黄芩经不同方式处理黄芩苷保留量的差异

陈 茜

（辽宁省锦州市妇婴医院药剂科，辽宁 锦州 121000）

黄芩为唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根。春秋二季采挖，除去须根及泥沙，晒后撞去粗皮，晒干。味苦性寒，具有清热燥湿，泻火解毒，止血，安胎功效。主要用于湿温、暑温、胸闷、呕恶，湿热痞满，泻痢，黄疸，肺热咳嗽，高热烦渴，血热吐衄，臃肿疮毒，胎动不安。在中成药生产中，常以黄芩的提取物入药。主产于河北、陕西、辽宁、内蒙古、山东、黑龙江等地，其主要成分是黄酮类化合物，其中黄芩苷的含量最高，有很好的提取利用价值[1]。它的抗菌谱较广，能抑制多种细菌、皮肤真菌、钩端螺旋体等，对青霉素等抗生素产生抗药性的金黄色葡萄球菌，黄芩仍对其具有抑制的作用；黄芩还具有降血压、利尿、保肝、利胆、镇静、解除平滑肌痉挛、抗过敏等作用。在临床上，黄芩对小儿急性呼吸道感染、急性菌痢、传染性肝炎、肾盂肾炎、慢性气管炎等均具有良好的治疗效果。黄芩苷产品不但应用于天然纯植物药领域，还应用于人体及动物病的防治，恶性疾病防治以及化妆品等众多领域，其应用领域非常广泛，市场前景广阔，目前已成为国内外研究的热点，并且，黄芩药材在应用到制剂的过程中有很多不同的提取工艺，所以，本实验以黄芩中最重要的成分黄芩苷的保留量为指标，比较这些提取工艺的差异。本实验对黄芩资源的综合利用具有一定的参考意义。

1 仪器和试药

1.1 材料和试剂 黄芩药材（批号：110508，厂家：亳州市贡药饮片厂，产地：河北承德)、黄芩对照品（批号：110715-201117，中国食品药品鉴定研究院）、甲醇（色谱醇，天津化学试剂公司）、纯化水，磷酸（沈北化学试剂厂）、浓盐酸 (天津化学试剂公司)、无水乙醇（天津永晟精细化工有限公司）、及10%氢氧化钠（北京化工厂）均为分析纯、活性炭、PH试纸。

1.2主要仪器 L-2000型高效液相色谱仪、微量进样器（Ø=0.7，针长5.1）、旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂RE-52A）、恒温干燥箱 (精宏XMTD-8222)、水浴锅 (诺艺HH-6)、直型冷凝管、圆底烧瓶、调温生热套（ZDHW）、电子万用炉（220 V.AC/2000 W）、电子分析天平（AL204）、超声波清洗器 (KQ-250DE型)、10 mL、50 mL、100 mL量瓶、烧杯、蒸发皿、玻璃棒。

2 方法

2.1 提取工艺

2.1.1 煎煮法 取黄芩药材20 g，水煎煮2次，每次2 h，合并2次煎液，过滤，浓缩干燥，备用[2]916。

2.1.2 温浸法 称取黄芩粗粉20 g，溶媒采用蒸馏水，80℃水浴加热，提取2次。第1次加入溶媒10倍量，提取1 h；第2次加入溶媒8倍量，提取0.5 h。合并2次滤液，将滤液加热到40℃，加浓盐酸调pH值至1.5左右，保温60 min，取出再静置12 h。沉淀物用蒸馏水洗涤2次，于55℃干燥，备用[3]。

2.1.3 水提酸沉法 取黄芩药材20 g，加水煎煮3次，第1次2 h，第2、3次各1 h，合并3次煎液，滤过，滤液浓缩至密度为1.03～1.08(80℃)的浸膏，于80℃用2 mol/L的盐酸调节pH值至1.0～2.0，保温1 h，静置24 h，滤过，沉淀用水洗至pH值至5.0，再用70%乙醇洗至pH值为7.0，低温干燥，备用[2]612。

2.1.4 水提醇沉法 取黄芩药材20 g，水煎煮2次，每次1.5小时，合并煎液，过滤，滤液浓缩至相对密度1.18～1.22（80℃） 的清膏，放冷，加入乙醇使含醇量达60%～70%，静置12 h以上，取上清液滤过，滤液回收乙醇，浓缩，干燥，备用[2]495。

2.1.5 乙醇提取法 取黄芩药材20 g，粉碎成最粗粉，用90%乙醇提取3次，第1次2 h，第2、3次各1.5 h，合并提取液，回收乙醇，浓缩，干燥，备用[2]690。

2.1.6 乙醇加热回流法 取黄芩药材20 g，粉碎成粗粉，加75%乙醇浸泡16 h后，加热回流3次，每次2 h，滤过，滤液合并，回收乙醇并减压浓缩，干燥，备用[2]857。2.1.7活性炭吸附法 取黄芩20 g，加水煎煮2次，每次1 h，滤过，合并滤液，用2 mol/L盐酸溶液调节pH值至1.0～2.0，在80℃保温30 min，静置12 h；滤过，沉淀加8倍量的水，搅拌，用10%氢氧化钠溶液调节pH值至7.0，加入等量乙醇，搅拌使沉淀溶解，滤过，滤液用2 mol/L盐酸溶液调节pH值至2.0，在60℃保温30 min，静置12 h；滤过，沉淀用乙醇洗至pH值至4.0，加10倍量的水，搅拌，用10%氢氧化钠溶液调节pH值至7.0，每1000 mL中加入5 g活性炭，充分搅拌，在50℃保温30分钟，加入等量乙醇，搅拌均匀，滤过，滤液用2 mol/L盐酸溶液调节pH值至2.0，在60℃保温30 min，静置12 h；滤过，沉淀用少量乙醇洗涤，于60℃下干燥，备用[2]846。

2.2 对照品溶液的配制 精密称取黄芩苷对照品适量，加70%甲醇制成60 μg/mL的溶液，摇匀，即得。

2.3 供试品溶液的制备 取黄芩粗粉样品0.1 g，精密称定，置50 mL容量瓶中，加入70%乙醇40 mL，超声10 min，冷却，定溶至刻度，精密量取1 mL，置25 mL量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.4 测定波长选择 采用紫外分光光度计对黄芩苷对照品溶液在200～400 nm波长范围内进行扫描，在278 nm波长处有较强的吸收，结合 《中国药典》 (2010版一部)黄芩质量标准，选定280 nm为检测波长。

2.5 色谱条件 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)。以甲醇-水-磷酸溶液 (47∶53∶0.2)为流动相；流速为0.8 mL/min；检测波长：280 nm；柱温：25℃；理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2000[4]。2.6测定法 精密吸取对照品溶液与供试品溶液10 μL，注入液相色谱仪，测定，即得黄芩苷含量。

3 结果

3.1 线性关系考察 取黄芩苷对照品适量。分别配制成每1 mL为10 μg、20 μg、40 μg、60 μg、120 μg，进样量为10 μL，样品按上述色谱条件测定各峰面积。以峰面积积分值为纵坐标，各对照品的浓度为横坐标，绘制标准曲线；得回归方程：Y=34630X+22327，r=0.9998；黄芩苷浓度在10～120 μg/mL之间时与峰面积呈良好的线性关系，见图1。

图2 黄芩苷标准曲线

3.2 样品测定 分别精密称取不同提取工艺的黄芩浸膏粉，按2.3项下操作，在上述色谱条件下对《药典》中黄芩原药材及4批不同提取工艺下的黄芩浸膏粉进行HPLC分析，结果显示提取率分别为：水煎煮法为34.75%、温浸法为3.70%、水提酸沉法为8.55%、水提醇沉法为35.45%、乙醇提取法为24.10%、乙醇加热回流法为51.30%、活性炭吸附提取法为0.85%；转移率分别为：水煎煮法为51.98%、温浸法为6.90%、水提酸沉法为50.59%、水提醇沉法为37.66%、乙醇提取法为2.84%、乙醇加热回流法为63.56%、活性炭吸附提取法为4.68%。见表1。

表1 样品测定结果

4 讨论

不同乙醇浓度提取的黄芩苷含量不同，75%乙醇条件下黄芩苷含量最高，故选择75%乙醇做提取溶剂为适宜的溶剂[2]495。随温度的提高，提取率增加，达85℃时提取率最高，故乙醇加热回流提取时以乙醇微微沸腾为提取温度，不宜过高浪费乙醇和能源[2]690。本文采用HPLC法测定黄芩药材中黄芩苷的含量，黄芩苷与其他成分能够很好分离，专属性及重现性好，结果准确可靠，可用于该制剂的质量控制和分析[6]。

以上结果表明乙醇加热回流法提取黄芩苷的提取率最高，转移率也最高，水提酸沉法提取黄芩苷的纯度最高，活性炭吸附提取法提取黄芩苷的提取率最低，醇提法提取黄芩苷的纯度最低，转移率也最低。

[1]汪霞，张雪，廖哓嘉.不同提取工艺下黄芩浸膏粉中黄芩苷含量的测定研究[J].中国现代药物应用，2010，2(9):10-11.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典·中药制剂[S].北京：中国医药科技出版社，2010.

[3]Han Lujia ，Yan Qiaojuan ，Wang Zhengqiang.Study on extraction technque and separation method ofBalcalin[J].Transaction ofthe CSAE，2011，6(8):6-7.

[4]汪霞，张雪，廖哓嘉.不同提取工艺下黄芩浸膏粉中黄芩苷含量的测定研究[J].中国现代药物应用，2010，2(9):10-11.