中，实验过程中Duraphat涂布1次，2%NaF涂布2次，人工唾液每天更换，共7 d，实验过程中所有样本置于37℃恒温箱中完成。

1.2.3 扫描电镜观察和X线能谱分析 每组样本随机选取1枚釉质切片，导电胶将牙体试件依次固定于样品台上，喷金镀膜，真空状态下于高倍镜下（×5 000，×10 000）观察恒牙釉质切片表面形态。所有样本采用X线能谱分析，导电胶将牙体试件依次固定于样品台上，真空状态下于倍数（×500）下测量恒牙釉质表面钙、磷水平（重量百分比）。

1.3 统计学分析

2 结 果

2.1 恒牙釉质表面形态变化

扫描电镜观察显示，可口可乐处理组釉质表面粗糙，凹凸不平呈蜂窝状外观，可见单个釉柱表面呈现明显酸蚀损伤，釉柱低于相间的釉间质，釉间质呈薄壁状，部分倒塌倒伏，脱矿后形成的微孔隙清晰；去离子水处理组釉质表面形态平坦，未见明显孔隙。Duraphat组釉质表面可见大面积沉积物连接成片状，微孔隙几乎被覆盖，釉柱中心及釉柱间质形态模糊不清；2%NaF组釉质表面见分布均匀、细小的沉积物，微孔隙大部分被覆盖，釉柱间质形态较清晰；空白对照组釉质表面有少量沉积物，微孔隙部分被覆盖，仍可见清晰的釉柱中心及釉柱间质形态（图1）。

2.2 恒牙釉质表面钙、磷水平变化

X线能谱分析可口可乐组、去离子水组釉质表面钙、磷水平如表1所示；Duraphat组、2%NaF组与空白对照组釉质表面钙、磷水平如表2所示。

3 讨 论

釉质的脱矿与再矿化之间的临界pH值范围为5.0～5.5，可口可乐的 pH值为2.77，长期饮用易导致釉质脱矿［3］。Lussi等［4］体外研究发现由可口可乐引起乳牙釉质脱矿与可口可乐pH值，可滴定酸度和Ca2＋浓度有关，可滴定酸度越高，越易导致釉质脱矿［5］。Hamasha等［6－7］研究表明釉质脱矿与唾液流速、饮食习惯有关，包括饮用量、饮用频率、长时间不吞咽，饮后即刻刷牙、睡前饮用碳酸饮料等。本实验以可口可乐制备脱矿模型，采用 Carvalho等［8］提出的 pH循环法处理釉质切片，以模拟口腔内釉质脱矿与再矿化动态重复过程。扫描电镜观察发现可口可乐处理后釉质表面呈蜂窝状，釉柱低于相间的釉间质，釉间质呈薄壁状，部分倒塌倒伏。该结果与Worawongvasu等［9］研究相似。同时X线能谱分析可口可乐处理后恒牙釉质表面的钙、磷水平较正常对照组明显下降，差异具有统计学意义（P＜0.05）。结果与 Wang等［10］、Carvalho等［11］研究一致。说明可口可乐对恒牙釉质具有明显脱矿作用。

图1 5组恒牙釉质表面形态 （SEM，A：×5 000，B：×10 000）Fig 1 The surfacemorphology of permanent enamel of the 5 groups（SEM，A：×5 000，B：×10 000）

表1 A和B组恒牙釉质表面钙、磷水平（%，±s，n＝15）Tab 1 The Ca2＋ and P3＋contentof enamel surface of group A and B（%，±s，n＝15）

表1 A和B组恒牙釉质表面钙、磷水平（%，±s，n＝15）Tab 1 The Ca2＋ and P3＋contentof enamel surface of group A and B（%，±s，n＝15）

注：① 与B组比较P＜0.05

分组 钙（质量百分比） 磷（质量百分比）A（可口可乐组） 41.47±3.73① 18.17±0.77①45.16±3.67 18.67±0.44 B（去离子水组）

表2 C、D、E组恒牙釉质表面钙、磷水平（%，±s，n＝15）Tab 2 The Ca and P content of enamel surface of group C，D and E（%，±s，n＝15）

表2 C、D、E组恒牙釉质表面钙、磷水平（%，±s，n＝15）Tab 2 The Ca and P content of enamel surface of group C，D and E（%，±s，n＝15）

注：①与E组比较P＜0.05

分组 钙（质量百分比） 磷（质量百分比）C（Duraphat组） 39.72±3.94① 18.24±0.47①36.85±2.87 17.70±0.71 D（2%NaF组） 39.54±2.40① 18.02±0.77 E（空白对照组）

有许多研究发现涂布氟化物（Duraphat和2%NaF凝胶）后进行碳酸饮料pH循环可抑制碳酸饮料引起的釉质脱矿［12－14］。本实验中，扫描电镜观察发现Duraphat组恒牙釉质表面可见大面积沉积物连接成片状，微孔隙几乎被覆盖；2%NaF组恒牙釉质表面可见分布均匀、细小的沉积物，微孔隙被大部分覆盖；空白对照组恒牙釉质表面有少量沉积物，微孔隙部分被覆盖，仍可见清晰的釉柱中心及釉柱间质形态。说明氟保护漆Duraphat、2%NaF和人工唾液均可促进脱矿牙釉质再矿化，使用氟保护漆Duraphat后的釉质表面形态更接近正常的釉质表面形态，提示氟保护漆Duraphat对可口可乐引起的恒牙釉质脱矿后的再矿化效果优于2%NaF和人工唾液。Carvalho等［11］研究发现应用氟化物（Duraphat和2%NaF凝胶）后进行碳酸饮料pH循环，釉质表面钙、磷水平差异无统计学意义。Medeiros等［15］体外研究表明氟保护漆Duraphat可明显增加脱矿牙釉质表面硬度。本实验X线能谱分析结果显示，氟保护漆Duraphat处理后釉质表面钙、磷水平高于空白对照组，2%NaF局部处理后恒牙釉质表面钙水平高于空白对照组，而磷水平无明显升高，提示氟保护漆Duraphat促进可口可乐引起的釉质脱矿后的再矿化。

氟保护漆Duraphat含5%氟化钠，固化后在牙面形成黄色透明保护层，通过缓慢释氟，在釉面形成矿物沉积。其氟离子与唾液和牙釉质溶解产生的钙离子结合，在牙体表面生成氟化钙颗粒沉积，氟化钙颗粒不会立即溶解，可持续数周。当pH值降低时再溶解释放氟离子，游离氟与钙、磷结合形成氟磷灰石。釉质中氟磷灰石的增加能降低其溶解性，增强其抗酸性，进而抑制脱扩、促进再矿化。姚博文等［15］在已酸蚀釉质表面使用氟保护漆Duraphat后再次酸蚀，扫描电镜下仍可见大量沉积物，表明氟化物与牙釉质表面结合稳定，不易被碳酸饮料及刷牙等外力去除［13］。氟保护漆Duraphat对碳酸饮料引起恒牙釉质脱矿后再矿化作用有待今后临床试验研究进一步证明。此外，氟保护漆Duraphat具有操作简便，安全，有效，易于被接受等优点。综上所述，氟保护漆Duraphat可作为长期大量饮用碳酸饮料及口腔卫生不良引起的白垩色脱矿斑块微创治疗手段之一，为临床治疗提供更多选择。

本实验条件下可口可乐导致恒牙釉质明显脱矿，氟保护漆Duraphat可有效促进可口可乐引起恒牙釉质脱矿的再矿化，为碳酸饮料导致恒牙釉质脱矿的微创治疗提供实验依据和临床参考。

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