生髓健骨胶囊对酒精性骨质疏松大鼠骨密度、骨矿含量影响的研究

任树军 梁彦林 姜磊 任明辉 王墉琦 耿慧春 于雪峰 谭福柱*

1.黑龙江中医药大学附属第一医院，黑龙江 哈尔滨 150040 2.黑龙江中医药大学研究生院，黑龙江 哈尔滨 150040 3.西安市中医医院，陕西 西安 710001 4.南昌大学第四附属医院，江西 南昌 330003

骨质疏松症(osteoporosis，OP)一词由Pommer[1]于1885年首先提出，1950年以来，许多学者都对其进行了比较精确的阐述。美国学者W.A.Peck认为骨量丢失，骨组织显微结构及骨脆性改变引起骨折风险增加的疾病称为OP；日本的井上哲郎认为OP的一个典型特征为骨组织内单位体积的骨量减少。对于OP明确的定义是1993年在香港举办的骨质疏松国际研讨会上提出的，并得到医学界大多数专家的认可[2]。在流行病学研究[3-4]中发现，过度饮酒能使骨密度降低，对年轻女性的危害较绝经后老年女性的危害更加显著，属于继发性骨质疏松范畴。酒精滥用和酒精依赖导致的骨坏死、骨质疏松、骨折发生率正逐渐增加，通过研究骨密度(bone mineral density，BMD)、骨矿含量(bone mineral content，BMC)的变化，探讨酒精对骨代谢的作用机制，无疑对治疗酒精性骨质疏松(alcoholic osteoporosis，AOP)[5]具有更重要的意义。

本研究通过建立酒精性骨质疏松症大鼠模型，观察不同时期各组实验大鼠BMD、BMC的变化，进一步探讨生髓健骨胶囊在防治AOP大鼠方面的作用机制，为临床应用提供实验理论依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物及分组

选用成年雄性(清洁级)SD大鼠120只，体重(220±20)g，平均约6个月月龄，购自黑龙江中医药大学动物实验中心[SCXK(黑)20170130]。根据随机法将实验大鼠分为正常对照组、模型组、碳酸钙+阿法D3组(西药对照组)及生髓健骨胶囊组(中药干预组)，每组各30只，在适宜的环境中分笼适应性喂养1周后，称大鼠体重。

1.2 实验方法

正常对照组每天用等量生理盐水(500 mL/袋，出厂批号：B1708018，四川太平洋药业有限公司)进行灌胃，上午、下午各1次;模型组每天上午用等量白酒(500 mL/瓶，红星牌二锅头，55°，标准号：GB/T20822，北京红星股份有限公司生产)灌胃，下午用与正常对照组相同量的生理盐水灌胃，各1次;西药对照组每天上午用等量白酒(同模型组)灌胃，下午给予碳酸钙(500 mg/片，国药准字：H10980201，吉林万通药业集团)+阿法D3[0.25 μg/粒，国药准字：J20080612，以色列梯瓦制药工业(TEVA)有限公司(昆明贝克诺顿公司分装)]用生理盐水(同正常对照组)配成混悬液灌胃给药，各1次;中药干预组每天上午用等量白酒(同模型组)灌胃，下午给予生髓健骨胶囊(0.35 g/粒，批准文号：黑卫药制字Z20110036，黑龙江中医药大学附属第一医院)用生理盐水(同正常对照组)配成混悬液灌胃给药，各1次。

各组实验大鼠均按10 mL/kg容积灌胃给药，白酒按约含纯乙醇4.4 g/(kg·d)计量，共持续给药16周。实验期间各组大鼠均给予规定(全价标准)营养饲料，自由进食水。各组实验大鼠每周末通过称量体重变化来调整给药剂量。严格遵循动物实验伦理道德，于造模8、12、16周末，将各组实验大鼠分别采取颈椎脱臼法处死10只，在无菌操作环境下取出左侧股骨，将残余组织剔除后，用生理盐水冲洗，再用无菌湿纱布包敷，最后用双能X线骨密度仪(DEXA)检测。将股骨上端放置于双能X线骨密度仪(DEXA)探头下，用小动物学软件进行扫描处理，对各组大鼠左侧股骨的BMD、BMC进行检测，最后打印出测定结果。

1.3 主要仪器

采用美国通用(Lunar)公司生产的双能X线骨密度测量仪(PLODIGY-型)附带的小动物软件测定实验大鼠的骨密度;游标卡尺由桂林广陆数测股份有限公司生产(精确度0.02 mm、长150 mm)，标准号：GB/T21389-2008。

1.4 统计学方法

实验数据应用统计软件SPASS 22.0进行(组间单因素ANOVA)检验，行t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组大鼠8周末检测股骨BMD、BMC的结果比较(表1)

组别例数BMD/(g/cm2)BMC/(g/cm2)正常对照组100.272±0.0220.149±0.017模型组100.228±0.027★★0.116±0.008★★西药对照组100.239±0.025▲0.123±0.018▲中药干预组100.244±0.021▲▲●0.130±0.019▲▲●F值-12.73327.746P值-<0.001<0.001

注：与正常对照组相比，★P<0.05，★★P<0.01；与模型组相比，▲P<0.05，▲▲P<0.01；与西药对照组相比，●P<0.05，●●P<0.01。

2.2 各组大鼠12周末检测股骨BMD、BMC结果的比较(表2)

组别例数BMD/ (g/cm2)BMC/ (g/cm2)正常对照组100.271±0.0180.148±0.037模型组100.222±0.023★★0.109±0.015★★西药对照组100.235±0.021▲0.119±0.025▲中药干预组10 0.253±0.017▲▲●0.135±0.026▲▲●F值-29.94017.164P值- <0.001<0.001

注：与正常对照组相比，★P<0.05，★★P<0.01；与模型组相比，▲P<0.05，▲▲P<0.01；与西药对照组相比，●P<0.05，●●P<0.01。

2.3 各组大鼠16周末检测股骨BMD、BMC结果的比较(表3)

组别例数BMD/(g/cm2)BMC/(g/cm2)正常对照组100.270±0.0210.147±0.033模型组100.206±0.026★★0.098±0.012★★西药对照组100.230±0.024▲0.120±0.021▲中药干预组100.259±0.020▲▲●0.144±0.022▲▲●F值-15.9909.754P值-<0.001<0.001

注：与正常对照组相比，★P<0.05，★★P<0.01；与模型组相比，▲P<0.05，▲▲P<0.01；与西药对照组相比，●P<0.05，●●P<0.01。

2.4 造模干预8、12、16周末骨密度指标检测结果

模型组BMD、BMC与对照组相比均有不同程度的下降，且差异有统计学意义(P<0.01)，结果表明乙醇能够引起实验大鼠骨量减少，BMD、BMC下降；中药干预组、西药对照组的BMD、BMC分别与模型组相比明显升高(P<0.01、P<0.05)，且中药干预组优于西药对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。

BMD能直接反应骨矿物质的变化，与BMC息息相关。BMD降低，骨强度减低，骨脆性增加，骨折风险升高。因此，BMD是评估临床疗效的主要依据，也是骨质疏松危险性的重要标志。当骨量丢失超过5%，即可被骨密度仪(双能X线)检测出。

3 讨论

3.1 酒精性骨质疏松(AOP)概述

AOP目前是一种发病机制尚不清楚的骨代谢疾病。现代研究表明长期过量的酒精摄入将通过多途径影响骨代谢平衡，使成骨减少、破骨增加，导致骨量减少。过量饮酒会带来以下影响[5]：①对钙调节激素[1,25(OH)2D3、降钙素及甲状旁腺激素]的影响；②对肾上腺皮质类固醇激素的影响；③对性腺功能产生的影响；④对骨细胞的影响：抑制成骨细胞，促进破骨细胞；⑤对肝功能的影响：使其合成蛋白能力下降、合成IGF-1不足、增加其多种激素代谢酶的活性；⑥对营养的影响。出现不同部位、不同程度的骨骼肌肉或关节疼痛、大多数伴有乏力、躯体各方向活动受限或双下肢抽筋等是AOP主要的临床表现，但多无关节的红肿、变形[6-7]。AOP在祖国医学中并无此病名，应属于中医学中“骨痿” “骨枯” “骨极”等病的范畴[8-10]。此病多为患者素体肾气亏虚，偏嗜饮酒发为本病。酒乃熟谷之液、水谷之精。偏嗜饮酒，酒邪乃湿热之邪，易损伤中焦脾胃。中焦失于运化，湿热内生，蕴久化火，火曰炎上，可导致上焦心肝火旺。久则伤肾，使肾气阴亏虚，气机不畅，血行失运，血受热煎则为瘀[10]。血瘀而四肢百骸失于濡养，瘀久化热熏灼骨髓，则骨枯髓减，发为骨痿[11-12]。酒精在体内影响气血精液、脏腑经络的生理功能，使肝脾肾俱损，筋肉骨骼失于濡养。故AOP病位在骨，与肝肾脾等脏生理功能失调密切相关。其病因包括内因和外因，内因为素体肾气亏虚，外因为过量饮酒。其主要病机为肾虚血瘀、气阴亏虚[13]。

3.2 生髓健骨胶囊对BMD、BMC的影响

生髓健骨胶囊为临床治疗AOP的经验方[14,18]，具有补肾壮骨、健脾益气、活血通络的作用，正适合AOP的病因病机。现代研究表明方中鹿角胶、龟板、龙骨、牡蛎富含多种微量元素、氨基酸等，是骨组织合成所必需的物质；用中药葛根解酒已有千年历史，而且葛根素能够抑制骨髓基质干细胞向脂肪细胞分化，保持其成骨分化的能力[15]；黄芪、丹参、当归具有抑制血小板聚集并改善微循环的作用；白术、熟地能提高机体清除自由基的能力；郁金能减轻高血脂，对肝有保护作用；牛膝用于活血通经以镇痛，可增大骨小梁密度，减小骨髓腔面积。前期研究证实[16]其能下调骨组织中PPARγ2mRNA基因的表达，抑制MSCs的成脂分化，促进成骨细胞分化，防治骨量丢失。上调AOP大鼠小肠粘膜VDRmRNA的表达[17]，促进肠钙、磷的吸收，维持钙、磷的平衡；补肾健脾益气法可以提高AOP大鼠BMD和BMC含量，能够抑制骨矿物质丢失[18]，明显改善AOP大鼠的症状，但其确切作用机制仍需进一步深入研究。

实验结果表明，模型组BMD、BMC显著降低，通过中药或西药干预后BMD、BMC均有不同程度的升高，且中药干预组的疗效优于西药对照组。本研究表明生髓健骨胶囊可以提高AOP大鼠BMD，增加BMC，抑制骨矿物质的丢失，增强骨的强度，从而预防骨折的发生，值得临床借鉴应用。