三种不同试剂盒对新型隐球菌的检测效果分析

闫兴辉 张加雄 唐莉（通讯作者)

（中国人民解放军32280部队 四川 夹江 614100）

新型隐球菌（Cryptococcus neoformans）又名溶组织酵母菌(Torula Histolytica)。一般染料不易着色难以发现，称隐球菌，主要侵犯免疫缺陷以及免疫低下人群，如器官移植患者、AIDS患者等。自从1981年以来，从报道首例艾滋病病例至2011年，短短30年间，艾滋病在全球迅速蔓延。在此期间，我国存活艾滋病病毒感染者和艾滋病病人78万人，其中AIDS病人15.4万人，当年新发HIV感染者4.8万人。目前主要检测手段墨汁负染对新型隐球菌的实验诊断为一种有效的诊断方法[1]。 分离培养法为新型隐球菌检测的基本方法。乳胶凝集试验以乳胶颗粒作为载体的一种间接凝集试验。有研究认为，胶体金法比LA法和ELISA法有更高的可信度[2]。近年来，临床上应用胶体金法进行隐球菌感染的诊断得到推广，具有检测样本少，稳定性高的优点。IMMY公司研发的胶体金方法试剂盒，操作简单，检测时间短，结果判定简单。金山川公司试剂盒优点在于增强瓶间稳定性，提高重复性与准确性。为评价目前新型隐球菌检测方法，以墨汁染色检测方法和分离培养为诊断标准，比较分析IMMY、丹娜、金山川三种不同试剂盒的敏感度和特异性。

1.材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 标本 15例临床血液标本。

1.1.2 试剂 Immy、丹娜、金山川三种检测试剂盒。

1.2 实验方法

1.2.1 胶体金方法 将1滴LF Specimen Diluent加入到离心管中，加入40μl血清标本，将试纸条浸入混悬液静置10min后读取结果。质控线和检测线都显示时为阳性；只有一条质控线时为阴性；质控线和检测线都未显示，表明结果不可信，应重复检测。

1.2.2 分离培养 为提高检测准确性，确保墨汁染色结果的可靠性，将可疑血清标本进行分离增菌培养后再进行墨汁染色，避免假阴性。

1.2.3 墨汁染色 墨汁染色（负染色法），背景着色而菌体本身不着色的染色法称负染色法。在黑色印度墨水的背景下，可观察到酵母细胞周围环绕着一圈明亮的区域，即粘多糖荚膜。用无菌针头取出培养瓶内的血液标本均匀涂布于洁净玻上，然后加印度墨汁1小环（或更少）混匀，加上盖玻片在低倍镜下寻找有荚膜的菌细胞，找到后换高倍镜确认。镜下背景呈黑褐色，菌体无色。

1.2.4 统计学处理 采用SPSS11.0统计软件，计数资料用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2.结果

2.1 培养结果与墨汁染色结果一致，用胶体金方法对标本原液进行检测时，丹娜试剂盒出现较高的假阳性。对原液不进行稀释处理而直接检测时，丹娜试剂盒与墨汁染色有显著差异，均具有较高的假阳性，易造成误诊。血液标本为原液时，丹娜试剂盒可以检测出墨汁染色阳性的标本，但同时14例墨汁染色阴性的标本中，有4例标本为阳性，2例为弱阳性，灵敏度为100%，特异性为57.15%，假阳性为42.85%，假阴性为0%（表1）。

表1 丹娜试剂盒与墨汁染色结果对比

2.2 采用胶体金方法对标本原液进行检测时，金山川试剂盒出现较高的假阳性。对原液不进行稀释处理，金山川试剂盒与墨汁染色有显著差异，有假阳性，易造成误诊。血液标本为原液时，金山川试剂盒可以检测出墨汁染色阳性的标本，但同时14例墨汁染色阴性的标本中，有3例标本为阳性，8例为弱阳性，灵敏度为100%，特异性为21.43%，假阳性为78.57%，假阴性为0%（表2）。

表2 采用胶体金方法对标本原液进行检测结果阳、阴性比较

2.3 采用胶体金方法对标本原液进行检测时，IMMY试剂盒与墨汁染色结果基本一致。说明对原液不进行稀释处理而直接检测时IMMY试剂盒与墨汁染色结果基本一致。血液标本为原液时IMMY试剂盒可以检测出墨汁染色阳性的标本，且14例墨汁染色阴性的标本中，有0例标本为阳性，8例为弱阳性，灵敏度为100%，特异性为100%，假阳性为0%，假阴性为0%（表3）。

表3 immy阳、阴性采用胶体金方法对标本原液进行检测结果比较

3.讨论

本研究以血培养和墨汁染色方法相结合为诊断标准，分析了三种不同胶体金方法的敏感度和特异性及其分别与墨汁染色方法的一致性。结果表明，当样品为原液时，丹娜和金山川胶体金具有较高的假阳性；胶体金方法与墨汁染色方法有较好的一致性，因此建议临床检测时采用标本原液进行检测分析。IMMY胶体金方法用于血标本的检测，且标本处理简单，检测只需约8min 就可完成，结果判定简单，因此胶体金方法可取代乳胶凝集法用于新型隐球菌的检测。