黑菊芋经口急性毒性试验研究

姬妍茹，刘宇峰，杨庆丽，高 宇，孙宇峰，魏连会

（黑龙江省科学院大庆分院，黑龙江大庆 163319）

黑菊芋是以新鲜菊芋为原料，依据美拉德反应原理，利用独特的齿变式加热工艺加工而成的新型保健食品。鲜菊芋富含菊糖、氨基酸、维生素、膳食纤维和硒等营养成分，其中最为重要的功能性成分是菊糖，占菊芋干质量的70%以上，具有降血脂、双向调控血糖、改善肠道、防治便秘、促进矿物质吸收、防肥胖、抗肿瘤和提高免疫力等功能[1]。中医以菊芋块茎和茎叶入药，用于治疗热病、肠热下血、跌打骨伤。据报道，菊芋还有通便、利胆、利尿、健胃、滋补的功能，在民间被用来治疗糖尿病和风湿病[2]。鲜菊芋加工成黑菊芋后，颜色由白色或红色变为亮黑色，而且营养物质和挥发性成分的种类和比例都有所改变。例如，黑菊芋中的总糖略降低、还原糖升高、5-羟甲其糠醛和总多酚的含量均有所升高[3]，未检测到酸类、酚类和胺类3种挥发性成分存在，而且产生L-抗坏血酸二棕榈酸酯等新的挥发性物质[4]。试验以黑菊芋为受试材料进行小鼠经口急性毒性试验，初步评价其食用安全性，为黑菊芋新产品的推广提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

受试样品，黑菊芋，黑龙江省科学院大庆分院制备，为黑色质软块状物，无特殊气味，试验前将其研磨后加蒸馏水制成适当浓度的混悬液，于4℃冰箱中保存。

受试动物，SPF级昆明种小白鼠60只，雌雄各半，体重18～22 g，哈尔滨医科大学实验动物学部提供，动物合格证号SCXK（黑）2013-001。

试验条件，小鼠饲养于哈尔滨医科大学卫生检验中心实验室SPF级小鼠实验室，温度24±2℃，湿度50%±5%，提供符合要求的基础饮料和清洁水供动物自由摄食、饮用。

1.2 试验方法

1.2.1 预试验

取饲养6 d后的小鼠20只，雌雄各半，试验前禁食4～6 h，自由饮用清洁水。将雌雄小鼠随机分为2组，每组5只，处理组和对照组每组为10只小鼠，雌雄各半。精确称取受试样品13 250 mg，加蒸馏水充分研磨匀浆后，定容至50 mL成均匀悬液，24 h内灌胃3次，每2次之间间隔4 h，3次总剂量达10 000 mg/kg·bw，末次灌胃1～2 h后喂饲料和水。连续观察7 d，观察小鼠的外观、行为、活动、食欲、大小便颜色、体重变化和死亡情况。给黑菊芋后，连续观察7 d，并记录初始体重和试验结束时体重。发现小鼠生命体征良好，无死亡，无法确定黑菊芋的半致死剂量，因此正式试验采用限量法进行。

1.2.2 最大耐受量试验

取饲养6 d的昆明小鼠40只，雌雄各半，试验前禁食4～6 h，自由饮用清洁水。将雌雄小鼠随机分为2组，每组10只，处理组和对照组每组为20只小鼠，雌雄各半。处理组以预试验中同样浓度黑菊芋混悬液给小鼠灌胃，24 h内灌胃3次，每2次之间间隔4 h，3次总剂量达20 000 mg/kg·bw，末次灌胃1～2 h后喂饲料和水。空白对照组以同样方法灌胃蒸馏水，连续观察14 d，观察小鼠的外观、行为、活动、食欲、大小便颜色、体重变化和死亡情况。记录动物试验时的初始体重、1周时体重及试验结束时体重。

1.2.3 数据处理

1.2.4 脏器病例解剖检验

试验过程中，如果有小鼠死亡要及时尸检，观察其心脏、肝、脾、胃、肾等主要器官有无病变；如发现有可疑病变时进一步进行病理学检查；试验结束，如果没有小鼠死亡，也要随机抽取小鼠进行解剖，观察其心脏、肝、脾、胃、肾等主要器官有无病变，如发现有可疑病变时进一步进行病理学检查。

2 结果与分析

2.1 小鼠行为状况

经口灌胃后，黑菊芋组和对照组小鼠在14 d内均未出现断尾、举尾、震颤、抽搐，皮肤颜色正常，小鼠活动自如，饮食无异常，未有叫声异常、惊厥、运动失调、流涎、流泪、流鼻涕、呼吸困难、腹泻、便秘、肠胀气等现象发生，动物皮毛有光泽，未见死亡。

2.2 小鼠体重变化

黑菊芋小鼠经口急性毒性预试验结果见表1。

由表1的原始数据进行t测验分析，雄性处理组与对照组相比，t=4.832 4；雌性处理组与对照组相比，t=3.377 5，查t检验值临界表可知，t（8，0.05）=2.306，说明在α=0.05水平上，处理组小鼠的体重变化与对照组没有显著差异。

表1 黑菊芋小鼠经口急性毒性预试验结果

黑菊芋小鼠经口急性毒性正式试验结果见表2。

表2 黑菊芋小鼠经口急性毒性正式试验结果

由表2的原始数据进行t测验分析，雄性处理组与对照组7 d时体重变化相比，t=4.756 3，14 d时t=4.227 4；雌性处理组与对照组7 d时体重变化相比，t=3.982 5，14 d时t=4.001 8；查t检验值临界表可知，t（18，0.01） =2.101，说明在14 d的观察周期内，处理组小鼠的体重变化与对照组在α=0.01水平上无著差异。

2.3 脏器剖检分析

经14 d观察，黑菊芋组和对照组小鼠没有死亡，生命体征也未见异常，将饲喂14 d的小鼠解剖后，可见其心脏、肝、脾、肾等主要器官颜色、外观、大小比例、表面黏膜附着情况均正常，无组织结构肿瘤、结节、坏死、肥大等病理性变化；胃大小正常，黏膜无出血点，无坏死，胃内容物性状正常。

3 结论

小鼠经口灌胃黑菊芋后，14 d观察期内未见任何中毒症状，亦无死亡。依据《食品国家安全标准经口急性毒性试验》附录G中急性毒性剂量分级表标准及试验结果可知，受试样品黑菊芋雌、雄小鼠经口LD50均大于20 000 mg/kg·bw，属于实际无毒。