小鼠抗应激性反应创新实验教学改进与实践※

程 鹏 何先元 喻录容 张义兵

（1 重庆医科大学实验管理中心，重庆 401331；2 重庆医科大学中医药学院，重庆 401331）

中药药理学是连接现代医学和中医药学的关键节点课程，已经证明药理学采用现代生物医学方法及现代仪器设备能够解释大量的医学现象，中药药理学作为药理学和中药学交叉综合的学科，就是要借鉴药理学及先进的仪器设备来研究和阐明中医药作用机理。通过中药药理学实验来培养学生的创新能力和解决问题的探索能力，提高学生的综合素质，是我们中药药理学实验教育教学改革的重点内容，也是更快更好地使中医药走向世界的重要途径［1-5］。由于中药物质基础的多样性和复杂性，导致中药效应的非线性、多效性、双向性以及不确定性等特点，我们在实验教学改革过程中，从培养学生的整体观出发，对人参抗应激作用实验进行改进，在丰富学生理论知识和提高实验技能的前提下，注重锻炼学生发现问题、分析问题和解决问题的能力，达到培养学生将来具备自主学习能力、独立设计实验能力和创新思维能力的高素质人才［6-10］。

1 实验方案的设计

1.1 器材设备 圆柱型玻璃缸（50 cm×50 cm）、磨口广口瓶300 mL、凡士林、铅丝（每根1 g 左右）、秒表、冰块、温度计、小鼠灌胃器、鼠笼、电子天平、木棒等。

1.2 药品试剂 钠石灰、苦味酸、A 人参水煎液1 g/mL、B 党参水煎剂1 g/mL、C 黄芪水煎剂1 g/mL、D 枸杞子水煎剂1 g/mL、E 四逆汤1 g/mL、F 附子干姜1 g/mL。

1.3 实验动物 昆明种健康小鼠，体质量（20±2） g，重庆医科大学动物实验中心提供，动物许可证号：SCXK（渝） 2002-0001。

2 实验教学实施

2.1 实验准备 由于本次试验属于最后一次实验，我们要求学生全过程参与实验材料的准备，中药煎剂，预制冰块，铅丝整理等实验准备工作。

2.2 学生分组 将学生分成6 组，每组选用一种中药煎剂。选小鼠60 只，随机分成6 组，每组10 只，灌胃0.2 mL/10 g 所选中药煎剂。

2.3 实验过程 各组给药后1 h 后，在小鼠尾根部束体重5% 的铅丝，然后将小鼠放入玻璃水缸（50 cm×50 cm），内装冰水混合物，水深40 cm，水温0 ℃），木棒敲打水缸边缘，刺激小鼠快速游动；并开始计时，当小鼠全身颤抖，头沉入水中，呛第一次水时终止计时，记录为小鼠负重抗疲劳抗寒冷时间。然后，将每只小鼠分别放置到有钠石灰的磨口广口瓶中，用凡士林密封瓶口，至小鼠死亡，记录为小鼠寒冷疲劳后耐缺氧时间。

2.4 实验结果 每小组，记录小鼠游泳时间，小鼠死亡时间。完整比较小鼠对不同中药煎剂抗应激效应的结果。

3 实验教学改革效果

3.1 教学秩序 这次实验安排在最后一次实验，经过前面几次实验的训练，以小组为单位的实验设计和实验准备都比较充分，实验操作比较熟练，实验过程井然有序，学生能很好地完成小鼠捉持、称重、标记、灌胃、观察记录等程序。小鼠数量使用比较多，基本上每个同学都有动手操作的机会，为学生们以后进一步从事研究打下比较好的基础。

3.2 改进效果 由实验教师准备实验材料和设备改变为在前一次实验结束时布置本次实验内容要求，学生在整理实验台的过程中也主动为本次实验做准备；由单一中药煎剂改变为多组中药煎剂，以前只准备人参煎剂，但是改革后由于各个小组所使用中药煎剂不一样，可能中药效应不一样，学生积极性非常高，各自小组希望有不一样的结果；以前只有一味中药有复方和配伍，结合教材内容的变化，增加常用配伍和常用复方，引导学生对拆方和配伍理论的研究兴趣，保持人参煎剂一直不变，这部分每年只能有1~2 组改变，改变后的药理效应与往年对比，熟悉中药药效差异变化趋势；以前单一疲劳应激因素改变为多种综合因素，通过低温、负重游泳和耐缺氧等综合因素处理，适当缩短实验时间，同时又能使学生通过一次实验了解不同中药对小鼠抗应激性的作用效果不同；计算分析比较不同组别中药煎剂之间的效果，明白中药作用的复杂性和非线性特点。

3.3 结果考核 由于实验课时少，本实验实际耗时课堂是不够的，所以考核时包括课前实验材料设备的准备、中药药理学实验技能全面考核、仪器设备归类收放以及实验台整理等全过程。考核兼顾个人和小组，个人考核主要包括小鼠捉持、灌胃、实验结果、实验过程记录及实验报告，小组考核包括某味中药煎煮、实验结果数据分析、实验设备准备、实验设备收放、实验台整理和实验室清洁等，最后全班不同小组实验结果数据分析整理成文档保存，便于与上一年级同学实验结果比较，作为下一年级同学分析参考。

4 结语

由于本次实验设计是要求每个同学都有动手的机会，所以就存在即使是同一小组一种煎剂处理的小鼠，实验结果数据差异也比较大，除去小鼠个体差异外，还要让学生明白，不同的实验操作者，实验结果也会有差异，激励学生在以后实验研究中要熟练掌握实验操作技能，减少人为因素差异，尽管本实验数据结论不十分精确，只能作为分析中药作用效果的趋势，不能作为科学研究分析的数据，但是学生熟悉了实验设计、操作技能和数据分析方法，为今后的研究工作打下了基础。

本实验在不增加实验研究经费和实验操作难度前提下，也可以设计同种中药煎剂雌雄小鼠分别比较其抗应激性能力的研究，使学生通过动物实验实际了解雌雄动物抗应激性的差异。没有设计研究中成药的中药药效，主要考虑是药效缓慢，实验课程内难以见到明显的效果。中医专业学生对本实验设计研究兴趣更加浓厚，可能与医学专业学生更加关注药物疗效，便于指导将来临床用药有关，另外，中药专业学生对药物成分分析以及药品生产兴趣要浓厚一些，今后的实验设计也可以根据不同专业学生的特点进行适当改革。可以引导学生开展创新实验研究，通过检测SOD 以及MDA 等参数进一步分析研究不同中药煎剂对小鼠抗应激性的差异。

随着课时普遍减少，中药药理学实验课时就更少，尽管学生有药理学实验操作为基础，具体到中药学和中医学学生来说，其药理学实验操作能力还有待提高，所以中药药理学实验教学课程的改革就显得更加重要，改革的目的是使学生参与的积极性提高，只有这样学生的实验操作技能才能提高，我们从改变原来传统单一的实验教学内容和模式，构建多元化和系统性的实验教学模式，增加实验的趣味性，提高学生的参与度，结合实验数据结果的不确定性，引导培养学生遇到问题、分析问题、解决问题的能力，也更有利于培养学生的创新性和实践性，开拓学生研究性思维。