女贞不同生长部位所含抗氧化活性成分研究

田仁君，江洪波

(四川中医药高等专科学校，四川 绵阳 621000)

人体在新陈代谢过程中会产生大量的活性氧自由基，现代研究发现自由基的不断氧化是机体衰老的重要原因，自由基学说认为抗氧化剂可以将自由基维持在适当水平，从而抗衰老。化学合成抗氧化剂虽然抗氧化能力比较强，但毒性也很大，甚至可以致畸、致癌[1]。因此人们越来越趋向于在中草药中寻找高效、毒副作用小的天然抗氧化剂。

女贞子为木犀科女贞属植物女贞(LigustrumlucidumAit.)的干燥成熟果实。女贞子性味甘、苦、平、归肝、肾经，补益药，主要功效为补益肝肾、清虚热、强腰膝、明耳目、乌须发。研究表明女贞子醇提物对DPPH自由基和羟基自由基显示出较强的清除能力，具有一定的抗脂质过氧化能力和还原能力，其总体抗氧化能力较强[2]。孙燕院士及其团队研究发现，黄芪、女贞子是颇有前景的抗衰老药物。本研究对女贞植物的不同部位抗氧化活性进行了研究，为女贞植物的抗氧化保健产品开发提供了依据。

1 仪器、试剂与材料

仪器：TU-1900型双光束紫外分光光度计( 北京普析有限责任公司)；SHZ-Ⅲ型循环水真空泵(上海亚荣生化仪器厂)； SENCOR-201旋转蒸发器(上海申顺生物科技有限公司)；IJ-500A高速粉碎机(济南亿健医疗设备有限公司)；BT-244-S型电子天平(德国Sartorius)。

试剂：DPPH(美国 Sigma公司)；化学试剂(提取化学纯，分析用分析纯)；材料：实验所用的材料采自同一棵树(产地四川绵阳)，春天开花时期从同一区域采集女贞花朵和不含花的嫩枝条，冬天12月份采集女贞子果实、老枝条和树叶，枝条切小段，采后冲洗晾干置鼓风干燥箱中40℃烘干，分装存于冰箱备用。

2 实验方法与结果

2.1 提取物的制备

将女贞子适当粉碎，称取适量加入10倍量95%乙醇提取，温浸 24h后再超声提取3次，每次 1h，如此重复 3次，过滤合并滤液，将所得滤液用旋转蒸发器浓缩，得到女贞子提取物L[3-4]。利用同样的方法得到女贞花提取物H，嫩枝条提取物I，老枝条提取物J，女贞叶提取物K。实验结果见表1。

表1 女贞各部位的提取率

通过对女贞各部位样品的乙醇提取，女贞花乙醇提取物收率最高为34.29%，女贞枝条、女贞叶和女贞子乙醇提取收率都大约在20%左右。

2.2 紫外测定波长的确定

用乙醇将DPPH配制成浓度为 2×10-4mol·L-1的标准溶液于棕色瓶中， 5种提取物分别配制成 1mg·mL-1的待测溶液，将上述6种溶液进行全波长(20～1 000nm)紫外可见光扫描。结果见图1至图6。

图1 女贞花乙醇提取物紫外图谱

图2 女贞嫩枝条乙醇提取物紫外图谱

图3 女贞老枝条乙醇提取物紫外图谱

图4 女贞老树叶乙醇提取物紫外图谱

图5 女贞子乙醇提取物紫外图谱

图6 DPPH紫外图谱

从图1-图5可以看出DPPH的标准溶液在517nm左右有一吸收峰，而5种待测溶液在517nm几乎没有吸收，故可以确定分光光度计测定吸光值时的分析波长为517nm[5]。图1和图2的紫外图谱比较相似，说明女贞花和嫩枝条这两个部位含有很多相同的活性成分。从抗氧化活性实验结果发现女贞花和嫩枝条提取物对DPPH清除率都高达90%左右，可以推测两者中抗氧化活性成分主要来源于它们相同的活性成分。为下一步研究女贞花和嫩枝条中抗氧化活性成分的研究提供了基础。

2.3 体外抗氧化测定方法

二苯代苦味酰基自由基(DPPH·)是大分子稳定的自由基，DPPH法是近几年来国内外普遍用来研究抗氧化剂的一种方法,其乙醇溶液呈紫色，在 517nm处有强吸收，当有自由基清除剂存在时，由于与其单电子配对而使其吸收逐渐消失，特征紫色逐渐褪去，褪色程度反映了抗氧化剂对自由基的清除能力。因此，可通过分光光度计测定吸光值的变化来评价物质的抗氧化能力。

取6支10mL比色管，分别依次加入4mL(2×10-4mol·L-1)的DPPH溶液，摇匀。再依次加入1mL浓度为1mg·mL-1的5种提取物H、I、J、K、L，用乙醇稀释至 10.00mL刻度，充分混均，配制成浓度为0.1mg·mL-1待测溶液，30min后用95%乙醇作参照在 517nm处测定其吸光度。按照以下公式计算待测样品对DPPH自由基的清除能力：DPPH·自由基清除率(%)= (A对照-A样品)/A对照×100%。式中，A样品为加入待测样品反应后DPPH溶液的吸光度；A对照为不加待测样品DPPH溶液的吸光度[5，6]。平行测试3次，取平均值。实验结果见表2和图7。

表2 女贞5种提取物抗氧化活性统计

上面图表可以看出女贞各部位都具有抗氧化活性，图7中柱形图显示女贞花和嫩枝条抗氧化活性都很高。表2显示女贞嫩枝条提取物的抗氧化活性最强，对DPPH清除率高达90.11%；其次是女贞花提取物，对DPPH清除率达89.64%；女贞子提取物抗氧化活性比较适中，对DPPH清除率为46.68%；女贞叶提取物对DPPH清除率为30.69%；女贞老枝条抗氧化活性最低，对DPPH清除率只有3.92%。

图7 女贞5种提取物DPPH清除率比较

4 结语

试验结果表明女贞花和嫩枝条抗氧化活性最强，随着时间推移，嫩枝条和花里面的抗氧化活性物质可能转移到了女贞子果实和树叶中，而老枝条抗氧化活性几乎没有了。是否女贞树干和树根中也存在大量的抗氧化活性物质，鉴于树干和树根关系到树的存活，取材可能导致树的死亡，所以本实验并没取材。女贞本是常绿乔木，本实验只摘取了女贞子成熟后的树叶，而其他时段的树叶担心会影响女贞子的质量并未取材，它们是否具有更大的价值，有待进一研究。

从以上结果我们可以看出女贞花提取率最高，抗氧化活性也非常高，开发成抗氧化物质非常有潜力，但是摘掉花会大大影响女贞子果实的产量；嫩枝条抗氧化活性最高，提取率也适中，但是摘掉嫩枝条后就没法结出女贞子果实，所以嫩枝条作为开发抗氧化物质的主要原材料来源也是不可取的；而女贞子作为一种中药，开发抗氧化物质成本高、浪费资源；女贞叶的提取率不是最高，抗氧化能力也不是最强，但是女贞叶不管从数量上和质量上来源都很丰富，在采摘完女贞子后大量的树叶一般都是废弃，如果将女贞树叶作为开发抗氧化物质的主要来源更为合适。