铁皮枫斗胶囊对高胆固醇血症大鼠辅助降血脂的效果研究

唐琪晶

(浙江大学附属第二医院，浙江 杭州 310009)

高脂血症是严重影响身体健康的一种疾病。近年来，我国居民高脂血症患病率呈逐年递增趋势，且发病年龄趋向年轻化。研究表明，高血脂是导致冠心病、动脉粥样硬化的主要危险因素[1]，及早治疗可以降低心脑血管疾病事件的发生概率，但是目前常用降脂药存在肝肾功能损害、横纹肌溶解、胃肠道反应等副作用，从而限制了降脂药的临床应用[2]。因此，研究开发新的降脂药具有十分重要的意义。

铁皮枫斗胶囊主要含有铁皮石斛、北沙参、麦冬、玉竹等滋阴药物，具有滋阴清热、生津润燥、补益脾胃等功效，其中铁皮石斛是主要药材。研究表明铁皮石斛具有调节免疫力、抗肿瘤、抗氧化、降血糖、降血压等一系列药理作用[3-5]。另有研究发现，铁皮石斛具有调节ApoE-/-小鼠血脂的作用[6，7]。我国古代中医学著作《素问·经脉别论》有言：“食入于胃，游溢精气，上输于脾，脾气散精，上归于肺，通调水道，下输膀胱，水津四布，五经并行”，就是说脾主运化，输布水谷精微于五脏和经脉，脾胃失调，则会导致膏脂淤积；而铁皮枫斗胶囊就具有滋阴养津、补益脾胃的作用，也可能具有降血脂功能。本实验采用高脂饮食饲养法建立大鼠高脂模型，以探索铁皮枫斗胶囊的辅助降血脂功能，为研发新的保健药品提供依据。

1 实验材料

1.1 实验动物及分组

1.1.1 实验动物 健康成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠60只，适应期(7天)结束时，体重(200±20)g，每组10只。

1.1.2 药品与试剂 森山牌铁皮枫斗胶囊(多糖含量31.61%，浙江森宇药业有限公司)；依折麦布(默沙东医药公司，批号：2EZPA31005)；总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)试剂盒均购自宁波美康生物技术股份有限公司；生理盐水(浙江沙普爱思药业股份有限公司)；卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)、胆固醇酰基转移酶(ACAT)均购自上海信帆生物科技有限公司。

1.1.3 造模材料 普通饲料(浙江省实验动物中心)；胆固醇(杭州宏博生物工程有限公司)；猪油(杭州联华华商集团有限公司)；胆固醇(杭州宏博生物工程有限公司)；三号胆盐(杭州微生物试剂有限公司)。

1.1.4 仪器 DDL-5低速冷冻多管离心机(上海安亭科学仪器厂)；HC-TP11-50架盘药物天平(上海精科天平)；PK-S26型电热恒温水浴锅(上海精宏实验设备有限公司)；ACCUTE TBA-40FR全自动生化分析仪(东芝三厂医疗株式会社)；DS-671电子计重秤(上海寺冈电子有限公司)；D37520型高速冷冻离心机(德国heraeus)；Powerwave340酶标仪(美国BIO-TEK公司)；纯水系统(杭州永洁达净化科技有限公司)。

2 实验方法

2.1 模型制备

将SD大鼠60只随机分为6组，每组10只，除正常组外，其余各组给予高脂饲料(93.6%基础饲料、1.2%胆固醇、0.2%胆酸钠、5%猪油)喂养2周，建立SD大鼠高脂血症模型。

2.2 分组与给药

SD大鼠造模2周后，除正常组外其余各组大鼠按照血清TC水平重新分成5组，每组10只(模型组与给药组血清TC水平无统计学差异)。这5组分别为：模型对照组，1 mg/kg依折麦布组(相当于1倍人体推荐剂量)，800 mg/kg铁皮枫斗胶囊组(相当于人体推荐量的20倍)，400 mg/kg铁皮枫斗胶囊组(相当于人体推荐量的10倍)，200 mg/kg铁皮枫斗胶囊组(相当于人体推荐量的5倍)。

2.3 检测指标

2.3.1 一般体征 每周记录2次体重，观察大鼠一般体征(包括毛色、精神状态、粪便等)，并记录大鼠是否出现弓背蜷缩、毛发凌乱等情况。

2.3.2 血清生化指标测定 造模后第2周及给药第2、4周，于大鼠眼底静脉丛取血，检测正常组、模型组、依折麦布组、铁皮枫斗胶囊组(0.8 g/kg、0.4 g/kg、0.2 g/kg)大鼠血清TC、TG、HDL-C、LDL-C水平，于给药第4周测定大鼠血清ALT、AST指标。

2.3.3 酶联免疫吸附(ELISA)指标测定 灌胃给药第4周大鼠眼底静脉丛取血，检测正常组、模型组、依折麦布组、800 mg/kg铁皮枫斗组大鼠血清的ACAT及LCAT酶联免疫吸附指标。具体步骤如下：利用双抗体夹心法，在包被有固相抗体的板中，使血清中的酶与辣根过氧化物酶标记的ACAT、LCAT抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，加三甲基硼显色，并在酸的作用下终止反应，在450 nm波长测定吸光度，计算大鼠血清ACAT、LCAT含量。

2.4 统计学处理

3 实验结果

3.1 对高胆固醇血症大鼠血脂水平的影响

SD大鼠造模2周时，与正常对照组相比，模型对照组和各给药组大鼠血清TC、TG、LDL-C、显著升高(P<0.01)，与模型对照组相比，各给药组大鼠血清TC、TG、LDL-C、HDL-C无统计学差异，结果见表1。灌胃给药第2周，与正常对照组相比，模型对照组大鼠血清TC、TG、LDL-C显著升高(P<0.01)；与模型对照组相比，800 mg/kg铁皮枫斗组大鼠血清TC、LDL-C显著降低(P<0.05)，结果见表2。SD大鼠灌胃给药第4周，与正常对照组相比，模型对照组大鼠血清TC、TG、LDL-C显著升高(P<0.01～0.05)。与模型对照组相比，800 mg/kg、400 mg/kg铁皮枫斗组大鼠血清TC显著降低(P<0.05)；800 mg/kg、400 mg/kg铁皮枫斗组大鼠血清LDL-C显著降低(P<0.01～0.05)，结果见表3。

组别剂量(mg·kg-1)TC (mmol·L-1)TG (mmol·L-1)HDL-C (mmol·L-1)LDL-C (mmol·L-1)正常对照-1.53±0.180.51±0.100.51±0.071.10±0.13模型对照-2.25±0.31##1.18±0.28##0.53±0.061.49±0.24##依折麦布组12.30±0.32##1.08±0.23##0.52±0.071.58±0.21##8002.35±0.32##0.96±0.32##0.56±0.091.61±0.25##铁皮枫斗组4002.28±0.35##1.09±0.45##0.55±0.091.46±0.26##2002.34±0.27##1.12±0.21##0.52±0.081.61±0.23##

注：n=10；与正常对照组比较，#P<0.05，##P<0.01；与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。

组别剂量(mg·kg-1)TC (mmol·L-1)TG (mmol·L-1)HDL-C (mmol·L-1)LDL-C (mmol·L-1)正常对照组—1.44±0.300.40±0.280.42±0.111.03±0.27模型对照组—2.38±0.34##0.67±0.26##0.45±0.121.64±0.30##依折麦布组11.77±0.21*0.48±0.330.43±0.101.25±0.20**8002.06±0.28*0.62±0.200.46±0.141.32±0.21*铁皮枫斗组4002.11±0.210.60±0.250.41±0.091.56±0.302002.20±0.230.68±0.140.41±0.121.63±0.21

注：n=10；与正常对照组比较，#P<0.05，##P<0.01；与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。

组别剂量(mg·kg-1)TC (mmol·L-1)TG (mmol·L-1)HDL-C (mmol·L-1)LDL-C (mmol·L-1)正常对照组-1.64±0.390.80±0.190.53±0.180.91±0.35模型对照组-2.79±0.32#0.99±0.17#0.53±0.051.71±0.12##依折麦布组12.20±0.19**0.82±0.18*0.54±0.051.15±0.20**8002.32±0.21*0.90±0.150.51±0.061.38±0.17**铁皮枫斗组4002.50±0.26*0.88±0.200.54±0.071.45±0.22*2002.58±0.431.09±0.140.50±0.091.51±0.26

注：n=10；与正常对照组比较，#P<0.05，##P<0.01；与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。

3.2 灌胃给药4周对高胆固醇血症大鼠血清ALT和AST水平的影响

灌胃给药第4周，与正常对照组比，模型组大鼠血清AST、ALT均显著升高(P<0.01)。与模型对照组相比，800 mg/kg铁皮枫斗组大鼠血清ALT显著降低(P<0.05)，AST有下降趋势，但无统计学差异(P>0.05)，结果见表4。

组别剂量(mmol·L-1)ALT (mmol·L-1)AST (mmol·L-1)正常对照组-52.10±10.95114.50±29.71模型对照组-78.20±8.15##155.00±30.65##依折麦布组163.33±11.77**117.67±23.79**80071.50±9.26*142.88±20.02铁皮枫斗组40078.70±11.73145.75±17.0620079.90±8.84140.50±26.48

注：n=10；与正常对照组比较，#P<0.05，##P<0.01；与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。

3.3 灌胃给药4周对高胆固醇血症大鼠血清LACT及ACAT的影响

灌胃给药第4周，与正常对照组比，模型组大鼠血清LCAT显著降低(P<0.05)；与模型对照组比，800 mg/kg铁皮枫斗组大鼠血清LCAT显著升高(P<0.05)，结果见表5。

组别剂量 (mg·kg-1)LCAT (U/L) ACAT (U/L)正常对照组-96.91±13.88178.93±17.86模型对照组-85.83±6.08#173.66±19.94阳性药组190.55±9.73180.15±17.66铁皮枫斗组80095.63±11.92*175.46±16.91

注：n=10；与正常对照组比较，#P<0.05，##P<0.01；与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。

3.4 铁皮枫斗对高胆固醇血症模型大鼠一般体征的影响

实验过程中，正常对照组大鼠行动灵活，毛发光泽，食量正常。灌胃给药4周，模型对照组大鼠和200 mg/kg铁皮枫斗给药组个别大鼠毛发松乱、暗淡，精神差，活动减少。实验过程中，模型组大鼠体重增长一直高于正常对照组与各给药组大鼠，结果见图1。

图1 铁皮枫斗胶囊对高胆固醇血症大鼠体重的影响

4 讨论

高血脂是心血管疾病的重要危险因素，而我国近年来血脂异常的发生率逐年升高。目前临床一线的降脂药长期用药仍存在横纹肌溶解、肌肉疼痛、痉挛等安全问题，且血脂异常的发病机制涉及多种途径，单一的降脂方式不可能适合所有高脂血症的患病类型。铁皮枫斗胶囊具有补肾养肝的功效，而肝肾阴虚、脾失健运为高脂血症的主要发病机制之一[8]，因此，开发铁皮枫斗胶囊辅助降血脂具有一定的可行性。

总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白是反映生物体内脂质代谢变化的重要指标。甘油三酯、低密度脂蛋白过高容易造成血管壁脂质沉积，增加心血管疾病的风险。本实验通过高脂饲料喂养成功建立大鼠高胆固醇血症模型，模型组大鼠TC、TG、LDL-C显著升高。给药4周后，森山牌800 mg/kg、400 mg/kg铁皮枫斗胶囊组大鼠的TC、LDL-C水平显著降低，说明铁皮枫斗胶囊具有一定的辅助降血脂功能。此外，实验发现与模型组相比，800 mg/kg铁皮枫斗组能够降低高胆固醇大鼠血清ALT水平，而长期高脂饮食会引起肝脏代谢紊乱，引发脂肪肝、肝硬化等问题，实验结果为进一步研究铁皮石斛对肝脏的作用提供了依据。

LCAT、ACAT等是参与机体脂质代谢转运的重要酶类，其中LCAT是胆固醇逆向转运的关键酶，LCAT酶能把卵磷脂中的酰基转移到游离胆固醇上，生成胆固醇酯和卵磷脂，并促进胆固醇酯向HDL内核转移，参与HDL的成熟与代谢，LCAT浓度与甘油三酯、总胆固醇呈负相关[9，10]。ACAT是细胞内唯一催化胆固醇酯合成的酶，可调节全身胆固醇平衡，与高血脂、冠状动脉硬化等多种疾病密切相关[11]。本实验于给药第4周测定铁皮枫斗800 mg/kg剂量组大鼠血清中LCAT 和ACAT含量，发现与模型组相比，铁皮枫斗800 mg/kg组大鼠血清LCAT明显升高，提示铁皮枫斗可能通过调节体内脂质代谢，促进胆固醇转运来调节大鼠血脂水平。

综上所述，铁皮石斛能降低高胆固醇血症大鼠血清总胆固醇、低密度脂蛋和血清谷丙转氨酶，具有调节血脂，滋养肝体的作用，初步推断其机制与促进胆固醇代谢转运有关。实验结果表明铁皮石斛具有一定的辅助降血脂作用，为研究开发新的保健药品提供了实验依据。