清热燥湿方保留灌肠对大肠湿热型溃疡性结肠炎大鼠模型Th1/Th2的影响

郑凤萍 罗巨利 王爱华

【摘要】 目的：探究清热燥湿方保留灌肠对大肠湿热型溃疡性结肠炎大鼠模型Th1/Th2的影响。方法：选取SD成年大鼠40只，SPF级，体重180～200 g，湖南中医药大学动物实验中心提供，雌雄各半，适应性喂养1周后随机分为四组：A组（正常组）、B组（空白对照组）、C组（治疗组）、D组（对照组），每组10只。A组不建模，B、C、D组建立溃疡性结肠炎模型，B组不使用药物，C组使用清热燥湿方保留灌肠，D组使用柳氮磺吡啶灌肠。治疗2周后观察血清TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-10水平变化。结果：A组TNF-α、IL-1β均低于B、D组，IL-4、IL-10、Th1/Th2均高于B、D组，差异均有统计学意义（P<0.05），A组上述指标与C组比较差异无统计学意义（P>0.05）;C组TNF-α、IL-1β均低于B、D组，IL-4、IL-10、Th1/Th2均高于B、D组，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：清热燥湿方保留灌肠对大肠湿热型溃疡性结肠炎大鼠具有炎症因子调节作用。

【关键词】 清热燥湿方; 大肠湿热型; 溃疡性结肠炎; 大鼠; 炎症

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2019.27.078 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2019）27-0-02

Effect of Retention Enema with Qingre Zaoshi Prescription on Th1/Th2 in Rats with Ulcerative Colitis of Damp-heat Type of Large Intestine/ZHENG Fengping，LUO Juli，WANG Aihua.//Chinese and Foreign Medical Research，2019，17（27）：-182

【Abstract】 Objective：To explore the effect of retention enema with Qingre Zaoshi Prescription on Th1/Th2 in rats with ulcerative colitis of damp-heat type of large intestine.Method：Forty adult SD rats，SPF grade，weighing 180-200 g，were randomly divided into four groups：group A（normal group），group B（blank control group），group C（treatment group） and group D（control group），with 10 rats in each group.Group A did not model ulcerative colitis.Group B，C and D established ulcerative colitis model.Group B did not use drugs.Group C used retention enema with Qingre Zaoshi Prescription.Group D used sulfasalazine enema with Sulfasalazine.Serum levels of TNF-α，IL-1β，IL-4 and IL-10 were observed after 2 weeks of treatment.Result：The levels of TNF-α and IL-1β in group A were significantly lower than those in groups B and D，IL-4，IL-10 and Th1/Th2 were significantly higher than those in group B and D（P<0.05）.There was no significant difference among the above indicators compared with group C（P>0.05）.TNF-αand IL-1βin group C were significantly lower than those in group B and D，and IL-4，IL-10 and Th1/Th2 were significantly higher than those in group B and D（P<0.05）.Conclusion：Retention enema with Qingre Zaoshi Prescription can regulate inflammatory factors in rats with ulcerative colitis of damp-heat type of large intestine

【Key words】 Qingre Zaoshi Prescription; Damp-heat type of large intestine; Ulcerative colitis; Rats; Inflammation

First-authors address：First Hospital Affiliated to Hunan University of Traditional Chinese Medicine，Changsha 410007，China

潰疡性结肠炎作为一种炎性肠病，病变以结直肠黏膜及黏膜下层为主，常表现为腹泻、腹痛、黏液脓血便等。溃疡性结肠炎发病机制不明，但普遍认为免疫功能紊乱是主要致病因素，治疗以调节机体紊乱机制为主[1-2]。中医上认为溃疡性结肠炎归属于“肠擗”“泄泻”范畴，以本虚标实为主要病症，脾胃虚弱或感受外邪，导致出现脾虚兼湿毒之邪内蕴所致[3-4]。有研究表明清热燥湿方对溃疡性结肠炎患者具有显著疗效。但查阅文献发现对于清热燥湿方对溃疡性结肠炎患者的作用机制的报道相对较少，因此本研究通过对SD大鼠建立溃疡性结肠炎模型，探究清热燥湿方保留灌肠对Th1/Th2的影响，具体如下。

1 资料与方法

1.1 实验动物及建模方案

选取湖南中医药大学动物实验中心提供成年SD大鼠40只，均为SPF级，体重180～200 g，雌雄各半，适应性喂养1周后随机分为四组：A组（正常组）、B组（空白对照组）、C组（治疗组）、D组（对照组），每组10只。A组不建模，B、C、D组建立溃疡性结肠炎模型，具体如下：采取高脂、高糖饲料喂养，平均温度（30±2）℃，湿度80%～95%，持续时间10 d造成湿热型。第11天采用3%葡聚糖硫酸钠自由食用7 d建立溃疡性结肠炎模型，总历时17 d。在B、C、D组中随机挑选2只SD大鼠，采用7%水合氯醛麻醉后，取结肠组织病理学分析，证实造模成功。

1.2 方法

A组和造模成功后B组常规喂养同时采用生理盐水灌肠;

C组采用清热燥湿方灌肠，清热燥湿方（苦参15 g，黄芩15 g，白头翁20 g，地榆20 g，白及12 g，石榴皮15 g，五倍子15 g）取400 ml清水浸泡20 min后煎煮30 min后过滤2次，按照实验动物与成人剂量体型系数换算法计算大鼠每日灌肠用量约为20 ml;D组采用柳氮磺胺吡啶（上海福达制药有限公司，0.25 g，批号201310001）0.5 g/（kg·d），计算方法同上，进行灌肠。

1.3 观察指标

四组均连续灌肠2周后采用7%水合氯醛麻醉后取腹主动脉血，在3 000 r/min离心机下离心15 min，去上层清液采用酶联免疫吸附试验检测血清中TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-10表达水平。

1.4 统计学处理

采用SPSS 22.0统计软件包对数据进行统计分析，计量资料以（x±s）表示，组间两两比较若方差齐时选择LSD法，方差不齐时选择Tamhane法进行方差分析;计数资料以率（%）表示，采用字2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

A组TNF-α、IL-1β均低于B、D组，IL-4、IL-10、Th1/Th2均高于B、D组，差异均有统计学意义（P<0.05），A组上述指标与C组比较差异无统计学意义（P>0.05）;C组TNF-α、IL-1β均低于B、D组，IL-4、IL-10、Th1/Th2均高于B、D组，差异均有统计学意义（P<0.05），見表1。

3 讨论

有研究表明，在促炎症因子与抗炎症因子的共同作用下，机体可维持正常的免疫动态平衡，一旦出现应激或者外界因素的影响，动态平衡破坏会导致出现炎性肠病[5-6]。清热燥湿方在临床上已广泛得到应用，并在炎性肠病的治疗中临床效果显著，因此理论上清热燥湿方对溃疡性结肠炎大鼠免疫紊乱具有一定改善作用[7-8]。Th细胞作为T细胞的辅助细胞，Th1以细胞免疫为主，Th2以体液免疫为主，Th1/Th2在体内处于动态平衡，当出现炎症时会出现偏离，出现免疫反应，当机体炎症消失后会分泌抑制因子，防止免疫扩大损伤正常机体[9]。清热燥湿方中以白头翁为君药，苦能清热、温能燥湿为主;苦参、地榆为臣药，配合君药共奏清热利湿功效;白及、石榴皮、五倍子、黄芩共为佐药，增强收敛止泻、清热利湿之功，诸药合用，对溃疡性结肠炎具有一定临床意义[10]。本研究结果发现，建模后炎症因子TNF-α、IL-1β均显著升高，抗炎症因子IL-4、IL-10显著降低，因此出现C组Th1/Th2水平显著低于A组。有研究表明柳氮磺胺吡啶对炎性肠病，灌肠时在肠道微生物作用下分解为5-氨基水杨酸，该物质具有一定抗菌消炎和免疫抑制作用，但该药起效时间较短，多以短期用药为主[11-12]。本研究发现C组TNF-α、IL-1β均低于D组，IL-4、IL-10、Th1/Th2均高于D组，表明清热燥湿方对溃疡性结肠炎大鼠抗炎机制强于柳氮磺胺吡啶，分析原因在于柳氮磺胺吡啶起效时间较短，综合疗效不如清热燥湿方，有利于稳定Th1/Th2动态平衡。

综上所述，清热燥湿方对溃疡性结肠炎大鼠抗炎机制可能与促进Th1/Th2平衡相关。

参考文献

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（收稿日期：2019-05-05） （本文编辑：马竹君）