平阳县猪繁殖障碍性疫病的血清学调查

林明星，余见栋，王国庆，吴志远2，沈鸯鸯

(1.平阳县动物疫病预防控制中心，浙江 平阳 325400； 2.平阳县农业农村局)

猪繁殖障碍性疫病是一类疫病的统称。引起猪繁殖障碍的疾病很多，目前普遍认为能够引起猪繁殖障碍的传染性疫病主要有猪瘟(CSF)、猪繁殖与呼吸障碍综合征(PRRS)、猪伪狂犬病(PR)、猪细小病毒病(PP)、猪乙型脑炎(JE)、猪圆环II型病毒病(PCV-2)、猪布鲁氏菌病等[1-2]，而病毒性疫病所造成的危害更大，特别在自繁自养和繁育为目的的规模养殖场，给养猪业造成了较大的经济损失，严重制约了养猪业的发展。猪繁殖障碍性疫病，以母猪发情期延迟或不发情、返情、不孕；妊娠猪流产、早产，产死胎、木乃伊胎、畸形胎、无活力的弱仔，少仔；初生仔猪吃奶无力或不吃奶，先天衰弱，哺乳仔猪发病死亡，仔猪成活率低及公猪性欲低下、配种力下降、精液品质下降﹑睾丸炎等为其主要特征[3-4]。近年来，随着养猪业呈集约化、规模化的发展，疾病也越来越复杂，其中猪繁殖障碍性疫病的发生率逐年上升，已成为规模养猪场最重要疾病之一，严重威胁养猪业的发展。对于平阳县猪场，以及新建猪场的免疫效果和疫病流行情况，尤其是隐性感染缺乏了解。本研究通过血清学的方法对平阳县生猪养殖场送检的血清分别进行了CSFV、PRRSV、PRV、PPV和JEV等5种猪繁殖障碍性疫病病毒的免疫抗体检测和PRV野毒(gE)抗体检测。通过免疫抗体水平检测，掌握了猪群免疫状态和猪场群体的抗体水平，科学评价免疫效果，优化免疫程序，对达不到标准的猪场及时补针，保证疫苗免疫效果，保障和促进生猪养殖业的健康可持续发展。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1血清来源 样品采集自平阳县11个乡镇生猪养殖场，分免疫和未免疫的两类，养殖场按生猪存栏规模分为100头以上规模场和100头以下的散养场。样品采样后置于-20℃下保存备用及检测。

1.1.2养殖场的免疫情况

CSF：21-28日龄首免，60日龄二免，后备公母猪150-160日龄、180-190日龄各补免一次；经产母猪、种公猪次年起每年普免3次；

PRRS：15日龄或45日龄首免，过60日龄后二免；后备母猪160-170日龄、200日龄各补免一次；经产母猪、种公猪次年起每年普免3次；

PR：1日龄首免，75日龄二免，或45日龄首免，100日龄二免；后备母猪150-160日龄、180-190日龄各补免一次；经产母猪、种公猪次年起每年普免3次；

PP和JE：母猪和种公猪3、9月普免，母猪产后15-21 d跟胎2免。

1.1.3主要试剂和仪器 猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒ELISA抗体检测试剂盒(生产批号：CPA.7G82)，购自西班牙海博莱公司；猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒(生产批号：1CABB18113)，购自韩国金诺；猪伪狂犬病毒ELISA抗体检测试剂盒(生产批号：107HS891)，购自韩国金诺；猪细小病毒ELISA抗体检测试剂盒(生产批号：018017)，猪乙型脑炎病毒ELISA抗体检测试剂盒(生产批号：018011)，均购自深圳芬德生物科技有限公司。

主要仪器有酶标仪、恒温培养箱、离心机等。

1.2方法

1.2.1血清处理 血液样品自-20℃取出后先于室温放置30 min后，再置4℃冰箱中30 min，室温下4000 r/min离心5 min，收集上清液置一新EP管中，按照抗体检测试剂盒说明，各取血清分别进行猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒、猪伪狂犬病毒、猪细小病毒、猪乙型脑炎病毒5种病毒的ELISA抗体检测。

1.2.2结果判断 通过ELISA抗体检测试剂盒对5种病毒性疫病进行抗体水平检测，结果判定标准如下：

1.2.2.1 猪瘟病毒 样品PC值=(阴性对照血清OD450nm平均值-样品OD450nm)/(阴性对照血清OD450nm平均值-阳性对照血清OD450nm平均值)*100%；样品PC值≥40%，判为阳性；样品PC值<40%，判为阴性。

1.2.2.2 猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒 结果用IRPC表示，以下是计算公式 IRPC=(OD450nm样品-OD450nm阴性对照平均值)/(OD450nm阳性对照平均值-OD450nm阴性对照平均值)*100，IRPC>20，判为阳性；IRPC≤20，判为阴性。

1.2.2.3 猪伪狂犬病毒GB/GE 计算待检样品SN值，样品SN值=样品OD450nm/OD450nm阴性对照平均值，S/N值≤0.6，判为阳性；S/N值>0.6，判为阴性。

1.2.2.4 猪细小和乙型脑炎病毒 于450 nm(用630 nm作参比波长)测定各孔吸光值(A值)，样品A值≥0.38，为阳性；样品A值在0.2到0.38之间为可疑；样品A值<0.2为阴性。

2 结 果

对采集自平阳县11个乡镇不同养殖规模、不同批次的血清样本进行了CSFV、PRRSV、PRV、PPV和JEV等5种繁殖障碍性疫病免疫抗体水平的检测和PRV gE抗体的检测，累计检测2913样次，结果见表1。

表1 平阳县生猪养殖场5种猪繁殖障碍性疫病的免疫抗体水平和PRV非抗体水平

由表1可知免疫群体中CSFV总体免疫抗体阳性率为89.25%，其中规模猪场的免疫阳性率达到91.98%，散养户的免疫阳性率仅达到55.74%；PRRSV总体免疫阳性率为87.18%，其中规模猪场的免疫阳性率达到93.37%，散养户的免疫阳性率仅达到22.95%；PRV gB、PPV和JEV规模场的免疫阳性率分别为52.81%、84.01%和96.32%，散养户均未免疫。野毒抗体检测PRV gE的抗体阳性率为12.83%。

3 结论与讨论

对平阳县11个乡镇生猪养殖场的CSFV、PRRSV、PRV、PPV和JEV等5种血清学免疫抗体检测结果表明，免疫群体中CSFV总体免疫抗体阳性率为89.25%，其中规模猪场的免疫阳性率达到91.98%，散养户的免疫阳性率仅达到55.74%；PRRSV总体免疫阳性率为87.18%，其中规模猪场的免疫阳性率达到93.37%，散养户的免疫阳性率仅达到22.95%；PRV、PPV 和JEV规模场的免疫阳性率分别为52.81%、84.01%和96.32%，散养户均未免疫。从病种免疫结果分析，PRV免疫效果一般；从养殖规模来看，散养户免疫效果较差或是未进行免疫。生猪养殖场需制定更科学合理的免疫程序并实施，同时散养户的免疫防控还需进一步完善。

猪伪狂犬病(PR)是由伪狂犬病病毒(PRV) 引起的一种高度接触性传染病，广泛存在于我国不同地区的猪场中。种猪主要表现为繁殖障碍，妊娠母猪流产、产死胎和木乃伊胎；对仔猪危害最严重，死亡率可高达100%；成年猪一般为隐形感染，无临床症状或症状轻微，一般产能下降[5]。PRV感染会引起机体免疫抑制，而且猪体可长期带毒和排毒，容易并发感染其他疾病。目前，我国主要以PRV gE基因缺失的疫苗用于预防PRV，这种疫苗的使用可以通过血清学方法区分免疫抗体和自然感染抗体[6]。配套使用 PRV gE抗体检测试剂盒和PRV gB抗体检测试剂盒能够快速、方便、准确检测PR野毒抗体和免疫抗体，从而评估猪群PR野毒感染和免疫状况。经调查全县猪伪狂犬病免疫抗体水平不高的原因如下：一是免疫成本高，免疫次数减少。种公猪和经产母猪应每年普免3次，每隔四个月一次；仔猪在出生时、35-45日龄、70-80日龄各免疫一次；后备母猪在配种前2、6周各免疫一次[7]。相较于猪瘟和猪繁殖与呼吸障碍综合征是政府强制免疫、疫苗政府免费提供给养殖户，细小和乙脑种公猪、母猪3、9月普免两次，头胎和二胎母猪跟胎2次而言，伪狂犬的免疫成本较高，从全县的免疫程序来看，仔猪只进行了2次免疫，有减少免疫次数的现象。二是免疫方法不当。不同的疫苗，使用的方法也不同。猪伪狂犬病疫苗有适合滴鼻的活疫苗和肌肉注射的灭活疫苗，在不同时期应选择合适的疫苗，同时在使用疫苗进行免疫时方法要得当。三是疫苗的质量。不同的疫苗，有不同的储存条件。这就要求养猪户在购买、运输、储存和使用疫苗时，要严格按照说明书上的要求去做。

经调查发现全县散养户猪群免疫效果差或未免疫的原因有以下几点：一是防疫意识不强。散养户采取自繁自养模式，养殖户主充当兽医员，防疫意识不强。二是免疫程序不科学。猪场未根据当地猪病流行现状和本场实际制定出合理的免疫程序，或是免疫程序不健全。三是疫苗接种操作规程不规范。猪群患病或是应激状态时进行免疫，同时疫苗保存、接种操作不规范。四是环境卫生差。散养户养殖场地简陋，同时生产中产生的垃圾、猪粪、猪尿未进行及时清理，影响猪群健康和免疫效果。

对平阳县生猪养殖场PRV gE血清学ELISA抗体检测结果表明，PRV gE的抗体阳性率为12.83%，提示全县生猪养殖场可能存在影响猪繁殖障碍的PRV的野毒感染。因此建议，生猪养殖场特别是规模种猪场应加强对PRV的综合防控，可以从完善生物安全措施、选择合适的疫苗、制定科学合理的免疫程序、做好引种检疫、进行定期的疫病监测、淘汰繁殖性能低下的种猪等多方面着手，以防止养殖场PRV的感染及爆发流行，进而避免或降低疫病带来的经济损失[8]。