骨膜蛋白表达与肾透明细胞癌患者预后的关系

姜贤　涂红坚　刘斌　谌辉鹏　罗庆华　曹雷华　熊雯红

【摘要】 目的：探究骨膜蛋白表達与肾透明细胞癌患者预后的关系。方法：选取2012年1月-2014年1月于本院接受根治性肾切除术的肾透明细胞癌患者118例，失访11例，以肾癌骨膜蛋白相对表达量中位数（1.12）为界分为高表达组（≥1.12）50例和低表达组（<1.12）57例。采用免疫组织化学法观察两组患者骨膜蛋白阳性表达情况，采用Western blot检测两组患者骨膜蛋白表达情况，分析骨膜蛋白表达与临床病理参数及术后生存率的关系。结果：骨膜蛋白高表达组的肿瘤直径>7 cm、肿瘤低分化、淋巴转移患者例数均显著多于骨膜蛋白低表达组，差异均有统计学意义（P<0.05）。骨膜蛋白高表达组POSTN表达相对表达量显著降低于骨膜蛋白低表达组，差异有统计学意义（t=29.933，P=0.000）。免疫组化结果显示，高表达组骨膜蛋白阳性表达率显著高于低表达组，差异有统计学意义（字2=22.202，P=0.000）。骨膜蛋白低表达组1年生存率为91.20%，高于高表达组的76.00%，差异有统计学意义（P<0.05）;骨膜蛋白低表达组5年生存率为43.86%，高于高表达组的20.00%，差异有统计学意义（P<0.05）。结论：骨膜蛋白表达与肾透明细胞癌患者肿瘤大小、病理分级、临床分期、总体生存率密切相关。

【关键词】 肾透明细胞癌 骨膜蛋白 预后

Relationship between Periostin Expression and Prognosis of Patients with Renal Clear Cell Carcinoma/JIANG Xian， TU Hongjian， LIU Bin， CHEN Huipeng， LUO Qinghua， CAO Leihua， XIONG Wenhong. //Medical Innovation of China， 2019， 16（29）： 00-004

[Abstract] Objective： To investigate the relationship between periostin expression and prognosis of patients with renal clear cell carcinoma. Method： A total of 118 patients with renal clear cell carcinoma who underwent radical nephrectomy in the hospital from January 2012 to January 2014 were enrolled， and 11 cases were lost to follow-up. With the median relative expression of periosteal protein （1.12） as the boundary， 50 patients in the high expression group （≥1.12） and 57 patients in the low expression group （<1.12） were divided into two groups. The positive expression of periosteal protein in the two groups was observed by immunohistochemistry， and the expression of periosteal protein in the two groups was detected by Western blot， and the relationship between periosteal protein expression and clinicopathological parameters and postoperative survival rate was analyzed. Result： The number of patients with > 7 cm tumor diameter， low differentiation and lymph node metastasis in the periosteal protein high expression group were significantly more than those in the periosteal protein low expression group， the differences were statistically significant （P<0.05）. The relative expression of POSTN in the periosteal protein high expression group was significantly lower than that in the periosteal protein low expression group， the difference was statistically significant （t=29.933， P=0.000）. Immunohistochemical results showed that the positive expression rate of periosteal protein high expression group was significantly higher than that in the periosteal protein low expression group， with statistically significant difference （字2=22.202， P=0.000）. The 1-year survival rate of the periosteal protein low expression group was 91.20%， higher than 76.00% of the periosteal protein high expression group， the difference was statistically significant （P<0.05）. The 5-year survival rate of periosteal protein low expression group was 43.86%， higher than 20.00% of periosteal protein high expression group， and the difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion： Periosteal protein expression is closely related to tumor size， pathological grade， clinical stage and overall survival rate in patients with renal clear cell carcinoma.

[Key words] Renal clear cell carcinoma Periostin Prognosis

First-authors address： The Third Hospital of Nanchang， Nanchang 330029， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.29.001

腎癌（renal cell carcinoma）又称肾细胞癌、肾腺癌，是泌尿系第二大恶性肿瘤，占原发性肾恶性肿瘤的85%左右[1]。近年来肾癌的发病率呈升高的趋势。肾癌的症状早期不明显，其转移方式主要是淋巴和血行转移[2]。肾癌与吸烟、肥胖、长期血液透析、长期服用解热镇痛药物等有关[3]。目前肾癌主要依靠影像学提供最直接的诊断依据[4]。根治性肾切除术是治疗局限性肾癌公认的方法[5]。骨膜蛋白（periostin，POSTN）是相对分子质量约为93 300的多功能同源二聚体糖蛋白[6]。李萍等[7]研究表明，乳腺癌组织POSTN mRNA表达水平显著高于癌旁组织和正常乳腺组织。柯毓敏等[8]研究表明，注射POSTN阳性细胞裸鼠的肿块重量、体积及瘤体POSTN阳性表达均显著高于注射POSTN阴性细胞的裸鼠。郭康[9]研究表明，POSTN在胃癌组织中的表达明显高于癌旁组织。目前有关POSTN与肾癌及肾透明细胞癌患者预后研究较少。本文旨在研究POSTN表达与肾透明细胞癌患者预后的关系，以期了POSTN的表达与肾透明细胞癌患者预后的关系，从而为肾癌预后判断提供一定的理论依据，现将研究结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2012年1月-2014年1月于本院接受根治性肾切除术的肾透明细胞癌患者

118例，失访11例，随访成功107例，其中男70例，女37例;体质量41～82 kg，平均（50.20±8.05）kg;年龄38～75岁，平均（66.01±10.25）岁;病理分期采用美国癌症联合委员会（AJCC）2002年第6版的标准进行肾癌的TNM：T1期35例，T2期30例，T3期22例，T4期20例;其中发生淋巴结转移58例，无淋巴转移49例。纳入标准：（1）所有患者诊断均符合2005年肾透明细胞癌的CT、MRI诊断标准[10];（2）近期未服用精神病药物;（3）患者精神正常;（4）患者临床资料完整。排除标准：（1）近3个月内有腹部手术史;（2）随访数据不完整;（3）孕妇或哺乳期妇女。该研究已经医院伦理学委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 药物与试剂 骨膜蛋白抗体购自Santa Cruze Biotechnology公司;磷酸缓冲液PBS购自天津科密欧有限公司。

1.2.2 仪器 低温离心机购自湖南恒诺离心机有限公司;光学显微镜购自东莞市同创仪器有限公司;切片机购自德国Leica公司;蛋白电泳及转膜仪购自美国Bio-Rad公司。

1.2.3 随访情况 采用回顾性研究的方法，摘录患者的临床资料和实验室检查信息，以患者住院确诊为肾透明细胞癌时的临床及生化资料为研究资料，对研究对象进行电话随访，直至患者死亡或研究结束。以肾癌骨膜蛋白相对表达量中位数（1.12）为界分为：高表达组（≥1.12）50例和低表达组（<1.12）57例。

1.2.4 免疫组化检测蛋白表达水平 将组织切片依次放入二甲苯Ⅰ、Ⅱ，无水乙醇Ⅰ、Ⅱ，95%、85%、75%乙醇中，10 min/次。使用PBS冲洗3次，5 min/次。室温下孵育10 min，后使用蒸馏水、PBS分别冲洗3次，5 min/次。使用EDTA组织抗原修复液高压热修复后使用蒸馏水和PBS分别冲洗3次，2 min/次，去多余PBS，滴加正常山羊血清封闭液至切片，室温放置20 min，滴加稀释200倍的Ⅰ抗，置湿盒于4 ℃过夜。使用PBS洗3次，2 min/次。滴加生物素化二抗，在37 ℃孵育20 min，使用PBS洗3次，2 min/次。滴加DAB显色剂，苏木素复染，充分水洗，盐酸酒精分化，水洗返蓝。使用酒精梯度脱水，置入二甲苯中透明，最后用中性树胶封片，在200倍光学显微镜下观察。

1.2.5 Western blot检测蛋白表达水平 用10%SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳提取总蛋白，半干法将蛋白转移到PVDF膜，置于5%脱脂奶粉室温封闭2 h后加入各需要检测蛋白的一抗，二抗，孵育2 h，TBS洗净，以β-actin为内参蛋白，采用显色液显色后行吸光度分析，计算各蛋白相对表达量。

1.3 统计学处理 采用SPSS 20.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，比较采用t检验;计数资料以率（%）表示，比较采用字2检验或者Fisher精确概率法。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 随访结果 至研究结束，共发生死亡事件72例，35例患者存活，11例失访（失访原因为电话号码改变、地址发生变动等）。本研究失访率为9.32%（11/118），死亡率为67.29%（72/107），存活率为32.71%（35/107），随访时间为1～1 825 d，中位数为913 d。

2.2 肾透明细胞癌患者骨膜蛋白表达水平与临床病理参数关系 POSTN高表达组和低表达组患者的年龄、性别比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。骨膜蛋白高表达组的肿瘤直径>7 cm、肿瘤低分化、淋巴转移患者例数均显著多于骨膜蛋白低表达组，差异均有统计学意义（P<0.05）。骨膜蛋白低表达组的肿瘤分期情况好于骨膜蛋白高表达组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

2.3 Western blot检测骨膜蛋白表达情况 骨膜蛋白高表达组POSTN表达相对表达量（2.00±0.25），显著降低于骨膜蛋白低表达组的（0.75±0.18），差异有统计学意义（t=29.933，P=0.000），见图1。

2.4 免疫组化检测骨膜蛋白蛋白表达水平 免疫组化结果显示，高表达组骨膜蛋白阳性表达例数为30例（60.0%），低表达组为6例（10.53%），高表达组骨膜蛋白阳性表达率显著高于低表达组，差异有统计学意义（字2=22.202，P=0.000）。

2.5 肾透明细胞癌患者骨膜蛋白表达水平对患者生存率的影响 骨膜蛋白低表达组1年生存率为91.20%，高于骨膜蛋白高表达组的76.00%，差异有统计学意义（P<0.05）;骨膜蛋白低表达组5年生存率为43.86%，高于骨膜蛋白高表达组的20.00%，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。

3 讨论

POSTN是一种细胞外基质分泌蛋白，具有4个重复成束蛋白结构域;最早发现于小鼠成骨细胞系中，是从小鼠成骨细胞系中克隆的一种骨黏附分子[11]。早期研究POSTN是其在肿瘤病理进程中的作用。近年来随着对其研究的加深，发现POSTN在许多组织中都有表达，尤其在富含胶原的组织中含量较高。赵佐芳等[12]研究表明，POSTN与肿瘤恶性程度及转移有着密切的关系。王文荣等[13]研究表明，POSTN不仅参与肾脏疾病的病理过程，同时也参与肾小球疾病、糖尿病肾病、多囊肾等多种肾脏疾病的病理过程，且其表达水平与疾病发生发展和預后有密切关系。在正常成人肾脏组织中POSTN极少表达，在肾癌患者肾脏组织内POSTN表达明显升高，且与肾功能下降呈正相关。

本研究中将肾癌患者分为POSTN高表达组和POSTN低表达组，结果显示，在POSTN高表达组中，患者肿瘤直径>7 cm比例显著高于低表达组（P<0.05），说明POSTN对肿瘤的生长有一定的影响，POSTN表达与肿瘤质量呈正相关。韩林[14]研究表明，POSTN高表达患者肿瘤直径大于POSTN低表达患者，与本研究得出的结论相一致。本研究中发现，在POSTN高表达组中，肿瘤分期T3、T4患者例数显著多于POSTN低表达组（P<0.05）。说明POSTN的表达与肿瘤分期呈密切关系，且POSTN的表达与肿瘤分期呈正相关。随着肿瘤分期的进展POSTN的表达随之增高。曹宇等[15]研究表明，POSTN高表达患者肿瘤TNM分期有密切关系，与本研究得出的结论相一致。本研究中发现，在POSTN高表达组中，肿瘤低分化的患者例数显著多于POSTN低表达组（P<0.05）。说明POSTN与肿瘤的分化关系密切，且肿瘤分化程度越低POSTN表达越高。李群等[16]研究表明，肿瘤分化程度越低POSTN表达越高，与本研究得出的结论相一致。本研究中发现，在POSTN高表达组中，患者总生存率显著低于POSTN低表达组（P<0.05）。说明POSTN与肾癌患者术后生存率密切相关，且POSTN表达越高，患者术后生存率越低。胡飞等[17]研究表明，POSTN表达与癌症患者治疗后生存率呈负相关，与本研究得出的结论相一致。

综上所述，POSTN表达水平较高的患者肿瘤直径较大、肿瘤分化较高、淋巴转移较多、术后5年生存显著降低。

参考文献

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（收稿日期：2019-04-04） （本文编辑：张爽）