甲氨蝶呤微乳对小鼠银屑病模型的影响

吕凤艳 王晓刚

摘要 目的：探討甲氨蝶呤微乳对小鼠银屑病模型的影响。方法：对于雌激素期的小鼠阴道分别给药，分别为0.1%甲氨蝶呤微乳、0.2%甲氨蝶呤微乳和0.1维A酸软膏，1次/d，给药持续10d，10d后检测小鼠阴道上皮基底细胞有丝分裂指数;对于小鼠尾部分别给药：分别为0.1%甲氨蝶呤微乳、0.2%甲氨蝶呤微乳和0.1%维A酸软膏，1次/d，给药持续 lOd，lOd后考察小鼠尾部颗粒层形成情况及皮肤厚度。结果：甲氨蝶呤微乳对小鼠雌激素期阴道上皮有丝分裂具有明显的抑制作用，更加有效地促进了小鼠尾部颗粒层形成情况及皮肤厚度。结论：甲氨蝶呤与维A酸软膏比较，更能有效地促进银屑病样小鼠模型恢复。

关键词 甲氨蝶呤微乳;银屑病;模型

甲氨蝶呤（MTX）可以抑制二氢叶酸还原酶，同时干扰叶酸代谢，进一步发挥其抗肿瘤作用，在白血病、绒毛膜上皮癌、肝癌等恶性肿瘤中有广泛应用[1]。在银屑病的治疗中，甲氨蝶呤也发挥着重要作用，特别是用于严重银屑病的治疗[2]。甲氨蝶呤治疗银屑病的作用机制还不完全明确，银屑病动物模型在我国也没有成熟的建模方案[3]。小鼠阴道上皮在雌激素期的生长特点与银屑病相似，同时，小鼠尾鳞表面也具有相似的生长特点，所以得到广泛应用。本次研究利用以上两种不同的时期、部位的上皮为模型，进一步探讨甲氨蝶呤微乳的应用价值。

资料与方法

药品与试剂：0.1%甲氨蝶呤微乳和0.2%甲氨蝶呤微乳，山东医专附属医院药剂科自制;维A酸软膏，重庆华邦制药股份有限公司，批号：12214;己烯雌酚原料药，北京市京润生化制造有限公司，批号：20100615;秋水仙碱原料药，连云港锦港技术有限公司，批号：20130308。

试验动物：昆明小鼠，18～26g，由山东医学高等专科学校试验动物中心提供。

试验方法：①小鼠阴道上皮模型创建：雌性小鼠40只，给予己烯雌酚0.2mg/只，11次/d，共3d（d0～d2）。随机分组为4组，每组10只，分别为空白对照（生理盐水）组、阳性对照（维A酸软膏）组、甲氨蝶呤微乳高剂量组、甲氨蝶呤微乳低剂量组。d3～d9各组经阴道给药分别为：空白对照组为等体积生理盐水;阳性对照组为维A酸软膏（0.2 g/只）;高剂量组为0.2%甲氨蝶呤微乳（0.5mg/kg）;低刘量组为0.1%甲氨蝶呤微乳（0.5mg/kg），均为1次/d。最后1次给药后于当天上午9：00给每只小鼠腹腔注别秋水刊碱2mg/kg，6h后断颈处死小鼠，取阴道上皮组织。固定、包埋、染色。用光学显微镜观察细胞有丝分裂，计数300个阴道基底细胞的有丝分裂数。②鼠尾鳞片模型：昆明小鼠40只，随机分成4组，即空白对照组、维A酸软膏对照组、甲氨蝶呤高剂量组和甲氨蝶呤低剂量组。空白对照组给予生理盐水;阳性对照组给予维A酸软膏;高剂量和低剂量组甲氨蝶呤微乳，各试验组每天涂抹尾部1次，共1周，给药2h后，颈椎脱断处死小鼠，尾背部皮肤一长条（0.1cm×0.5cm），固定、包埋、染色。在光学显微镜下逐一观察每鼠的尾部鳞片。凡是一个鳞片有连接成行的颗粒层细胞者，即为有颗粒层的鳞片。

统计学分析：采用SPSS17.5进行方差分析，（x±s）表示计量资料，使用最小显著性差异检验进行组间比较。结果

上皮细胞有丝分裂指数：甲氨蝶呤微乳高、低剂量组与维A酸组明显抑制小鼠阴道上皮细胞有丝分裂（有丝分裂指数，P<0.05、P<0.01），见表1。

甲氨蝶呤微乳对小鼠尾鳞片颗粒层形成的影响：与空白对照组相比，MTX微乳低剂量与维A酸软膏对小鼠尾部鳞片颗粒层形成有促进作用（颗粒层的鳞片数，P<0.05）;甲氨蝶呤微乳高剂量组对小鼠尾部鳞片颗粒层形成有促进作用（颗粒层的鳞片数，P<0.01），见表2。

讨论

甲氨蝶呤可以抑制表皮细胞的增值，增强免疫细胞的作用，进一步起到治疗银屑病的作用，同时，甲氨蝶呤还会抑制表皮增殖。近年研究表明，微乳作为透皮药物载体，能够使被包容的药物分散度提高，并且微乳的结构能够改变微乳的亲和力，有利于药物进入并突破角质层的屏障作用，同时微乳中的成分具有渗透促进剂的作用，可以增大药物透皮速率和透皮量，维持恒定的有效血药浓度[4]。本试验研究表明，MTX微乳在0.5mg/kg剂量下和维A酸乳膏0.2g/只剂量下均可以显著抑制小鼠雌激素期阴道上皮的有丝分裂。与维A酸乳膏相比，甲氨蝶呤微乳高低剂量组抑制作用更强;与甲氨蝶呤微乳低剂量组相比，高剂量组抑制作用更明显，说明抑制程度与药物剂量有密切的关系。本试验把主药甲氨蝶呤做成微乳剂，相比于传统用药维A酸乳膏，效果更明显，且其能降低用药量，再根据微乳剂的特点，微乳剂可起到缓释作用，所以MTX微乳的应用可能要缩短用药周期，有望成为治疗银屑病的一种新药。

参考文献

[1]张永芳，马莉.甲氨蝶呤临床新用途[J].中华实用医学，2004，6（7）：114.

[2]Li CX，Zhang XB，Wu ZH.Methotrexate andPsoriasis[J].Southern China Journal ofDermato-Venerology，2004，11（2）：200-203.

[3]李群，谭国珍、孟珍，等.激肽释放酶结合蛋白对银屑病动物模型的治疗作用观察[J].皮肤性病诊疗学杂志，2014，4（1）：11-15.

[4]Paolino D，Ventura CA，Nistic a S，et al.Lecithin microemulsions for the topicaladministration of ketoprofen：percutaneousadsorption through human skin and in vivohuman skin tolerahility[J].Int J Pharm，2002，244（1-2）：21-31.