脆皮肠盲样中山梨酸含量的测定

2019-10-11 14:08阳文武黄小兰周祥德
食品工程 2019年3期
关键词:乙酸铵山梨酸定容

阳文武 黄小兰 周 浓 周祥德*

1(重庆市万州食品药品检验所,重庆 404000)2(重庆三峡学院生物与食品工程学院,重庆 404120)

山梨酸是化学合成的防腐剂,能够抑制食品中微生物的生长和繁殖,从而延长食品的保存时间,保持食品原有的品质和营养价值,是我国目前用量最大的食品防腐剂之一。但山梨酸具有一定的毒性,因此必须对它的使用量和残留量加以控制。国家标准GB 2760—2014 规定,脆皮肠中允许添加一定量的山梨酸,因此对脆皮肠中山梨酸建立快捷、准确的测定方法很有必要。目前常用的方法有薄层法、气相色谱法、液相色谱法。其中液相色谱法高效、快速、灵敏度高,适合大批量样品的检测。

1 材料与方法

1.1 仪器与试药

Agilent1260 型高效液相色谱仪;KH-2000DB超声清洗机;Sartorius 万分之一电子分析天平(QUINTIX224-1CN)。

山梨酸对照品溶液,购买于北京曼哈格生物科技有限公司,批号:25561YW,170412;甲醇、甲酸,均为色谱纯;其他试剂均为分析纯。

1.2 试剂溶液配制

亚铁氰化钾溶液(92 g/L):称取106 g 三水亚铁氰化钾,加入适量水溶解,用水定容至1 000 mL。

乙酸锌溶液(183 g/L):称取220 g 二水乙酸锌溶于少量水中,加入30 mL 冰乙酸,用水定容至1 000 mL。

乙酸铵溶液(20 mmol/L):称取1.54 g 乙酸铵,加入适量水溶解,用水定容至1 000 mL,经孔径0.22 μm 水相微孔滤膜过滤后备用。

甲酸- 乙酸铵溶液(2 mmol/L 甲酸+20 mmol/L乙酸铵):称取1.54 g 乙酸铵,加入适量水溶解,再加入75.2 μL 甲酸,用水定容至1 000 mL,经孔径0.22 μm 水相微孔滤膜过滤后备用。

1.3 标准溶液配制

山梨酸标准中间液:吸取标准溶液(含量为1.0 mg/mL)1.0 mL 于10 mL 容量瓶中,用水定容至刻度,得质量浓度为100 μg/mL 的标准中间液,贮存于4 ℃冰箱中。

山梨酸标准系列工作液:分别准确吸取不同体积的标准中间液,用水将其稀释成山梨酸含量分别为1 μg/mL、5 μg/mL、10 μg/mL、20 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL 的标准系列工作液,临用现配。

1.4 供试品溶液的制备

准确称取约2 g(精确到0.001 g)试样于50 mL 具塞离心管中,加水约25 mL,涡旋混匀,于50℃水浴超声(功率300W,频率40kHz)20min,冷却至室温后加亚铁氰化钾溶液2 mL 和乙酸锌溶液2 mL,混匀,于8 000 r/min 离心5 min,将水相转移至50 mL 容量瓶中,于残渣中加水20 mL,涡旋混匀后超声5 min,于8 000 r/min 离心5 min,将水相转移到同一50 mL 容量瓶中,并用水定容至刻度,混匀。取适量上清液过孔径0.22 μm 滤膜,待液相色谱测定。在此基础上考察了另外4 种前处理方式对山梨酸提取效率的影响。

1.5 仪器条件

色谱柱:Diamonsil C18(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相:乙酸铵溶液∶甲醇=95 ∶5,流速:1.0 mL/min;检测波长:230 nm;柱温:30 ℃;进样量:10 μL。对流动相进行了优化。

2 结果与分析

2.1 流动相比例对分离效果的影响

在1.5 仪器条件下,山梨酸的保留时间为9.6 min,但样品峰有前沿,如图1 所示。

图1 色谱图(乙酸铵溶液∶甲醇=95∶5)

为使样品目标峰分离良好,在1.5 仪器条件基础上将流动相比例调整为乙酸铵溶液∶甲醇=97∶3,流速降为0.9 mL/min 进行测定,色谱图见图2。由图2 可知,结果目标峰出峰时间延迟至11.5 min,样品峰有前沿。

图2 色谱图(乙酸铵溶液∶甲醇=97∶3)

水相比例已经很大,不太可能通过延迟出峰时间来达到分离目标峰的目的,于是加大有机相比例,调整为乙酸铵溶液∶甲醇=92∶8 进行测定,色谱图见图3。由图3 可知,出峰时间提前至8.7 min,样品峰有比较好的分离。

图3 色谱图(乙酸铵溶液∶甲醇=92∶8)

2.2 前处理方式对山梨酸提取效率的影响

在1.5 仪器条件下,将流动相比例调整为乙酸铵溶液∶甲醇=92∶8,考查5 种前处理方式对山梨酸提取效率的影响,结果见表1。

表1 不同前处理方式对山梨酸测定值的影响

由表1 可以看出,经过4 次提取后,样品中的山梨酸基本被提取出来。另外比较第4 组和第5 组数据,可见沉淀剂对样品中的山梨酸有微弱的吸附作用。

2.3 不同流动相对分离效果的影响

为使测得的数据更加科学、准确,采用流动相甲酸- 乙酸铵溶液(2 mmol/L 甲酸+20 mmol/L 乙酸铵∶甲醇=92∶8 进行验证,结果出峰时间延迟至16.8 min,色谱图见图4。在此仪器条件下,重新测定了上述5 组样品,结果见表2。

由表2 可以看出,5 组样品的山梨酸值均有下降,可以初步推断:当流动相为乙酸铵∶甲醇=92∶8 条件下,样品峰还是有包裹,且与目标峰完全重叠。

图4 色谱图(甲酸- 乙酸铵溶液∶甲醇=92∶8)

表2 不同前处理方式对山梨酸值的影响

3 结 论

本次盲样的真实值为0.140 g/kg,与表2 中2组、3 组的值非常接近,由此可见,在测定脆皮肠中山梨酸时,流动相应选用甲酸- 乙酸铵溶液(2 mmol/L 甲酸+20 mmol/L 乙酸铵)∶甲醇=92∶8,前处理方式应为:每次于残渣中加少量水,提取4次。

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