雌激素受体基因多态性与雷洛昔芬对绝经后女性骨质疏松症疗效的关系

陈娟　郭凯　李惠莉　孙灵通

[摘要] 目的 分析雌激素受體基因多态性与雷洛昔芬对绝经后女性骨质疏松症联系，并明确是否疗效与基因型存在联系。 方法 回顾性分析本院2015年1月～2017年12月绝经后女性骨质疏松症患者57例，所有患者均接受雷洛昔芬和钙尔奇治疗，治疗持续12个月，同时检测患者基因型。对比治疗前后患者骨密度、骨钙素、Ⅰ型胶原C端肽水平，分析疗效与基因型联系。 结果 治疗后患者骨密度明显高于治疗前，骨钙素和Ⅰ型胶原C端肽水平明显低于治疗前，差异有统计学意义（P<0.05）。治疗前，对校正年龄、体质指数、绝经年限等影响因素进行协方差分析，发现基因位点与骨密度、骨钙素和Ⅰ型胶原C端肽水平差异均无统计学意义（P>0.05）;治疗后，对校正年龄、体质指数、绝经年限等影响因素进行协方差分析，发现ESRI基因上rs3844508位点纯合突变型和杂合基因型（G/C、G/A）股骨颈骨密度水平有所上升，且高于纯合野生型（A/A），差异有统计学意义（χ2=18.474，P<0.05）。其余位点与其他位置骨密度、骨钙素和Ⅰ型胶原C端肽水平差异无统计学意义（P>0.05）。 结论 通过雷洛昔芬治疗，绝经后女性骨质疏松症患者各项生理指标得到改善，而且ESRI基因上rs3844508位点与绝经后女性骨质疏松症有一定关联。

[关键词] 雌激素受体基因多态性;雷洛昔芬;绝经后女性骨质疏松症

[中图分类号] R711          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-9701（2019）23-0008-03

[Abstract] Objective To analyze the relationship between estrogen receptor gene polymorphism， raloxifene and efficacy in postmenopausal women with osteoporosis， and to determine whether the efficacy is related to genotype. Methods 57 patients with postmenopausal women with osteoporosis from January 2015 to December 2017 were retrospectively analyzed. All patients were treated with raloxifene and caltrate. The treatment lasted for 12 months and the patient's gene type was detected. The bone mineral density， osteocalcin and type Ⅰ collagen C-terminal peptide levels were compared before and after treatment， and the correlation of therapeutic effect and genotype was analyzed. Results The bone mineral density of patients after treatment was significantly higher than that before treatment. The levels of osteocalcin and type Ⅰ collagen C-terminal peptide after treatment were significantly lower than before treatment， and the difference was statistically significant（P<0.05）. Before treatment， covariance analysis was performed on the influencing factors such as adjusted age， body mass index and menopausal age. It was found that there was no statistical significance between gene locus and bone mineral density， osteocalcin and type I collagen C-terminal peptide（P>0.05）. After treatment， covariance analysis was performed on the influencing factors such as adjusted age， body mass index and menopausal age. It was found that the rs3844508 locus homozygous mutant and heterozygous genotype（G/C， G/A） in the ESRI gene had increased bone mineral density. The percentage increased and was higher than the percentage of homozygous wild type （A/A）， and the difference was statistically significant（χ2=18.474， P<0.05）. There were no significant differences in bone mineral density， osteocalcin and type I collagen C-terminal peptide levels between the remaining sites and other locations（P>0.05）. Conclusion The physiological indicators of postmenopausal women with osteoporosis are improved by raloxifene treatment， and the rs3844508 locus on ESRI gene is associated with postmenopausal women with osteoporosis.

[Key words] Estrogen receptor gene polymorphism;Raloxifene;Postmenopausal women osteoporosis; Clinical study

骨质疏松症是常见代谢类疾病，临床表现较多，而且骨折风险升高，临床上治疗方式较多[1]。绝经后女性骨质疏松症发病率有一定上升，临床一般通过服用雷洛昔芬进行治疗。雷洛昔芬可以调节人体雌激素受体水平，强化人体骨密度，减少骨折风险。随着研究持续深入，发现雌激素受体存在两种亚型，ESR1和ESR2，且两种亚型结构类似，雷洛昔芬通过和雌激素受体两种亚型结合，发挥根本作用[2]。结合雷洛昔芬本身作用机制，发现ESR1和ESR2基因遗传变异与雷洛昔芬抗骨质疏松症疗效有直接关联[3]。我院对雌激素受体基因多态性与雷洛昔芬对绝经后女性骨质疏松症联系展开研究，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料

回顾性分析本院2015年1月～2017年12月绝经后女性骨质疏松症患者57例，所有患者均接受雷洛昔芬和钙尔奇治疗。其中，所有女性均自然绝经，且绝经年数>2年。患者年龄52～77岁，平均（64.1±5.2）岁，平均体质指数（22.9±2.3）kg/m2，平均绝经年龄（48.8±6.5）岁。

纳入标准：（1）所有研究对象均符合绝经后女性骨质疏松症诊断标准[4];（2）年龄>50岁;（3）无其他妇科疾病;（4）所有研究对象及其家属均知晓本项研究，并在同意书上签字;（5）该实验经医院伦理委员会批准实施;（6）资料健全者;（7）无其他脏器系统病变者。排除标准：（1）患有骨矿疾病;（2）肝、肾功能不健全;（3）服用类固醇或抗惊厥药物[5];（4）恶性肿瘤;（5）双侧卵巢被切除[6];（6）精神障碍;（7）中途退出/转院者或不愿加入本次研究且不予合作者。

1.2方法

1.2.1 治疗方法  所有患者均服用雷洛昔芬片（江苏恒瑞医药股份有限公司，60 mg/片，国药准字H20050899），1次/d，每次1片;同时服用钙尔奇D（苏州立达制药有限公司，600 mg/片，国食健字G20050046），1次/d，每次1～2片。治疗持续12个月。

1.2.2 实验室检查  空腹清晨抽取患者静脉血，离心获取血清，使用电化学发光免疫分析法测定骨钙素、Ⅰ型胶原C端肽水平。

1.2.3 骨密度检查  使用Hologic QDR 2000型双能X线吸收仪，测定患者L2～4、左髋部和股骨颈骨密度。变异系数均为0.96%。

1.2.4 基因型测定  通过丙醇法进行DNA提取，运用SNaPshot SNP分型技术检测所有基因型。

1.3观察指标

对比治疗前后患者骨密度、骨钙素、Ⅰ型胶原C端肽水平，分析疗效与基因型联系。

1.4 统计学方法

应用SPSS18.0统计学软件对实验结果进行分析，计数资料以百分比表示，采用χ2检验。计量资料以（x±s）表示，采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 治疗前后骨密度、骨钙素和Ⅰ型胶原C端肽水平比较

治疗后患者骨密度明显高于治疗前，骨钙素和Ⅰ型胶原C端肽水平明显低于治疗前，差异具有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.2 基因多态性与治疗前后骨密度、骨钙素和Ⅰ型胶原C端肽水平关系

治疗前，对校正年龄、体质指数、绝经年限等影响因素进行协方差分析，发现基因位点与骨密度、骨钙素和Ⅰ型胶原C端肽水平差异均无统计学意义（P>0.05）;治疗后，对校正年龄、体质指数、绝经年限等影响因素进行协方差分析，发现ESRI基因上rs3844508位点纯合突变型和杂合基因型（G/C、G/A）股骨颈骨密度水平有所上升，而且高于纯合野生型（A/A），差异具有统计学意义（χ2=18.474，P<0.05）。其余位点与其他位置骨密度、骨钙素和Ⅰ型胶原C端肽水平差异无统计学意义（P>0.05）。见表2。

3 讨论

雷洛昔芬是一种人工合成药物，属于非类固醇类、苯噻酚化合物，具有较高选择性，可以与雌激素受体结合，强化绝经后女性骨骼[7]。在目前研究中[8-9]，已经知晓雷洛昔芬治疗绝经后女性骨质疏松症的作用机制，不同靶器官ESR1和ESR2表达以及ESR1和ESR2比例不同与之后生物学效应的产生有直接联系，当通过雌激素效应通路时，候选基因转化生长因子β途径等活动会发挥雌激素激动剂作用，以介导阻断的方式中断AF-2基因转录，从而发挥雌激素拮抗剂样作用。

但目前临床上关于雷洛昔芬的研究报道相对较少，而且骨质疏松症的治疗是一个漫长过程，再结合不同基因型，会采用不同药物进行治疗，也是目前研究重点内容。研究表明，雌激素可以与膜受体结合诱导快速的细胞内反应，可调节多种细胞内磷酸化级联途径来发挥非核效应，这些效应包括激活腺甘酸环化酶（AC）、MAPK、磷脂酰肌醇 3-激酶（PI3K）或增加胞内钙离子浓度等。结合本次实验内容表明，ESR1基因存在Pvu Ⅱ和Xba Ⅰ多态性，而且通过纯合子基因与杂合子基因比较，发现纯合子基因骨密度上升更为明显，而且相应生理指标下降幅度较大，二者间存在显著差异。并且在随后通过对外显子、外显子/内含子交界区以及5-启动子等功能区域标签SNPs进行分析，结合对各位点基因型中的骨密度以及股转换指标进行分析，并未发现明显差异。当持续用药1年后再次对研究对象进行复查，会发现人体L2～4和股骨颈骨密度有所上升，并且股骨颈骨密度变化水平与ESR1的rs3844508位点基因型有边缘相关关系，并且相对于纯合野生型（A/A），结合突变型（G/G）和杂合基因型（G/A）更为明显[10]。在骨转换指标复查当中，会发现血液Ⅰ型胶原C端肽和骨钙素水平有所下降，但各位点间骨转换指标无差异。但本次实验由于实验样本纳入数量较少，所以实验结果无法得到准确验证，需扩大实验对象纳入范围以及人数，进行大样本研究，才可以确定雌激素受体基因多态性与雷洛昔芬之间的确切关联。本研究的特色和创新之处：本研究对接受雷洛昔芬和钙尔奇治疗的绝经后女性骨质疏松症患者景象雌激素受体基因检验，通过对比治疗前后骨密度、骨钙素和Ⅰ型胶原C端肽水平、基因多态性与治疗前后骨密度、骨钙素和Ⅰ型胶原C端肽水平关系，探讨雌激素受体基因多态性与雷洛昔芬对绝经后女性骨质疏松症联系，并明确疗效与基因型之间的联系。项目风险分析与对策：病例数量不足：為尽可能准确性的以样本估计总体，减小抽样误差，可提升样本量。

綜上所述，通过雷洛昔芬治疗，绝经后女性骨质疏松症患者各项生理指标得到改善，且ESRI基因上rs3844508位点与绝经后女性骨质疏松症有一定关联。

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（收稿日期：2019-02-24）