对绵羊结核病病原体的研究

姜德相，王立文，董桂红

（吉林省畜牧业学校，吉林 白城 137000）

以往认为绵羊对结核病原体易感性差，临床病历不常见，很少有人报道和进行深入研究。由于近些年养羊业特别是育肥羊行业的兴起，饲养规模和密度增大使结核病在羊群中进行传播，同时还威胁着人类的身心健康。作者通过临床解剖收集27只具有典型病理变化的病历进行归纳总结，希望能够认清结核病在绵羊群中的流行情况并对结核病防治提供帮助。

1 绵羊结核病的实验室诊断和病原体类型

目前，按结核病病原体对易感动物的易感性，将其分为人型、牛型和禽型。关于绵羊结核病病原体没有具体表述，作者把近5年来自不同饲养场临床送检的27只病理变化典型的实验动物进行实验室诊断和分型。

1.1 实验室诊断

1.1.1 直接厚涂片法

（1）制片 取疑似结核结节内的干酪样、脓样标本0.05～0.1g，放于玻片中央，涂成20mm×25mm椭圆形，取不同结核结节至少涂2张片子，进行微火固定。其中有化脓性腹膜炎的病历，取脓样标本也同时进行检测。

（2）染色 滴加5%石炭酸复红液于玻片上，加温至有蒸汽出现后放置5～10min，水洗。之后，加5%盐酸酒精脱色数次，至淡红色为止，水洗，加美兰复染2～3min，水洗，自然干燥后镜检。

（3）镜检及报告 镜检至少检查100个视野，不得少于3～4min，未找到抗酸菌者为Z（-）。100个视野找到抗酸菌1～2条者，实报菌数。100个视野找到抗酸菌3～9条者报O（+）。100个视野找到抗酸菌10～39条者报T（++）。每个视野找到抗酸菌～10条者报N（+++）。每个视野找到抗酸菌10条以上者报 M（++++）。

（4）统计结果 以时间先后排序（干：代表干酪物，脓：代表脓汁）见表1。

（5）结果 27只临床病理变化典型病例，检出阳性率达77.8%，可见绵羊对结核病的病原体易感性较强。

1.1.2 分离培养

（1）培养基 常用于结核杆菌的分离培养基有改良罗氏培养基、酸性改良罗氏培养基、丙酮酸培养基和小川培养基。

（2）病料预处理法 酸处理法：此法适用改良罗氏培养基和丙酮酸培养基。取痰液标本或其它标本（剪碎后研磨）加2～4倍量4%硫酸液，室温处理20min，其间振荡2～3次，促进液化。碱处理法：取标本加2～4倍量的2%NaOH溶液，37℃处理30min。此法适用于酸性改良罗氏培养基和小川培养基。

（3）接种 取混匀的消化的病料液0.1mL，均匀地接种于培养基斜面上，每份标本至少接种两管。接种后，将试管斜放，1d后，竖立直于试管架上。也可以将消化的病料离心后，取沉淀接种效果更好。

（4）结果判定 接种后置37℃培养，每周观察一次，阳性者随时报告，阴性者在8周时报告之。阳性者报告抗酸菌培养阳性或以菌落数报告。菌落数占据培养基面1/4以下者为（+）；菌落数占据培养基面1/4以上，1/2以下者为（++）；菌落数占据培养基面1/2以上、3/4以下者为（+++）；菌落数占据全斜面者为（++++）。阴性者报告抗酸性菌培养阴性。

表1 涂片镜检结果

表2 菌型鉴定

根据结核分枝杆菌和其他分枝杆菌的鉴别依据：结核分枝杆菌（L－J：+ PNB：－ T2H：+），牛分枝杆菌（L－J：+ PNB：－ T2H：－），其他分枝杆菌（L－J：+ PNB：+ T2H：+）。

1.2 菌型鉴定

分离出抗酸性菌后，为了确定是哪一个型的分枝杆菌，则必须进一步进行鉴定。

鉴定培养基：改良罗氏培养基（L－J）。对氨基苯甲酸培养基（PNB），按0.5mg/mL（最终浓度）的PNB加入小川培养基。噻吩二羧酸酰肼培养基（T2H），取T2H 50mg，加入蒸馏水100mL中，使成为500μg/mL，取其1mL加入小川培养基中，混匀分装，凝固灭菌，最终浓度5μg/mL。

将21个阳性菌株制成悬液，按湿菌10μm重接种于鉴定培养基。观察结果见表2。

经过鉴别培养基培养后的结果和其他分枝杆菌鉴别对照，发现21个结核阳性病历均为牛型分枝杆菌感染，因为这些病历是来自不同时间，历时5年，又来自不同地区和不同饲养场搜集，整理，经过实验获得，可以说明绵羊的结核病基本上都是由牛型分枝杆菌的病原体感染造成的。

1.3 展望

加强对绵羊结核病调查和研究，摸清病原的特点，探索病原的流行和演化规律，制定相应的防治方法；加强对绵羊结核病耐药机制的研究，研制新型抗结核药物和新型疫苗。

随着绵羊结核病检测水平的不断提高、预警预报监测体系的不断完善和牛分枝杆菌功能基因组研究的深入，必将为绵羊结核病的防治带来更多的机遇，但也面临着巨大的挑战，对绵羊结核病的研究仍然是任重而道远。