菊花在简易库和冷藏库中的理化指标动态变化❋

吴 翠，徐 靓，马玉翠，洪 专，晋文慧，巢志茂

(1. 中国中医科学院中药研究所，北京 100700； 2. 国家中药材产业技术体系贮藏与包装岗位，北京 100700； 3. 国家海洋局第三海洋研究所，厦门 361005)

贮藏是中药材从采收加工到临床使用前的重要环节。受贮藏环境和自身特性的影响，中药材易出现变色、霉变、虫蛀、酸败等多种肉眼可见的变质现象，其中所含化学成分则出现含量的增多、减少、成分消失或产生新的成分[1]。观察和测定中药材在贮藏过程中物理和化学性质随贮藏时间的动态变化有利于控制中药材的质量，对中药材合理贮藏时间的制定具有突出的实用价值和参考意义。

常用中药材菊花是菊科植物菊ChrysanthemummorifoliumRamat.的干燥头状花序，功效为清热解毒、散风清热、平肝明目等，在临床使用时常用于头痛眩晕、风热感冒、目赤肿痛等症状[2]，被原卫生部列入《既是食品又是药品的物品名单》中，并使用广泛。菊花配伍天麻可以提高天麻对阴虚阳亢型高血压的治疗效果[3]，配伍蒲公英、赤芍等组成的菊花煎对溃疡性结肠炎患者血液内血小板膜糖蛋白异常体现出较好的抑制作用[4]。菊花中的酚类成分具有抗氧化活性[5]，总黄酮对大鼠心肌缺血具有保护作用[6]，b-榄香烯是菊花挥发油中的主要成分，研究表明其具有很好的抑癌作用[7]。文献显示，菊花在实验室的自然条件下贮藏3年会出现变色和虫蛀现象[8]，随着贮藏时间的延长，总黄酮的含量逐渐降低[8]，质量下降。但尚未见菊花在不同贮藏库中不同贮藏时间下理化指标变化的文献报道。

本实验将购得菊花分装后，分别放置于简易库和冷藏库中贮藏，于贮藏过程中固定的时间间隔取出，观察外观、测定化学成分的含量，以观察菊花在贮藏过程中外在物理性质和内在化学成分含量随贮藏时间的动态变化，以期为其在贮藏过程中质量的控制提供实验以及数据基础。

1 材料与方法

1.1 试剂

绿原酸对照品(批号PS11111001，纯度98.84%)，3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸对照品(批号PS11101302，纯度98.64%)，木犀草苷对照品(批号PS0342-0020，纯度98.5%)。甲醇和乙腈为色谱纯(Thermo Fisher Scientific公司)，水为娃哈哈纯净水(杭州娃哈哈集团有限公司)，乙醇、磷酸、冰醋酸为分析纯(北京化学工业集团有限责任公司)。

1.2 主要仪器

Shimadzu LC-20AT型高效液相色谱仪，配备SIL-20 A型自动进样器，DGU-20A5型自动脱气机，LC-20AT型泵，SPD-M20 A型二极管阵列检测器，CTO-10ASvp柱温箱，LC-solution色谱工作站(日本Shimadzu公司)，XS105 Dual Range型电子分析天平(感量为0.01 mg)(Mettler Toledo仪器系统有限公司)，Ohaus CP224C型电子天平(感量为0.1 mg，奥豪斯(上海)仪器有限公司)，KQ-100E型超声波清洗器(100 W，40 kHz，昆山市超声仪器有限公司)，JWS-A5型温湿度表(北京市亚光仪器有限责任公司)，DFT-50 A型手提式高速粉碎机(温岭市林大机械有限公司)，比泽尔5P系统压缩机(Bizeer制冷技术(中国)有限公司)，高翔DL60冷风机(浙江高翔工贸有限公司)。

1.3 贮藏库的建立

表1显示，简易库未进行温湿度和光照等调节，每天上午10点记录温度和湿度。冷藏库采用冷风机控制仓库温湿度，从而保持恒定温度和湿度环境，采用纸箱密封控制光照。

表1 简易库温湿度

1.4 药材

本实验所用菊花样品品种为亳菊，2014年从河北安国药材市场购买，由中国中医科学院中药研究所巢志茂研究员鉴定为菊科植物菊ChrysanthemummorifoliumRamat.的干燥头状花序，样品在贮藏之前放置于该所1016实验室。

2014年7月11日，将菊花分装于白色不透光的塑料编织袋中，分别放置于简易库和冷藏库中贮藏，留出适量菊花作为0月的样品。分别于贮藏日期为2014年10月31日、2015年4月30日和10月31日、2016年4月30日和10月31日、2017年4月30日时，从库中取出适量菊花样品，作为贮藏3、9、15、21、27、33个月的样品。

1.5 外观观察

表2显示，从简易库和冷藏库中取出适量样品，平铺于白色搪瓷盘中，在日光下观察菊花样品的色泽和质地并记录。

1.6 水分测定

取“1.5”项下样品适量粉碎，过一号筛，按2015版《中国药典》通则水分含量测定项下规定的第二法即烘干法[10]进行测定。

1.7 绿原酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸和木犀草苷的含量测定

1.7.1 色谱条件 Dikma Diamonsil C18(2)色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 mm)，以乙腈为流动相A，以0.1%磷酸溶液为流动相B进行梯度洗脱(0～11 min，90%A→82%B；11～30 min，82%A→80%B；30～40 min，80%B)，检测波长设定为348 nm，流速为1.0 mL·min-1，柱温为35 ℃，进样量为10 mL。

1.7.2 对照品溶液的制备 取对照品绿原酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸和木犀草苷适量，分别精密称定0.9 mg、0.6 mg和2.0 mg，用70%甲醇其溶解于体积为10 mL棕色量瓶中并加至刻度，配制成浓度分别为0.036 mg·mL-1、0.024 mg·mL-1和0.08 mg·mL-1的对照品溶液。

表2 简易库与冷藏库中菊花的色泽、质地、水分、绿原酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、木犀草苷的结果

1.7.3 供试品溶液的制备 图1表2显示，取“1.6”项下样品粉末0.25 g精密称定，放入体积为50 mL的具塞锥形瓶中，精密加入25 mL70%的甲醇，密塞并称定重量后超声处理40 min取出，放至室温后第2次称定重量，以70%的甲醇补足超声处理减失的重量，摇匀并滤过，取续滤液过0.22 mm微孔滤膜即得。对照品与供试品的HPLC色谱图。采用外标一点法计算干品中的含量。

注：A.对照品；B.供试品；1.绿原酸；2.木犀草苷；3.3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸图1 对照品和菊花供试品的HPLC图

2 结果

2.1 贮藏库温湿度变化

简易库温度范围为15～42 ℃，湿度范围为30%～74% RH。冷藏库温度在整个贮藏过程中均保持在3.5～5.0 ℃，湿度均保持在65～75% RH相对湿度。

2.2 色泽和质地

表2结果显示，简易库中的菊花色泽从0月的类白色到第15个月的黄白色，再到第27个月出现黄褐色，色泽显著加深；质地在第27个月时出现轻脆易碎的现象。冷藏库中的菊花色泽在第27个月才出现黄白色，并一直保持到第33个月，质地始终保持体轻质柔润的状态。

2.3 水分

表2结果显示，菊花的水分含量最高值为0月时的12.26%，之后出现小幅度下降，简易库中的最低值为7.22%，冷藏库中最低值为8.46%，均在《中国药典》规定的不得高于15%的范围内。

2.4 有效成分的含量

绿原酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸和木犀草苷是菊花的有效成分，对于其含量测定，按照《中国药典》规定的HPLC方法直接进行测定[2]，因此未进行方法学考察的试验。

表2结果显示，绿原酸的含量，0月时最高为3.431 mg·g-1。在简易库贮藏27个月后出现下降，最低值为2.536 mg·g-1，下降了26.1%；在冷藏库中含量基本保持不变。

3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸的含量，0月时最高，为21.62 mg·g-1。在简易库贮藏15个月后出现下降，最低值为16.89 mg·g-1，下降了21.8%，之后未再继续下降；在冷藏库中的含量基本保持不变。

木犀草苷的含量出现了波动，总体呈现升高趋势。在简易库贮藏15个月后升高到1.622 mg·g-1，最高值为第27个月时的1.705 mg·g-1，上升了1.12倍。在冷藏库贮藏27个月后升高到1.861 mg·g-1，上升了1.31倍。

3 讨论

本实验中所用菊花为亳菊，类白色，体轻质柔润。在简易库中贮藏15个月时出现了轻度的变色，呈黄白色，但是在贮藏27个月后加深为黄褐色，质地轻脆易碎，影响临床的调剂。在冷藏库中贮藏27个月后才出现轻度的色泽加深，为黄白色，依旧体轻柔润。相比于冷藏库，简易库中菊花的色泽在每个时段都相对较深。

在贮藏33个月的过程中，菊花的水分始终在《中国药典》规定的不得高于15%的范围内，不过在简易库贮藏27个月后低到了7.22%。这与花类药材失水后色泽会由鲜艳变为暗淡，从而造成感官上色泽加深[11]的现象一致，说明冷藏库的条件更有利于保持花类药材的色泽。

绿原酸的含量尽管最低值低到0.25%，但依旧在中国药典规定的不得低于0.20%的范围内。绿原酸含量随着贮藏时间的延长，出现的这种下降现象与绿原酸在温度和光照的影响下会被破坏的报道[12-13]是一致的。

3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸的含量，在简易库中贮藏15个月后出现了显著的下降。文献曾报道，该化合物在高温的炒制条件下易被破坏[13]，本文的结果显示，即使是在最高42 ℃的简易库条件下也会出现一定程度的破坏。不过，即使经过33个月的贮藏，无论是简易库还是冷藏库，仍然在中国药典规定的不得低于0.70%的范围内。

综合以上贮藏过程中外观和理化指标的动态测定，冷藏更有利于质量的稳定，而在简易库条件下，建议其贮藏时间不得超过27个月。