SAP 患者 PTX3、TFPI、mIR-21 的表达变化及与患者炎症反应的关系

张海波，王少芳，黄宏春，王秀敏

(1.安阳市人民医院消化内科；2.安阳市人民医院呼吸内科，河南 安阳 455000)

急性重症胰腺炎（SAP）、轻症胰腺炎（MAP）等均是临床上较为常见的疾病，流行病学研究显示，胰腺炎的发生率可达233～455/10万人[1]，在合并有胆道系统疾病的人群中，胰腺炎发病率具有进一步上升的趋势。在探讨胰腺炎病情进展机制的过程中发现，生物学因子改变可以进一步加重病情，导致患者病死率显著上升[2]。正五聚蛋白3（PTX3）是重要的炎症蛋白，其表达水平改变能够促进下游糖蛋白因子的激活，从而激活炎症信号通路[3]。组织因子途径抑制剂（TFPI）能够通过促进自身免疫因子或者趋化因子的过度激活，增加自身免疫性损伤的发生[4]。miR－21作为重要的非编码Rna因子，其浓度改变能够增加患者自身组织器官的炎症因子浸润，促进自身消化酶的释放[5]。本研究即选取我院消化内科收治的118例急性胰腺炎患者，探讨相关血清学指标如 PTX3、TFPI、mIR－21的表达变化及其与患者的病情关系，报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2016年3月至2017年5月我院消化内科收治的118例急性胰腺炎患者作为研究对象，其中SAP患者43例（SAP组）、MAP患者75例（MAP组），再另选取同期健康对象60例作为对照组。SAP组，男28例，女15例；年龄22～63 岁，平均 41.6±14.1 岁；白细胞计数（18.3±3.4）×109/L；Ranson 评分 3.82±0.56 分。MAP 组， 男 38例，女 22 例；年龄 20～65 岁，平均 39.5±15.0 岁；白细胞计数（14.2±2.6）×109/L；Ranson 评分 2.51±0.64分。对照组，男35例，女25例；年龄24～60岁，平均 39.2±13.0岁。三组研究对象年龄、性别比较差异均无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 纳入及排除标准

1.2.1 纳入标准 急性胰腺炎患者的诊断标准参考《中国急性胰腺炎诊治指南》、《重症急性胰腺炎诊治指南》中的标准；年龄19～65岁；获得研究对象的知情同意。

1.2.2 排除标准 合并肝肾功能疾病；合并恶性肿瘤；合并凝血系统疾病；合并精神疾病、认知功能障碍；具有脑血管病史。

1.3 检测方法 采集空腹静脉血约5ml，自然凝固后3000r/min离心10min，取上清采用酶联免疫吸附法测定血清PTX3、TFPI、IL－6、IL－8 及 TNF－α 水平，检测试剂盒购自北京中杉金桥生物有限公司，具体检测步骤严格按照试剂盒说明书进行操作。miR－21检测方法如下：采集患者的静脉血5ml，加入 0.2ml氯仿，2～8℃冰冻离心机中离心(12000g/min，15min)，反复一次洗涤 RNA，弃上清，在管底部可见一乳白色小沉淀物，加入1ml 75%乙醇，0.1%DEPC水溶解。加入miR－21及GAPDH上下游引物、0.1%DEPC 使其终浓度均为 20pmol/ul，制备反应体系，RT－PCR扩增的条件与参数：48℃，45min，94℃，2min；94℃ 30s，58℃ 60s，68℃ 2min 共40个循环；循环完毕后68℃延伸7min。

1.4 统计学方法 计量资料采用（x±s）表示，三组之间计量资料比较采用单因素方差分析、组间两两比较采用LSD－t检验；相关性分析采用Pearosn线性相关分析法；P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组研究对象血清 PTX3、TFPI、miR－21 水平比较 SAP组患者血清 PTX3、TFPI、miR－21水平均显著高于 MAP 组、对照组（P＜0.05），MAP 组血清 PTX3、TFPI、miR－21 水平均显著高于对照组（P＜0.05），见表 1。

表1 三组研究对象血清PTX3、TFPI、miR-21水平比较（x±s）

2.2 三组研究对象血清 IL－6、IL－8、TNF－α 水平比较 SAP 组患者血清 IL－6、IL－8、TNF－α 水平均显著高于 MAP 组、对照组（P＜0.05），MAP 组血清 IL－6、IL－8、TNF－α 水平均显著高于对照组 （P＜0.05），见表2。

表2 三组研究对象的血清IL-6、IL-8及TNF-α水平比较（x±s）

2.3 SAP 患者血清 PTX3、TFPI、miR－21 与炎症指标的相关性分析 SAP组患者血清 PTX3、TFPI、miR－21 与其血清 IL－6、IL－8、TNF－α 水平均显著正相关（P＜0.05），见表 3。

表3 SAP患者血清PTX3、TFPI、miR-21与炎症指标的相关性分析

3 讨论

胰腺炎特别是SAP的远期生存指标较差，五年生存率不足35%，病死率可达15%以上[6]。通过早期诊断、早期治疗，可以提高SAP的病情缓解率，降低其病死率，从而改善远期临床预后。尽管如此，现阶段临床上缺乏可靠的实验室指标用于SAP诊断，本研究通过对血清学指标的探讨，希望可以为后续临床上SAP诊断、病情评估提供依据。

PTX3可以通过诱导下游细胞炎症因子如IL－6、IL－10等的表达，进而促进巨噬细胞、单核细胞对胰腺细胞膜的浸润或者损伤[7]。PTX3在促进氧化应激损伤或者加剧细胞膜不稳定性等方面发挥了重要作用。基础研究也显示，PTX3可以通过影响细胞膜上钙离子通道的开放，增加胰腺组织钙负荷[8，9]。TFPI可以诱导CD4+T淋巴细胞发生免疫缺陷，导致胰腺组织局部免疫功能下降，从而加重炎症反应[10，11]。 mIR－21不仅在多种恶性肿瘤或者感染性疾病的发生过程中发挥了重要作用，同时近年来相关基础方面的研究显示，mIR－21还能够调控局部胃肠激素，进而影响导管内消化酶的分泌速度，增加导管张力[12]。

本研究发现，SAP组患者血清 PTX3、TFPI、miR－21水平均显著高于MAP组、对照组 （P＜0.05），MAP 组血清 PTX3、TFPI、miR－21 水平均显著高于对照组（P＜0.05），这提示 PTX3、TFPI、miR－21在急性胰腺炎发生、发展过程中均可能发挥了一定的作用。研究发现，血清PTX3高表达不仅可以改变患者体内组织蛋白酶的活性，促进下游炎症蛋白信号通路的激活，增加炎症因子在腹膜或者胰腺间质组织中的播散速度，而且还可以促进患者体内的组织因子的表达，增加单核细胞、巨噬细胞对胰腺组织的浸润，导致胰腺消化酶的过度释放[13，14]。 Nieminen A 等[15]报道，胰腺炎患者血清TFPI水平上升幅度可达24%以上，并且患者腹腔内感染越为严重，其波动幅度越高。血清miR－21高表达不仅能够影响氧化应激过程，同时还能够影响到谷胱甘肽芳基转移酶等的活性，导致氧化自由基对于胰腺组织的损伤[12]。

IL-6、IL-8及TNF-α等是评估患者体内炎症因子活性的重要指标，这些细胞因子高表达可以增加患者感染性休克、多器官功能衰竭的发生风险。本次研究中，SAP组患者血清 IL-6、IL-8、TNF-α 水平均显著高于 MAP 组、对照组（P＜0.05），MAP组血清IL-6、IL-8、TNF-α水平均显著高于对照组（P＜0.05），并且 SAP 组患者血清 PTX3、TFPI、miR-21与其血清 IL-6、IL-8、TNF-α水平均显著正相关（P＜0.05），这一步提示了血清 PTX3、TFPI、miR-21等与胰腺炎患者病情的关系。综上所述，SAP患者血清PTX3、TFPI、miR-21水平较MAP及健康人群升高更加显著，并且与炎症反应程度加重有关。