ClK细胞免疫治疗原发性肝癌的临床疗效评价

孙英慧 宋爽 杨紫恩

（北部战区总医院 辽宁 沈阳 110016）

原发性肝癌是临床常见的一种恶性肿瘤，主要由肝细胞和(或)肝内胆管上皮细胞癌变导致。近年来原发性肝癌治疗手段逐渐丰富，包括手术治疗、放化疗以及免疫治疗等手段极大提高了原发性肝癌患者的生存率[1]。其中过继免疫治疗是治疗原发性肝癌的新型手段，细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)作为一种体外广谱抗瘤免疫活性细胞目前在原发性肝癌免疫治疗中得到了广泛应用[2]，为进一步探讨CIK细胞免疫治疗原发性肝癌的临床疗效，现做如下报道。

1.资料与方法

1.1 一般资料

选择我院2010年5月—2016年5月间收治的71例原发性肝癌患者，所有患者均经手术病理结果确诊，纳入时病灶无转移，临床分期I、Ⅱ期，Child-pugh分级为A、B级，且未接受过其他免疫抑制剂治疗。其中男性患者37例，女性患者34例，年龄42～78岁，平均年龄（62.3±2.5）岁。

1.2 治疗方法

抽取患者外周血50mL，使用密度梯度离心法分离出1×107～7×107个单个核细胞，细胞浓度控制在1×106/mL～2×106/mL，并加入IFN-γ1000IU/mL/mL，置于37℃、5%CO2环境中培养24h。然后加入单克隆抗CD3抗体100ng/mL、IL-2 1000U/mL继续培养1～2d，每2～3天添加新鲜无血清培养基及IL-21000U/mL继续培养2周。所有制备操作流程均符合临床相关规定及安全标准，质控合格后于CIK细胞培养第15d收集、离心、洗涤CIK 细胞，并使用20%人血白蛋白生理盐水重悬，制成 200mLCIK细胞悬液，1h内静脉输注到患者体内，隔日再回输一次，2次为1疗程，持续治疗3个疗程。

1.3 疗效评价指标

采集患者静脉血2ml，利用流式细胞仪检测患者治疗前后的T细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+细胞水平，对免疫功能进行评价，同时对患者进行2年的随访，记录患者生存情况及复发情况。

1.4 统计学处理

采用SPSS20.0软件对数据资料进行统计分析，计量资料用表示，计数资料用率（%）表示，其中计量资料采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2.结果

2.1 免疫功能比较

患者治疗后CD8+水平以及CD4+/CD8+较治疗前有所改善，差异有统计学意义（P＜0.05），治疗前后CD3+、CD4+水平差异未见统计学意义（P＞0.05）。见表。

表 患者治疗前后T细胞亚群比较（）

表 患者治疗前后T细胞亚群比较（）

CD3+(%)CD4+(%)CD8+ (%)CD4+/CD8+治疗前 77.28±16.59 42.25±11.43 25.87±7.94 1.86±0.61治疗后 77.42±17.26 41.68±12.51 29.26±9.25 1.45±0.57 P＞0.05 ＞0.05 ＜0.05 ＜0.05

2.2 随访结果

71例患者中，复发13例，死亡9例，复发率和病死率分别为18.3%和12.6%。

3.讨论

肝癌的发生及发展与患者的免疫功能有密切关系，手术是目前治疗肝癌的主要方式，但术后患者预后差、复发率高[3]，提高肝癌患者的免疫功能对于提高临床疗效，延长患者生存期具有重要意义。过继免疫治疗是提高肿瘤患者免疫功能的一种重要治疗手段，对于提高患者的免疫功能，降低肿瘤的复发及转移率有重要作用[4]。CIK是一群具有非组织相容性复合体限制杀瘤活性的异质细胞，其中CD3和CD56 T细胞具有体外增殖能力强、广谱高效杀瘤活性等特点[5]，对于调节和增强机体免疫功能，清除体内残余病灶，防止肿瘤复发有积极意义。

机体免疫系统主要由CD4+与CD8+相互作用形成，肿瘤患者因机体免疫功能降低，因此出现CD4+下降而CD8+上升，进而导致CD4+/CD8+下降[6]。采用CIK细胞免疫治疗原发性肝癌取得了较好的临床疗效，治疗后患者的T细胞亚群CD8+水平以及CD4+/CD8+较治疗前有所改善（P＜0.05），且远期疗效较为理想，这与宋娟[7]报道一致。Pan[8]对204例外科术后的肝癌患者行至少4周期CIK细胞治疗，患者治疗后的5年生存率明显高于未用CIK细胞治疗组患者。CIK抑制肿瘤的机理在于非MHC限制性细胞毒性作用由NKG2D介导，与颗粒酶作用后造成细胞溶解，并释放颗粒酶导致肿瘤细胞裂解，同时增强机体对癌细胞的免疫功能，提升免疫监视功能水平。

综上所述，采用CIK细胞免疫治疗原发性肝癌的疗效确切，能够有效改善患者免疫功能，对于降低复发率，延长生存期具有积极意义，可在临床推广应用。