高效液相色谱法在鸡蛋中兽药残留检测的应用进展

焦安祥,崔凌峰,司 闯,袁瑷金,舒利贤,许翔翀

（六盘水市农产品质量安全检测中心,贵州六盘水553000）

近年来，随着生活水平的不断提高，鸡蛋作为高营养食品，在居民的饮食结构和营养需求中占据重要地位。 近年来，由于养殖业中用药的不规范，导致畜禽产品中兽药残留，威胁人体健康，备受社会关注。 其中大氟沙星、环丙沙星、沙拉沙星、恩诺沙星等氟喹诺酮类药物，因菌谱广、抗菌活性强等特点[1]，深受养殖行业欢迎。 本文重点围绕近年发布的关于高效液相色谱检测技术在上述几种药物的检测方法的文献， 进行总结归纳，希望给相关人员提供一定的参考。

1 检测方法的探索实践

2004年，刘媛[2]等建立了高效液相色谱法同时分析鸡蛋样品中4 种氟喹诺酮类药物残留量的方法。 该方法以0.1 mol/L 磷酸盐缓冲液（pH7.0）对鸡蛋样品进行提取，用C18 固相萃取柱进行萃取。检测条件采用流动相乙腈-0.05 mol/L 磷酸/ 三乙胺缓冲液(pH 2.4)（19:81），荧光检测器激发波长280 nm、发射波长450 nm，流速1.0 ml/min，进样量20ul。 对不同浓度的沙星混标进行检测，测定结果为环丙沙星、恩诺沙星、沙拉沙星的线性范围分别为2.5—500ug/l， 达诺沙星的线性范围为0.5—100ug/l。 鸡蛋样品中4 种沙星的加标回收率为78.1%—95.7%， 变异系数为为4.1%—16.2%。 环丙沙星、恩诺沙星、沙拉沙星的最低检出限为10ug/kg； 达诺沙星的最低检出限为2ug/kg。

2006年，农业部颁布了《鸡蛋中氟喹诺酮类药物残留的测定高效液相色谱法》（农业部781号公告-6-2006）[3]，要求采用C18 固相萃取柱进行萃取； 色谱条件流动相乙腈-0.05 mol/L 磷酸/三乙胺缓冲液(pH 2.4)（19:81），荧光检测器激发波长280 nm、发射波长450 nm，流速1.0 ml/min，进样量20ul；环丙沙星、恩诺沙星和沙拉沙星在10-50ug/kg、达氟沙星在2—10μg/kg 添加浓度的回收率为70%-100%，批内变异系数≤10%，批间变异系数≤15%。

2 检测方法完善优化

科研人员在农业部781 号公告-6-2006 基础上，不断完善优化。 2016年，姜兴华等[4]将标准中色谱条件进行调整，流动相乙腈-0.05 mol/L 磷酸/三乙胺缓冲液比例调整为15:85，流速调整为0.8ml/min，同时测定鸡蛋中环丙沙星、恩诺沙星、沙拉沙星和达氟沙星4 种药物的残留量。 结果为环丙沙星、 恩诺沙星和沙拉沙星在0.005—0.5 μg/mL、达氟沙星在0.001—0.1μg/mL 浓度范围内具有良好的线性关系, 相关系数为0.9998, 加标回收率为96.5%-103%, 变异系数0.83%—1.28%。

2017年，陈小红等[5]对鸡蛋中四种氟喹诺酮类药物残留前处理进行优化，将提取液磷酸二氢钾单次（共提取2 次）用量由标准规定的2ml 增加到10ml， 流动相乙腈－0.05 mol/L 磷酸/ 三乙胺溶液体积比调整为21:79， 其他色谱条件不变情况下测得环丙沙星、 恩诺沙星和沙拉沙星在10-50ug/kg、 达氟沙星在2—10 μg/kg 添加浓度的回收率在83.2%-97.3%， 变异系数在3.6%—8.7%。

3 结束语

高效液相色谱法作为鸡蛋中兽药残留十分有效的检测手段，不同的前处理方法、不同的流动相配比均会对检测结果造成影响，想要获得更高的准确度和精密度，还需要科研人员进一步优化。