电化学发光免疫法定量检测乙肝病毒的临床应用

陆正贤，倪沈珏，曹利华

（江苏启东市人民医院检验科，江苏 南通 226200）

乙型病毒性肝炎在我国发病率比较高，我国总人口中，约有10%的人口为乙肝病毒携带者，且肝癌患者中，90%左右患者均存在乙型肝炎感染史；全球范围内约有3亿人携带有乙型肝炎病毒，也是肝硬化、慢性肝炎诱发的主要原因，所以在乙型肝炎防治中，早期诊断可为及时治疗提供依据[1-2]。在乙肝病毒感染检测中，乙肝病毒标志物是直接依据，所以能够对乙型肝炎病毒标志物结果准确反映出来的检测方法的应用至关重要。现阶段，在乙肝病毒标志物检测中，临床中主要采用酶联免疫吸附法与电化学发光免疫法[3]。本组研究针对本院29 239例疑似乙型肝炎患者进行研究，对电化学发光免疫法检测的临床应用价值进行探讨，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取本院2016年1月～2016年12月期间29 239例疑似乙型肝炎患者进行研究，其中男15 374例，女13 865例，年龄1～100岁，平均（51.7±12.6）岁。本组研究经本院伦理委员会批准，所有患者及家属均对本次研究知情，且签署了知情同意书；排除精神精病者、有出血倾向者、凝血功能障碍者及本次研究依从性差者。

1.2 方法 电化学发光免疫法：仪器E601型全自动电化学发光分析仪，试剂为原装配套试剂盒。清晨抽取患者空腹静脉血，在4℃条件下以4 000 r/min离心速率离心6 min，将血清分离出后，用电化学发光分析仪定量检测，操作严格按照试剂盒说明书进行。HBsAg定值参比血清由卫生部临床检验中心提供，批号200203；分别取浓度为0.1ng/ml、0.3 ng/ml、0.7 ng/ml的HBsAg定值参比血清，倍比稀释用阴性血清，按照1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32的比例用阴性血清对定值血清进行稀释后，用电化学发光免疫法进行检测。

1.3 观察指标 用电化学发光免疫法检测方法对乙肝病毒五种标志物的阳性检出率和不同浓度HBsAg定值参比血清的最低稀释浓度进行观察。五种标志物分别为乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝表面抗体（抗-HBs）、乙肝e抗体（抗-HBe）、乙肝核心抗体（抗-HBc）。

2 结果

2.1 电化学发光免疫法检测中，HBsAg阳性检出数为17 933例，阳性率61.33%（17 933/29 239）；抗-HBe阳性检出数为7 024例，阳性率24.02%（7 024/29 239）；抗-HBs阳性检出数为14 620例，阳性率50.00%（14 620/29 239）；HBeAg阳性检出数为12 876例，阳性率44.04%（12 876/29 239）；抗-HBc阳性检出数为18 908例，阳性率64.67%（18 908/29 239）。

2.2 电化学发光免疫法检测中，不同浓度（0.1 ng/ml、0.3 ng/ml、0.7 ng/ml）的HBsAg定值参比血清稀释后检测的最低浓度分别为0.13 ng/ml、0.19 ng/ml、0.63 ng/ml。

3 讨论

乙型肝炎病毒是诱发乙型病毒性感染的根本原因，乙型病毒性肝炎属于世界性疾病，且在我国，该病的发病率比较高[4]。发病早期，该病症状并不明显，所以在诊断时容易出现误诊、漏诊的情况，往往在症状明显时才能诊断出，但此时病情已发展至中晚期，需要给予患者持续性治疗，加重患者精神负担、经济负担及身体负担[5-6]。在对乙型病毒性肝炎检测中，乙肝病毒标志物检测是关键，用于乙肝病毒早期检查与鉴别，有利于乙型病毒性肝炎的早期诊断，为及时治疗及避免病情恶化提供了依据[7]。且随着HBV病毒新变异株的不断出现，在检测方法方面也需要不断的改进，所以在乙肝五项指标检测模式上也必呈现出多样化的发展趋势。

临床中对乙型病毒性肝炎诊断时，酶联免疫吸附法是传统检测方法，可实现机体对HBV感染免疫反应状态的检测，具有方便、快捷、价格低等优势，在大批量乙型病毒性肝炎筛查中比较适用[8]。但是该检查方法在检测中应用只能进行定性分析，且对部分弱阳性患者复查时可能出现阴性情况，且人为因素对酶联免疫吸附法应用于乙肝病毒血清标志物检测时，影响较大，例如终止反应后延时比色时间、加样后酶结合物间隔时间、反应温度及洗板次数等，导致检查结果失准[9]，出现漏诊情况，因无法定量检测，所以对检测真实浓度无法得知，对低水平HBV感染指标无法检出，也无法实现对HBV感染进行动态观察。而电化学发光免疫法是以电化学发光剂标记抗原（抗体），以三丙胺为电子供体，在电场中因电子转移而发生特异性化学发光反应，是化学发光与电化学的结合应用实现对乙肝病毒标志物的检测[10]。继放射免疫、荧光免疫、酶免疫、化学发光免疫后，电化学发光免疫分析技术成为新一代标记免疫测定技术，该技术不使用放射性物质，即可在快速检测、自动化及灵敏性等方面表现出巨大的潜能与优势，在生物医学领域内已经得到广泛应用，尤其是临床医学领域内，使医学诊断水平得到极大的提升。目前，在标记免疫测定方面，电化学发光免疫法属于比较先进的技术，具有重复性好、检测灵敏度高、安全无毒等优势[11]。在实际检测中，该检测技术采用的固相载体为顺磁性微粒，具有较大的比表面积，所以反应面积也相应增大，加之标志物循环利用，发光强度大、时间长，因此检测灵敏度比较高[12]。诸多研究结果显示，电化学发光免疫法定量检测乙肝病毒的优势在于高度敏感、测试范围宽、特异性强、重复性好，试剂稳定、无毒无害、无污染、有效期长，操作简单、易于自动化、耗时短等方面。在乙肝五项指标检测中，电化学发光免疫法定量对HBsAg检测中，HBV感染后HBsAg最早出现于血液循环中，以高浓度长时间存在，属于最常用的标志物；抗-HBs为保护性抗体，其存在表明乙肝的恢复以及曾经接种过乙肝疫苗；对HBeAg定量检测中，HBV传染性高及复制性强可通过该指标来判断；对抗-HBe定量检测中，该指标可反映出HBeAg的浓度，即可作为乙肝治疗效果的评价指标；对抗-HBc定量检测，该指标反应的是HBV既往感染情况，是HBV感染后最早出现的抗体。从本组研究结果看，阳性检出率方面，电化学发光免疫法检出HBsAg、抗-HBe、抗-HBs、HBeAg、抗-HBc为61.33%、24.02%、50.00%、44.04%、64.67%，提示该检测方法在乙肝病毒五项检测指标中，阳性检出率均比较高。

综上所述，在乙肝病毒定量检测中，电化学发光免疫法对乙肝病毒标志物的高检出率和高灵敏度，为乙型病毒性肝炎的临床诊治提供了可靠的依据。