鼻肺咳方抗炎抑菌作用研究*

★ 龚琴 李俊 张爱玲 饶小勇，2 罗晓健，2 陈生

(1.中药固体制剂制造技术国家工程研究中心 南昌 330006；2.江西中医药大学 南昌 330004；3 深圳市中医院呼吸科 广东 深圳 518033)

上气道综合咳嗽综合征(UACS )是指由于鼻部疾病引起分泌物倒流鼻后和咽喉部，甚至反流入声门或气管，导致以咳嗽为主要表现的综合征。鼻肺咳方源自广东省名中医高雪教授30余年研究治疗UACS的经验方，该方对细菌初犯鼻部，表现为鼻塞有涕，涕或黄或绿或白粘，少许喷嚏，鼻涕倒流均有很好疗效。主要由黄芩4g、鱼腥草8g、辛夷8g、蜜麻黄6g、蔓荆子8g、白前8g、紫苑8g、荆芥8g、陈皮8g、甘草2g等10味中药组成，具有通窍宣肺，清热止咳之功。主治湿邪伏于鼻窍引起的咳嗽、咽痒、鼻塞、鼻涕倒流，痰多，咳痰不爽，涕稠，色白粘或黄绿、脉弦滑等症。

根据其功能主治，本文通过对蛋清致大鼠足肿胀的影响和体外对金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、溶血性链球菌和铜绿假单胞菌的影响这两个实验来研究鼻肺咳方对急性早期炎症的抑制作用和体外抑菌作用，为其临床应用治疗急、慢性鼻窦炎及上气道咳嗽综合征提供科学理论依据。

1 材料

1.1 动物与菌种 SD大鼠，SPF级，雄性，48只，体重140～160g，湖南斯莱克景达实验动物有限公司，许可证号：SCXK(湘)2016-0002；金黄色葡萄球菌，批号：26001-12；肺炎链球菌，批号：31001-9a1；乙型溶血性链球菌，批号：32210-5a1；铜绿假单胞菌，批号：10104-8a1菌种均来源于中国食品药品检定研究院。

1.2 药物与试剂 鼻肺咳方由黄芩4g、鱼腥草8g、辛夷8g、蜜麻黄6g、蔓荆子8g、白前8g、紫苑8g、荆芥8g、陈皮8g、甘草2g(共68g)10味中药组成。受试药物制备方法：全方加13倍水量提取3次，每次提取时间为60min，水提液60℃旋转蒸发仪浓缩，醇沉至60%，静置20h，取醇沉上清液，回收乙醇，喷雾干燥得干粉，1g干粉相当于9.4g生药，由中药固体制剂制造技术国家工程研究中心中药制剂室提供，批号：20160129。

醋酸地塞米松片，0.75mg/片，安徽金太阳生化药业有限公司，批号：150302521；乙酰螺旋霉素片，广州白云山医药集团股份有限公司，规格：0.1g(10万单位)，批号：1160013。；营养肉汤培养基，250g/瓶，苏州京庆堂医药科技有限公司，批号：20130328；琼脂(Agar Powder)，Solarbio，500g/瓶，Cat# 1112L037；无菌脱纤维羊血， 500mL/瓶，杭州新锐生物工程有限公司，批号：20160526A；NAC液体培养基，250g/瓶，上海江莱生物科技有限公司，批号：20160322生理盐水，江西科伦药业有限公司，批号：A16010404-2。

1.3 实验仪器 足趾容积测量仪YLS-7B，淮北正华；超净工作台(MCV-B161S(T)日本SANYO)；CO2培养箱(MCO-17AIC日本SANYO)；高压锅(LDZX-30KBS)。

1.4 统计处理 采用Excel软件统计分析模块TTEST检验进行处理。

2 方法

2.1 对蛋清致大鼠足肿胀的影响[1-6]

2.1.1 动物分组、造模及给药 SD大鼠48只，随机分为5组，对照组，阳性药地塞米松组(1.2mg/kg)、鼻肺咳方高剂量(13.6g生药/kg)、中剂量(6.8g生药/kg)、低剂量(3.4g生药/kg)组，除对照组8只，其它组每组10只，受试药组灌胃相应浓度的鼻肺咳方，阳性组灌胃地塞米松溶液，对照组灌胃等容积蒸馏水，给药5d，每天一次，给药容量为10mL/kg，未次给药后0.5h动物腹腔注射440mg/kg戊巴比妥钠麻醉，于大鼠右后足趾皮下注射新鲜鸡蛋清0.1mL/只，复制足趾肿胀模型。

2.1.2 检测指标 实验当天在每只大鼠右后足正面踝关节上端处用记号笔作一标记，足趾容积测量仪测量足容积，作为造模前足趾容积。测量造模后0.5h、1h、2h、4h肿胀的足趾容积，计算大鼠足趾肿胀度及足趾肿胀抑制率。

肿胀率=造模后足容积-造模前足容积

抑制率%=(对照组肿胀度-给药组肿胀度)/对照组肿胀度*100%

2.2 体外抑菌实验[4-5,7-9]

2.2.1 菌种复苏活化培养 取所购菌株，将菌粉用相应液体培养基复苏24h，再接种到相应的琼脂培养基上活化24h，最后从琼脂培养基上再接种到液体培养基上，培养24h备用。培养条件：培养箱中，37℃恒温。(注：金黄色葡萄球菌用营养肉汤(或琼脂)培养基培养；肺炎链球菌和溶血性链球菌用羊血肉汤(或琼脂)培养基培养；铜绿假单胞菌用NAC液体(或琼脂)培养基培养)。

2.2.2 含药培养基制备与细菌接种 用2倍稀释法配制药物的10个梯度浓度药液，再将不同浓度的药液与相应的培养基1∶9混合(金黄色葡萄球菌用营养琼脂培养基培养；肺炎链球菌和溶血性链球菌用羊血琼脂培养基培养；铜绿假单胞菌用NAC琼脂培养基培养)制成含鼻肺咳方浓度为100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.5625、0.781，0.391、0.195mg /mL， 含乙酰螺旋霉素浓度为1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.01563、0.00781、0.00391、0.00196mg /mL的培养基。用棉签将金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、溶血性链球菌和铜绿假单胞菌接种于对应含药培养基的平皿中，同时制备3个菌的阳性对照(用生理盐水替代受试药)，于37℃，5%CO2中的培养箱中培养18～24h。每个药物浓度进行一次重复实验。

2.2.3 测定评价 37℃ 培养18～24h后观察结果，重复平皿均无菌生长的最低浓度即为受试药对该菌株的最低抑菌浓度(MIC)。

3 结果

3.1 对蛋清致大鼠足肿胀的影响 结果显示，鼻肺咳方高剂量(13.6 g生药/kg)、中剂量(6.8g生药/kg)能明显减轻造模后各时间段的大鼠足肿胀程度，与对照组比较有显著性差异(P<0.05，P<0.01)，其抑制率在造模后2h达高峰，高、中剂量抑制率分别为22.12%、17.24%，低剂量(3.4g生药/kg)对足肿胀度无明显影响；地塞米松对各时间点的足肿胀率均有明显的降低，见表1。

表1 鼻肺咳方对大鼠足肿胀的影响

续表1 鼻肺咳方对大鼠足肿胀的影响

注:与对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。

3.2 体外抑菌实验 结果显示，鼻肺咳方对金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、乙型溶血性链球菌、铜绿假单胞菌的MIC分别为100、50 、50、25mg/mL；乙酰螺旋霉素对金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌和乙型溶血性链球菌的MIC分别为1、0.00781、0.01563、0.00781mg/mL，见表2。

表2 鼻肺咳方的体外抑菌作用

4 讨论

鼻肺咳方主要由黄芩4克、鱼腥草8、辛夷8g、蜜麻黄6g、蔓荆子8g、白前8g、紫苑8g、荆芥8g、陈皮8g、甘草2g(共68g)等10味中药组成鼻肺咳颗粒处方，具有通窍宣肺，清热止咳之功。主治湿邪伏于鼻窍引起的咳嗽、咽痒、鼻塞、鼻涕倒流，痰多，咳痰不爽，涕稠，色白粘或黄绿、脉弦滑等症。根据其用于湿邪伏于鼻引起的咳嗽、咽痒可能与炎症反应有关，以及用于痰多，咳痰不爽，涕稠，色白粘或黄绿等症与上呼吸道常见致病菌金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、溶血性链球菌和铜绿假单胞菌感染相关，因此本研究通过早期急性炎症模型蛋清致大鼠足肿胀实验和体外抑菌两个实验来研究鼻肺咳方抗炎和抑菌作用。

本研究结果显示鼻肺咳方高剂量(13.6 g生药/kg)和中剂量(6.8g生药/kg)明显降低蛋清致大鼠足肿胀程度，减轻早期急性炎症的红、肿、痛等症，对足肿胀抑制率最高达22.12%、17.24%，其对炎症的抑制作用可能降低毛细血管通透性，减少炎性介质释放等；鼻肺咳方25～100mg/mL对金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、乙型溶血性链球菌和铜绿假单胞菌有明显抑制作用，可见鼻肺咳方可通过抑制炎症反应及抑制上呼吸道常见致病菌发挥一定的治疗作用，但其抗炎、抑菌作用机制及其它方面的药理作用如止咳、化痰等作用还有待进一步研究。

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