口腔鳞状细胞癌中VEGF与Ki-67的表达及意义

安义 张椽

（1贵州医科大学第二附属医院口腔科 贵州 凯里 556000）

（2贵州医科大学第二附属医院病理科 贵州 凯里 556000）

口腔鳞状细胞癌（Oral Squamous Cell Carcinoma，OSCC）是口腔颌面部最常见的恶性肿瘤之一，约占口腔癌总数的80%以上。由于口腔癌具有早期广泛淋巴结转移的特点,而且约有60%的患者处于癌症的第Ⅲ和Ⅳ期,其生存率很低，目前的临床诊断和先进的治疗方法均不能有效地提高患者的生存率，其5年生存率并不理想，影响患者的生活质量和健康[1-2]。探讨OSCC的发病机制，对肿瘤标记物的研究，可以有助于早期诊断与防治，但在OSCC中这两种因子的表达和意义鲜有报道。本研究采用EnVision法检测VEGF与Ki-67在OSCC中的表达情况，旨在探讨其在OSCC中发生、发展的相关性及与病理组织学分级和淋巴结转移存在之间的关系，探讨两因子之间的相关性，为OSCC的诊断和治疗提供帮助。

1.材料与方法

1.1 标本来源

收集贵州医科大学第二附属医院2015—2018年间手术切除的30例口腔鳞癌组织存档蜡块及20例正常粘膜组织标本。男性19例，女性11例；年龄31～83岁，中位年龄60岁；有淋巴结转移10例，无淋巴结转移20例。标本均为首次病例，参照WHO《头颈部肿瘤病理学和遗传学》（2006年版）中对口腔鳞状细胞癌的诊断标准[3]进行复阅、诊断并分组。术前均未接受化疗或放疗等治疗。

1.2 试剂与方法

兔抗人VEGF单克隆抗体（ZA-0580）、兔抗人Ki-67单克隆抗体（ZA-0502）、PV-6001免疫组化检测试剂盒(兔kit)、DAB显色试剂盒和APES胶均采自北京中杉金桥生物有限公司。实验方法简述如下：每例标本均经10%中性甲醛固定，石蜡包埋，连续组织切片4μm厚，采用免疫组化EnVision法，按照试剂盒说明书操作步骤进行。

1.3 结果判定

VEGF中细胞质、细胞膜出现棕黄色颗粒者判定为阳性细胞，Ki-67中细胞核呈棕黄色颗粒者判定为阳性细胞。阳性结果判定根据Bee-sley和Mclaren分级方法[4]，按阳性细胞所占百分比并参考着色强度确定分级。用PBS作空白对照，用已知阳性OSCC切片作阳性对照。

1.4 统计学分析及处理

采用SPSS17.0统计软件分析处理，率用卡方检验，两者之间的相关性采用Spearman等级相关检验，以P＜0.05为差异有统计学意义判断。

2.结果

本组30例OSCC，男性病例中VEGF表达阳性13（68.4%）例，Ki-67阳性表达14（73.7%）例；女性病例中VEGF表达阳性8（72.7%）例，Ki-67阳性表达9（81.8%）例。以中位年龄为界，分为“≤60岁组”和“＞60岁组”两组。≤60岁组有15例，VEGF表达阳性10（66.7%）例，Ki-67阳性表达12（80.0%）例；＞60岁组有15例，VEGF表达阳性12（80.0%）例，Ki-67阳性表达11（73.3%）例。按组织分化程度分组，高分化组14例，中、低分化组16例，VEGF阳性率分别为42.9%（6/14）和75.0%（12/16），而高分化组和中低分化组Ki-67的阳性表达率分别为50.0%(7/14)和81.3%（13/16）。按是否有淋巴结转移分为有淋巴结转移组和无淋巴结转移组，其中10例发生淋巴结转移的OSCC组织7例VEGF表达阳性，8例Ki-67表达阳性，阳性率分别为70.0%和80.0%；而20例未发生淋巴结转移的OSCC组织中，VEGF和Ki-67表达阳性病例分别为12例和15例，阳性率分别为60.0%和75.0%。（表）

3.讨论

VEGF是一种高度特异性的有丝分裂原，刺激血管生成，导致纤维蛋白的降解，其作用非常广泛，与肿瘤的生长、浸润、转移和预后之间具有密切的关系。目前发现的主要受体有VEGFR-1、VEGFR-2和VEGFR-3。普遍共识是VEGF以旁分泌的方式调节肿瘤的血管形成，但也有证据表明，可能存在VEGF的自分泌机制，从而对肿瘤细胞分化产生调节作用，对肿瘤细胞的凋亡发挥抑制作用，肿瘤细胞生成增多，由它介导的肿瘤内皮细胞增殖和肿瘤微血管的生成促进了肿瘤的侵袭和转移[5]。肖欣[6]研究VEGF和MMP-9在口腔扁平苔藓（OLP）和OSCC中的表达情况，明显高于在NOM中的表达，且在OSCC中表达更高，呈现逐渐增高的趋势,提示VEGF可能与OLP的癌变存在密切联系。顾玉州等[7]研究结果表明，VEGF在OSCC中表达率为71.25%,其阳性表达与肿瘤的颈部淋巴结转移情况及五年生存率有关(P＜0.05)。本研究中，VEGF在OSCC中的表达率为70%，与有关文献基本一致，且提示OSCC组织中肿瘤血管明显增多，以满足肿瘤过度增生的需要[8-9]。Ki-67是Gerders等从霍杰金氏病L-428细胞株的粗提核成分接种小鼠制备而来的单克隆抗体，其功能目前认为与细胞有丝分裂有关[10-11]，其表达水平与肿瘤恶性程度之间关系密切，可反映肿瘤细胞的增殖活性，与肿瘤的发展、转移和预后高度相关。何伟[12]等研究Ki-67在NOM和OSCC中的阳性表达率分别为30.0%和79.2%，其在口腔鳞癌组织中的表达与肿瘤的临床分期、分化程度、有无淋巴结转移有关。在本研究中Ki-67的阳性表达率为75.0%，其表达差异具有统计学意义（P＜0.05），这与文献报道的表达情况基本一致。本研究发现两者之间无显著性差异，这与Valkovic等的研究结果相符合，表明肿瘤新生血管形成和肿瘤细胞增殖并不是一直相互依赖的两个过程。李培等[13]研究了Ki-67、VEGF和P16蛋白表达强度同PYM诱导化疗敏感性的关系发现其均呈现高表达，表达程度越高，其细胞增殖越活跃，处于增殖状态的细胞越多，因此对放疗越敏感，PYM诱导化疗的疗效越好。

综合分析本实验研究，VEGF和Ki-67表达阳性的状态与肿瘤的分期及淋巴结转移因素密切相关，两者表达具有正相关性。通过检测VEGF和Ki-67的表达，对临床治疗与预后有间接指导意义，但VEGF和Ki-67之间相互促进的关系及机制有待于进一步研究证实。

表 OSCC中VEGF和Ki-67的表达与临床病理特征的关系