调味品中玫瑰红B的检验方法优化

现状及危害

玫瑰红B又称罗丹明B、碱性玫瑰精,俗称花粉红,是一种鲜桃红色的人工合成染料。经老鼠试验发现,罗丹明B会引起皮下组织生肉瘤,被怀疑是致癌物。卫生部《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂名单》第一批中禁止玫瑰红B(罗丹明B)用作调味品着色。但为了获得好的卖相,玫瑰红B(罗丹明B)的滥用现象依旧存在于食品领域,但调味品中玫瑰红B(罗丹明B)的检测目前没有国家标准,只有针对进出口食品的SN/T 2430-2010《进出口食品中罗丹明B的检测方法》,该标准采用乙酸乙酯/正己烷=1：1提取,GPC净化,耗时长、成本高、回收率最高只能达到70%,且容易交叉污染。

目前检测方法探索

关于玫瑰红B(罗丹明B)的检测方法,目前国内外主要集中在检测方法的选择、提取试剂的选择、净化方法的选择、本底分析判定、快速检测试剂盒的研究等方面。检测方法集中在薄层色谱法、液相色谱紫外检测法、液相色谱荧光检测法、液相色谱质谱联用法,提取试剂有传统的乙酸乙酯/环己烷体系,还有创新改进的乙腈、酸化乙腈、乙醇/水、乙醇一氨水等,净化方法除凝胶外,多集中在固相萃取,如C18、MCX、PCX固相萃取等,固相萃取可以得到比较干净的待测液,但步骤相对繁琐。

实验室方法优化

优化说明

针对目前玫瑰红B检验的这些问题,实验室在原标准方法的基础上，优化了检验方法，改变了提取试剂和净化方法，提取试剂采用价格便宜的甲醇溶液，净化方法采用quechers方法配备的净化管（150mgMgSO4、50mgPSA、50mgC18混合）净化，大大节省了成本、提高了效率。

液质联用采用C18柱，甲醇/0.1%甲酸水作为流动相梯度淋洗可得到干扰较少的峰。经检验，实验室方法最高回收率达到99.5%，在0.5ng/mL～50ng/mL范围内，相关系数为0.995，重现性良好。阳性样品对比，未折回收率时，优化方法的结果比采用SN/T 2430-2010、GB/T23496-2009和地方标准的高，折完回收率二者结果相当，证明甲醇做作为提取剂可充分提取所测物质，而MgSO4/PSA/C18作为净化剂在净化的基础上对物质的回收影响不大，可采用这种提取和净化方法。

对甲醇提取时间和提取次数的优化探索实验见表1，通过回收率的计算，最终选定10mL甲醇超声1h，提取1次。

表1 不同提取条件下玫瑰红B的回收率

实验步骤

提取

称取1.00g样品（精确至0.01g）于50mL 离心管中，准确加入10mL 甲醇（3.1），于旋涡混匀器上混合提取1min，再超声提取60min后，于4000r/min离心5min，取上清液1mL于净化管中（3.3）净化后，离心，过0.22μm微孔滤膜后进液相色谱-质谱仪。测定

液相色谱-质谱/质谱条件

a） 色谱柱：C18柱，2.1mm（内径）×100mm，1.7μm，或相当者；

b） 流动相：乙腈——0.1%甲酸，梯度洗脱程序见表2；

表2 流动相梯度洗脱程序

c） 流速：0.30mL/min；

d） 柱温：40 ℃；

e） 进样量：5μL；

f） 离子源：电喷雾离子源；

g） 扫描方式：正离子；

h） 检测方式：多反应监测（MRM）；

i） 质谱/质谱图见图1

图1 玫瑰红B的质谱图

结果分析

本实验室通过对150批次辣椒粉、50批次火锅底料、3批次调味酱的检测结果显示，基质对本方法的影响不大，能保证较高的回收率，经净化管净化，可得到较干净的待测液，回收率高，重现性好，测定低限均为0.005mg/kg，可用于调味品中玫瑰红B的检验。