阿利维A酸原料药的微粉化工艺研究

杨玉金 唐舒棠 王绍辉

中图分类号 R943 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2018）07-0914-04

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.07.12

摘 要 目的：筛选阿利维A酸原料药的微粉化工艺。方法：以原料药粉碎后的粒径分布特征值[d（0.9）]和杂质A含量为指标，筛选阿利维A酸原料药的粉碎方式（万能粉碎机、球磨机、气流粉碎机）、粉碎气源（压缩空气、高压氮气）、粉碎压力（0.2、0.4、0.6 MPa），并进行验证试验。结果：最优工艺为采用气流粉碎机以高压氮气作为气源在0.4 MPa下粉碎；验证试验中3批原料药粉碎后的粒径分别为8.57、8.55、8.54 μm（均小于10 μm，RSD=0.15%，n=3），杂质A的含量与未粉碎前比较未见增加（均为0.07%）。结论：筛选的阿利维A酸原料药的微粉化工艺操作可行、质量稳定。

关键词 阿利维A酸；微粉化工艺；粉碎工艺；d（0.9）；杂质A

ABSTRACT OBJECTIVE： To screen the optimal micronization technology of Alitretinoin crude drug. METHODS： Using characteristic value of particle size distribution [d（0.9）] and the content of impurity A of crude drug after crushed as indexes， crushing method （universal pulverizer， ball crusher， airslide disintegrating mill）， crushing gas source （compressed air， high pressure nitrogen） and crushing pressure （0.2， 0.4， 0.6 MPa） of Alitretinoin crude drug were screened， and validation test was also conducted. RESULTS： The optimal technology was as follows as airslide disintegrating mill， high pressure nitrogen as gas source， at 0.4 MPa. In validation test， particle sizes for 3 batches of crude drug after crushed were 8.57， 8.55， 8.54 μm （<10 μm，RSD=0.15%， n=3）. The content of impurity A was not increased compared with before crushed （0.07%）. CONCLUSIONS： Screened micronization technology of Alitretinoin crude drug is feasible and stable in quality.

KEYWORDS Alitretinoin； Micronization technology； Crushing technology； d（0.9）； Impurity A

阿利维A酸（Alitretinoin）是一种内源性维甲酸，维甲酸类化合物包含了维生素A系列的代谢产物及其合成类似物。临床研究表明，维甲酸能调节多种代谢，促进细胞生长和运转，如细胞分化、增殖和凋亡[1]。阿利维A酸被证实可以用于3种恶性肿瘤即神经母细胞瘤、横纹肌肉瘤和滑膜肉瘤以及慢性手部湿疹的治疗[1-4]。1999年，美国FDA批准0.1%阿利维A酸凝胶剂用于治疗卡波济肉瘤[5]；2009年11月，加拿大批准阿利维A酸软胶囊上市，用于局部外用强效糖皮质激素无效的慢性手部湿疹患者。

药物在人体内的吸收速度常常由溶解性决定，固体制剂中的药物在被吸收前，必须经过崩解和溶解然后转为溶液的过程，如果药物不易从制剂中释放出来或药物的溶解速度极为缓慢，则该制剂中药物的吸收速度或吸收程度均达不到被人体吸收而发挥药效的要求；另一方面，某些药理作用剧烈、安全指数小、吸收迅速的药物如果溶出速度太快，可能产生明显的不良反应，且维持药效的时间也将缩短。在这种情况下，必须对制剂中药物的溶出速率进行控制[6-9]。原料药粒径是影响制剂溶出速率的关键质量属性。研究表明，阿利维A酸的生物药剂学分类为Ⅳ类，其在水中的溶解度极低[10]。因此，阿利维A酸释放过快或者过慢均不利于其在体内的吸收，其溶解行为对生物利用度有极大的影响。为了能够有效控制阿利维A酸制剂的释放速度，将其控制在合理范围内，必须对阿利维A酸的粒径分布进行有效控制。由于阿利维A酸为共轭多烯类化合物，在空气中极易吸潮氧化，在制剂研究中对其开展粒径控制的文献报道较少，笔者对其进行了相关的粉碎工艺研究，以期为制备可供制剂生产的粒度合格的阿利维A酸原料药提供参考，同时为这类原料药的粒度控制方法的建立提供参考。

1 材料

1.1 仪器

YQ100-1气流粉碎系统（上海赛山粉体机械制造有限公司）；Malvern Mastersizer 2000激光粒度分析仪和Hydro 2000 MU湿法进样器（英国马尔文仪器有限公司）；LC2010A高效液相色譜仪（日本岛津公司）。

1.2 药品与试剂

阿利维A酸对照品/原料药（重庆华邦胜凯制药有限公司，批号：ALI-160301，纯度：99.90%，杂质A：0.07%）；阿利维A酸杂质A（阿利维A酸氧化杂质，批号：ALI-A-151201，纯度：98.90%）、杂质B（维A酸，批号：TRA-160204，纯度：99.78%）、杂质C（异维A酸，批号：ISO-160101，纯度：99.85%）、杂质D（11-cis-维A酸，批号：ALI-D-160201，纯度：98.67%）对照品均来源于重庆华邦制药有限公司；聚山梨酯80、甲醇、冰乙酸、正己烷、十二烷基磺酸钠等均为分析纯，均来源于国药化学试剂有限公司。

2 方法与结果

2.1 粒度测定方法

2.1.1 进样方式和进样器的选择

参考2015年版《中国药典》（四部）方法[11]，分别选用干法进樣器和湿法进样器对微粉后的成品进行测定。结果显示，湿法进样器下成品的粒径测定结果与显微镜下标尺测量结果更为接近，由于阿利维A酸原料药的粒径分布特征值[d（0.9），代表占总粒子量90%的粒子对应的粒径]均小于20 μm，干法进样器的测定结果受到本品分散效率的影响，与显微镜下的观察结果差异较大，故选择湿法进样器进行后续试验中本品粒度的测定。

2.1.2 测定条件的确定

参考2015年版《中国药典》（四部）方法[11]，在前期试验中，对测定方法中各条件[包括：分散介质（水、己烷）、分散剂（0.2%聚山梨酯80水溶液、0.1%十二烷基磺酸钠水溶液）、吸光度（0.01、0.005、0.02）、搅拌速度（800、 1 000、1 200、1 500、1 600、1 900 r/min）、平衡时间（0.5、1、2、3、4、5 min）、测量时间（2、5、10、20 s）]以及供试品溶液制备方法等进行筛选，确定最优的测定条件如下。

（1）分散介质：水；分散剂：0.2%聚山梨酯80水溶液；成品折射率：1.678；成品吸光度：0.01；分散介质折射率：1.33；搅拌速度：1 500 r/min ；平衡时间：1 min；测量时间：10 s；遮光度范围：5%～15%；分析模型：通用模型；结果类型：体积分布。

（2）供试品溶液制备：称取微粉阿利维A酸样品约30 mg，置于50 mL烧杯中，加30 mL分散剂，超声（频率：40 kHz，功率：120 W）并搅拌25 min，即得到分散均匀的供试品溶液。

2.1.3 测定方法

在湿法进样器中加入800 mL分散介质，系统对光及背景扣除完成后，加入供试品溶液，使遮光比在5%～15%，平衡1 min后开始测定，重复测定5次，记录d（0.9），取平均值。

2.1.4 测定方法验证结果

参照《中国药典》要求[11]对上述粒度测定方法进行系统方法验证。经方法验证结果表明，采用此方法测定本品粒度，满足粒径测定结果。平行6次测定结果的RSD[d（0.1）]≤10%，RSD[d（0.5）]≤6%，RSD[d（0.9）]≤10%，符合2015 年版《中国药典》（四部）通则粒度方法中第三法[11]的相关规定。

2.2 有关物质含量测定方法

2.2.1 色谱条件

色谱柱：Waters Sphorisorb ODS1（150 mm×4.6 mm，3 ?m）；流动相：甲醇-水-冰乙酸=（700 ∶ 294 ∶ 6，V/V/V）；采用紫外检测器，检测波长：350 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。

2.2.2 溶液制备

（1）供试品溶液：称取待测样品20 mg，置于20 mL棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

（2）自身对照溶液：精密吸取供试品溶液1.0 mL，置于100 mL棕色量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

（3）杂质B对照品贮备液：称取杂质B对照品20 mg，置于20 mL棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

（4）阿利维A酸对照品贮备液：称取阿利维A酸对照品20 mg，精密称定，置于20 mL棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

（5）系统适用性溶液：精密移取阿利维A酸对照品贮备液1.0 mL和杂质B对照品贮备液0.5 mL，置于同一100 mL棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

（6）杂质定位溶液：分别称取杂质A、杂质C、杂质D对照品20 mg，精密称定，分别置于3个不同的20 mL棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为杂质A、杂质C、杂质D对照品溶液。移取杂质A对照品溶液0.15 mL，杂质C、杂质D对照品溶液各0.1 mL，杂质B对照品贮备液0.5 mL，置于同一100 mL棕色量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.3 测定方法

（1）取杂质定位溶液进样，记录色谱图，各杂质出峰顺序分别为杂质A、杂质C、杂质D、杂质B。

（2）取系统适用性溶液进样6次，记录色谱图，阿利维A酸与杂质B峰的峰面积RSD均未超过2.0%（如超过，本次试验结果不可用）。

（3）取供试品溶液进样，记录色谱图（供试品溶液记录色谱图中如有与杂质定位溶液记录色谱图中杂质A、杂质C、杂质D、杂质B保留时间一致的色谱峰，则判定供试品溶液中的杂质为杂质A、杂质C、杂质D、杂质B）。

（4）取自身对照溶液进样，记录色谱图，计算杂质含量。

①杂质含量计算公式如下：

外标法计算杂质B含量公式：杂质B（%）=（A样×C对）/（C样×A对）×Ps×100%。式中：A样为供试品溶液中杂质B峰的峰面积；C样为供试品溶液的质量浓度（?g/mL）；A对为杂质B对照品溶液中主峰的峰面积；C对为杂质B对照品溶液的质量浓度（?g/mL）；Ps为杂质B对照品的纯度（%）。

②其余杂质含量计算公式：X（%）=Ax/A自×RRF×100%。式中，Ax为供试品溶液中其余杂质（除杂质B外）的峰面积；A自为自身对照溶液中阿利维A酸主峰的峰面积；RRF为校正因子（杂质A的相对校正因子为1.217 1，杂质C的相对校正因子为0.963 0，杂质D的相对校正因子为2.179 0，未知杂质按1计算）。

③总杂质含量计算公式：总杂质=已知杂质总量（%）+未知杂质总量（%）

2.3 原料药粉碎方法筛选

取适量纯度为99.87%的阿利维A酸原料药，分别用万能粉碎机（转速：2 500 r/min）、球磨机（转速：2 500 r/min）以及气流粉碎机（高压氮气，0.6 MPa粉碎壓力）进行粉碎试验。按“2.1”项下方法进行粒度测定。按“2.2”项下方法用色谱法进行有关物质测定以及纯度[纯度（%）=100%-总杂质含量]计算，结果见表1。

从表1可以看出，阿利维A酸采用万能粉碎机和球磨机进行粉碎后d（0.9）均大于10 μm，而且在粉碎过程中杂质A分别由0.07%增加到了0.56%和0.42%，超出了制剂质量要求。采用气流粉碎机进行粉碎，d（0.9）均小于10 μm，杂质增加不明显。因此选用气流粉碎机对阿利维A酸进行粉碎。

2.4 气流粉碎机的气源筛选

在同一气流粉碎机上分别用压缩空气和高压氮气在粉碎压力为0.6 MPa下对阿利维A酸进行粉碎，检测样品，结果见表2。

从表2可知，采用压缩空气作为气源，阿利维A酸粉碎过程中杂质A由0.07%增加到0.22%，增加明显；采用高压氮气作为气源，阿利维A酸粉碎过程中杂质不变，无增加趋势。

2.5 气流粉碎机粉碎压力筛选

在同一气流粉碎机上，采用高压氮气作为气源，采用不同的逐步降低的粉碎压力对阿利维A酸进行气流粉碎，检测样品，结果见表3。

从表3可以看出，当粉碎压力分别为0.2、0.4、0.6 MPa时，粉碎得到的阿利维A酸粒径分布d（0.9）分别为11.21、8.52、7.96 μm，因此粉碎压力为0.4、0.6 MPa时可以满足粉碎后d（0.9）小于10 μm的要求，而且粉碎过程中杂质不增加，纯度不下降。

2.6 验证试验

在同一气流粉碎机上，采用高压氮气作为气源，粉碎压力为0.4 MPa，进行3.0 kg阿利维A酸原料药的粉碎，3批样品测定结果见表4。

从表4可以看出，当采用高压氮气为气源、粉碎压力为0.4 MPa时粉碎得到的阿利维A酸d（0.9）的均值为8.55 μm，3批粒度分布的RSD为0.15%，粉碎过程中杂质不增加，纯度不下降。由此证明此工艺条件稳定可靠。

3 讨论

为解决对空气敏感的阿利维A酸原料药的粒度分布控制的问题，笔者采用了3种不同粉碎方法，并对筛选得到的最优方法气流粉碎法的气源和粉碎压力进行了筛选，以粉碎后原料药的粒度分布、杂质增长情况和原料药的纯度为指标考察了3种粉碎方法优劣。以高压氮气为气源，在惰性气体的保护下，阿利维A酸原料药粉碎过程中不与氧气接触，避免了氧化杂质的增大；在粉碎压力为0.4 MPa时，气流粉碎机磨盘中物料对撞力度足以将阿利维A酸原料药颗粒粉碎至d（0.9）为10 μm以下。最终确定了工业化粉碎阿利维A酸原料药的方法。提供了在空气中对易氧化的化合物批量粉碎的新方法。

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（收稿日期：2017-10-09 修回日期：2017-11-16）

（编辑：刘 萍）