TRFlA法检测阳性梅毒螺旋体抗体结果分析

卢元全

（重庆市丰都县人民医院检验科 重庆 408200）

现阶段，最灵敏的微量分析技术是时间分辨荧光分析法（Time resolved fluoroisnmunoassay,TRFIA），该技术的特点包括无放射性污染、标准曲线范围宽、不会受样品自然荧光干扰、自动化、操作简单、多标记以及标记物制备简单且稳定等[1]，已广泛运用于蛋白质、多肽、激素、抗体、核酸探针和生物活性细胞的定量分析。梅毒传播途径以性接触为主，近些年来，在我国社会经济飞速发展和生活水平显著提高的背景下，梅毒患病人数逐渐增多[2]。在检测TP-Ab时，如果采用一步法进行检测，当血清中TP-Ab浓度过高时可能会产生钩状效应（HOOK效应）[3]，高浓度标本易误测为低值标本，甚至出现正常结果。在临床工作中，钩状效应很难被发现，如果出现钩状效应，易发生漏诊或误诊。本文对患者血清经倍比稀释用TRFIA检测，确认其TP-Ab稀释结果高于原倍血清结果，现报告如下。

1.资料与方法

1.1 标本来源

检测标本均为2017年梅毒螺旋体抗体阳性患者血清。

1.2 仪器

苏州新波生物技术有限公司生产的EasyCuta 全自动时间分辨荧光分析仪。

1.3 试剂

苏州新波生物技术有限公司生产的配套梅毒螺旋体抗体检测试剂盒(免疫荧光法)。室内质控血清由康彻斯坦提供，以保证结果的正确性。

1.4 方法

用EasyCuta全自动时间分辨免疫荧光仪检测699例病人的2倍稀释血清，有显著差异时，无菌生理盐水倍比稀释，利用TRFIA双抗原夹心法测定，观察检测结果是否存在钩状效应。操作过程严格按照说明书进行。

2.结果

TRFIA法检测699例病人中有两例标本为原倍时S/CO值分别为2.925和5.865，经2倍稀释后的S/CO值分别为19.794和23.786，这两例标本2倍稀释后的结果明显高于原倍血清结果。继续做倍比稀释时，在稀释浓度不断提高的背景下，S/CO值逐渐提高，在稀释倍数达到1：16时达到峰值，即68.592和54.201，然后在稀释浓度高低变化过程中，室内质控结果在控，详情如表。

表 双抗原夹心法不同血清稀释度下的S/CO值（CO值为1）

3.讨论

现阶段，通过双抗原夹心时间分辨免疫荧光分析法（TRIFMA）检测梅毒螺旋抗体检测试剂盒，其产于苏州新波生物科技有限公司，本分析方法是一种固相时间分辨免疫荧光分析法,其属于双抗原夹心的非竞争性免疫分析。详细原理如下：血清标本中的生物素标记的TP抗原（Ⅱ）以及抗-TP(包括IgG、IgM等型)与固相 TP抗原（I）发生免疫性反应，有助于固相TP抗原（I）—抗TP—TP（Ⅱ）—生物素复合物的形成，经过温育洗涤之后，洗去游离的生物素抗原；然后将Eu标记的链亲和素加入其中，促进固相TP抗原（I）—抗TP—TP（Ⅱ）—生物素—链亲和素-Eu复合物的形成，温育洗涤之后，洗去游离的Eu标记的链亲和素。将荧光增强液加入其中，增强液中可以分离复合物上的Eu，与此同时，与增强液发生反应，最终以荧光络合物的形成呈现，血清中的抗TP浓度与荧光强度呈正比。

本次，两份标本中的TP-Ab均以钩状效应的形式呈现。血清未稀释（原倍）时用时间分辨免疫荧光仪检测结果为2.925和5.865，血清经过不断稀释之后，S/CO值显著提升，与此同时在比值达到1：16时达到最高值，之后，通过增加稀释倍数，S/CO值逐渐减小。当稀释到1：256时，其检测结果分别为6.193和9.147，接近于原倍血清检测结果。将倍比稀释结果做平滑曲线的散点图，发现两例标本的图形呈明显的钟形，且基本呈正态分布。证明这两例标本采用TRIFMA检测梅毒抗体时，一旦提升标本中梅毒抗体浓度，则会发生钩状效应。

本次两份标本的TP-Ab检测结果经倍比稀释到1：256时，结果分别为6.193和9.147，结果高于Cutoff值1.000，仍没有出现正常结果。

综上所述，目前，解决由钩状效应引起的漏检最可靠方法是经典二步法，进而确保被检样本检测结果的准确性和可靠性，确保输血的安全性，降低漏检发生率，避免医疗纠纷。