天冬配方颗粒中5-羟甲基糠醛的测定

魏福荣，聂丽云，徐飞鹏

(江苏吉贝尔药业股份有限公司，江苏 镇江 212009)

天冬为百合科植物天冬Asparaguscochinchinensis(Lour.) Merr.的干燥块根，常用于缓解肺部燥热并时常伴有干咳，咳痰，喉咙干渴，新陈代谢不规律等症[1]。现代研究表明天冬具有抗衰老[2]、抗炎症反应[3]、缓解咳喘[4]、降血糖[5]等作用。天冬配方颗粒是以天冬饮片为原料，经水煎煮、干燥等工艺加工生产制成。作为新型中药剂型，服用时只需加热水冲服便可以达到很好的服用效果，相较于传统汤剂具有方便，效率高，便于贮藏等优点[6]。

5-羟甲基糠醛(5-HMF)是单糖在高温、酸性等条件下脱水产生的醛类化合物。天冬本身含有大量糖类，在制备配方颗粒过程中进行高温煎煮，可能会产生一定量5-HMF。该成分对人体横纹肌和内脏有损害，可能引起血栓性静脉炎、促进皮肤癌等不良反应，且有潜在致癌风险。2015年版《中国药典》中将己酮可可碱葡萄糖注射液及甘油果糖氯化钠注射液等均对5-HMF进行了限度控制[1]。因此，天冬配方颗粒中5-HMF的控制对临床安全应用有重要意义。

1 仪器与试药

岛津 SIL-10A高效液相色谱仪， Milli-Q超纯水仪；岛津 AY220电子天平。5-羟甲基糠醛(批号：111626-201711，中国食品药品检定研究院，纯度99.4%)，天冬配方颗粒(自制，批号18001、18002、18003、18004、18005、18006、18007、18008，4 g/每袋，相当于饮片10g)。甲醇(色谱纯，Merck公司)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

图1 对照品溶液色谱图

图2 供试品溶液色谱图

Waters Symmetry®C18色谱柱(4.6×250 mm，5 μm)，流动相为甲醇-水(5∶95)。柱温：40℃；流速：1 mL/min；进样量：10 μL；检测波长：284 nm。5-HMF的色谱峰与其它色谱峰分离良好，色谱图见图1和图2。

2.2 供试品溶液的制备

取天冬配方颗粒1 g，精密称定，加1 g硅藻土搅拌均匀，置100 mL锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，称定重量，超声处理50 min。放冷后称重，用50%甲醇补足减失的重量，混匀。取上清液25 mL，回收溶剂，残渣加50%甲醇溶解并稀释至5 mL量瓶中，摇匀即得。

2.3 线性关系考察

精密称取5-HMF对照品8.55 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取该溶液1 mL，置50 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得系列对照品溶液17.00、8.50、4.25、2.12、1.06 μg/mL。精密吸取上述对照品溶液10 μL，HPLC测定，记录峰面积。每份溶液进样2次，得平均峰面积。以5-HMF对照品浓度(μg/mL)为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，得线性回归方程Y=48674X+9884(r=0.9998)，线性范围为1.06～17.00 μg/mL。

2.4 精密度试验

取18008批天冬配方颗粒，照“2.2 供试品溶液的制备”项下方法制备供试品溶液。精密吸取该溶液10 μL，HPLC测定，记录峰面积。连续进样6次，求平均峰面积和RSD(%)。结果表明精密度良好，见表1。

2.5 稳定性试验

取18008批天冬配方颗粒，照“2.2 供试品溶液的制备”项下方法制备供试品溶液。于0、2、4、6、8、10 h，分别精密吸取该溶液10 μL，HPLC测定，记录峰面积。求平均峰面积和RSD(%)。结果表明10 h内稳定性良好，见表1。

表1 精密度试验与稳定性试验结果

2.6 检测限与定量限

将对照品溶液逐步稀释，HPLC测定，记录色谱图。以信噪比约为2∶1至3∶1时，作为检测限，为0.05 μg/mL。

2.7 重复性试验

取18008批冬配方颗粒6份，每份1g，精密称定，照“2.2 供试品溶液的制备”项下方法制备供试品溶液。精密吸取该溶液10 μL，HPLC测定，记录峰面积。每份溶液进样2次，求平均峰面积，以标准曲线法计算含量。6份天冬配方颗粒中5-HMF的含量分别为0.0704、0.0704、0.0698、0.0684、0.0664、0.0688 mg/g，平均含量为0.0690 mg/g，RSD为2.22%，表明重复性良好。

2.8 回收率试验

取18008批天冬配方颗粒6份，每份0.5 g，精密称定，精密加入17.00 μg/mL对照品溶液2 mL，照“2.2 供试品溶液的制备”项下方法制备供试品溶液。精密吸取该溶液10 μL，HPLC测定，记录峰面积。每份溶液进样2次，求平均峰面积，计算回收率。结果见表2。

表2 回收率试验结果

表2(续)

2.9 含量测定

取不同批次的天冬配方颗粒，照“2.2 供试品溶液的制备”项下方法制备供试品溶液。精密吸取该溶液10 μL，HPLC测定，记录峰面积。每份溶液进样2次，求平均峰面积，以标准曲线法计算含量。

表3 含量测定结果

结果表明，8批天冬配方颗粒中5-HMF含量介于0.0256～0.0986 mg/g之间，平均含量为0.0647 mg/g。

3 讨论

(1)在确定供试品溶液制备方法之前，考察了不同提取溶剂(25%甲醇、50%甲醇、75%甲醇、甲醇)、不同溶剂体积(30、40、50 mL)、不同提取时间(30、40、50 min)对5-HMF提取效率的影响。结果表明50%甲醇50 mL，超声处理50 min，效果最好。

(2)目前5-HMF的限度控制争议很大，其危害性并无充分的理论依据。欧盟食品安全委员会食品添加剂、香料、加工助剂及食品接触材料科学小组以修正理论加权最大日摄入量法为基础进行研究，认为每人每天摄入的5-HMF的上限为1.6 mg，而联合食品添加剂专家委员会在1996 年通过大量急性和亚急性动物毒理实验所得到的标准为每人每天540 μg[7]。天冬每日服用量为6～12 g，折算为配方颗粒为2.4～4.8 g，根据含量测定结果，其中5-HMF含量并未超过上限值，安全性较高。

(3)本研究所建立的5-HMF测定方法，操作简单方便、快速灵敏，为天冬配方颗粒的质量控制奠定基础。