木蝴蝶水提物对家兔离体肠平滑肌活动的影响

(1. 右江民族医学院机能实验教学中心，广西 百色 533000； 2.右江民族医学院药学院2014级本科1班，广西 百色 533000； 3. 右江民族医学院有机化学与药物化学教研室，广西 百色 533000)

木蝴蝶是紫葳科木蝴蝶属木蝴蝶[oroxylumindicum(L.)Vent]的成熟种子，种子极扁薄，呈椭圆形片状，外种皮除基部一边外，其余三边延长成膜翅状，形如蝶翅，边缘多破裂，长5.5～8 cm，横径约4 cm，白色有绢样光泽，并有放射状纹理，气微、味苦[1]。木蝴蝶又名海船、牛脚简等，其最早记载于《滇南本草》，距今已有几百年的药用历史。木蝴蝶分布于广西、广东、云南、贵州等地，作为一种中药，可用于喉咙痛、肺热咳嗽、肝胃胀痛等[2]。木蝴蝶对胃肠平滑肌自发性收缩的影响及作用机制研究未见报道，本次实验通过使用BL-420F生物信号采集与分析系统采集信号并处理实验结果的方法，观察低、高浓度木蝴蝶水提物对十二指肠平滑肌收缩活动的影响。旨在为该药的药效研究及临床应用提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 动物 健康家兔8只，体重1.5～2.0 kg，雌雄兼半，由右江民族医学院动物实验中心提供，动物许可证号：SYXK桂2017-0004。

1.2 实验仪器及器械 HW-400E型恒温平滑肌槽(成都泰盟科技有限公司)，BL-420F生物信号采集与分析系统(成都泰盟科技有限公司)，BS600L电子天平(上海友声衡器有限公司)，培养皿，移液器，玻璃器皿，手术刀、手术剪、手术镊、组织钳。

1.3 实验试剂 按《实验生理科学》[3]方法配制的台氏液；0.01%乙酰胆碱溶液(国药集团化学试剂有限公司)；0.05% 硫酸阿托品注射液(河南润弘制药有限公司)。

1.4 实验药材 木蝴蝶采自广西壮族自治区南宁市武鸣区，经右江民族医学院生药学教研室刘春荣老师鉴定为紫葳科木蝴蝶属木蝴蝶。

1.5 方法

1.5.1 木蝴蝶水提物制备 称取10 g木蝴蝶，加适量水浸润30 min，在电炉上煎煮微沸1 h ，滤出滤液，再次加水适量煎煮微沸30 min，滤出滤液，两次滤液合并蒸发浓缩，加水调制至10 ml，即得每毫升水提液含生药1.0 g木蝴蝶煎剂。

1.5.2 离体肠管标本的制备 取洁净家兔8只，实验前24 h禁食不禁水，用木槌敲击后枕部致其昏迷，快速使用手术解剖器械剖开腹腔，在胃幽门和十二指肠交界处为起点剪取一段约16 cm的十二指肠，放入装有(37±0.5)℃台氏液的器皿中，通入空气，用台氏液洗去肠内容物，除去肠系膜和脂肪，后剪取成约2 cm的小段[4]，每只家兔取8段肠管做样本进行实验，放置于台氏液中备用。

1.5.3 木蝴蝶水提物对家兔离体小肠平滑肌活动的影响 将BL-420F生物信号采集与分析系统与电脑连接好，打开系统，在一通道连接好张力换能器，调零，定标，调节好HW-400E型恒温平滑肌槽，加入台氏液，至液面到加药筒刻度线上沿，水温设定在38℃；取一节肠段，肠段一端连接在换能器上，另一端连接在L型通气钩上[5]，标本垂直悬挂于液面下，不触碰加药筒内壁，保持外周恒温液面与加药筒内的液面相平，调节通气量，保持出气泡的速度以不冲动肠段标本为合适[6]。调节收缩基线，以前负荷1 g，平衡10 min，等待曲线描记稳定好开始实验。

实验分成3组：正常对照组、木蝴蝶水提物低浓度(4 g/L)组和高浓度(8 g/L)组。在每只家兔取出的肠管中，随机取3段肠管，随机分入正常对照组、低浓度组和高浓度组中，其中，正常对照组给予等容积台氏液，受试药浓度为1 g/ml的木蝴蝶水提液，每次加入100 μl，给药浓度累积变大(即换算成50 ml麦氏浴槽中药物的终浓度分别为4 g/L、8 g/L)，记录小肠平滑肌收缩的平均张力和频率，在每次给完药后，用清洁的台氏液冲洗标本至少3次，等待标本恢复收缩后，再进行下一步的实验。

1.5.4 木蝴蝶水提物对乙酰胆碱诱导平滑肌收缩活动的影响 在正常台氏液环境下，实验分成3组，正常对照组、乙酰胆碱组、乙酰胆碱加木蝴蝶组。在每只家兔取出的肠管中，随机取3段肠管，随机分入正常对照组、乙酰胆碱组、乙酰胆碱加木蝴蝶组中，其中，正常对照组给予等容积台氏液，待小肠平滑肌自主活动稳定后，先加入工具药0.01%乙酰胆碱[5]( 即换算成 50 ml麦氏浴槽中药物的终浓度为2 g/L) 记录1 min，然后再逐步加入1 g/ml的木蝴蝶水提物，每次100 μl，当达到高(8 g/L)浓度的木蝴蝶水提物药液时，分别记录2 min。

1.5.5 木蝴蝶水提物对阿托品诱导平滑肌舒张活动的影响 在正常台氏液环境下，实验分成3组，正常对照组(与1.5.4共用对照组)、阿托品组、阿托品加木蝴蝶组。在每只家兔取出的肠管中，随机取2段肠管，随机分入阿托品组，阿托品加木蝴蝶组中，等待小肠平滑肌自主活动稳定后，加入工具药0.05%硫酸阿托品[5]50 μl(即换算成50 ml麦氏浴槽中药物的终浓度为1 g/L)。记录1 min，然后再逐步加入1 g/ml的木蝴蝶水提物，每次100 μl，当达到高浓度(8 g/L)的木蝴蝶水提物药液时，分别记录2 min。

1.5.6 实验数据测量 测量1 min内的活动曲线平均张力(g)，测量1 min内的活动曲线波形个数为收缩频率(次/分)。给药前和给药后1 min分别测量平均张力和收缩频率[6]。

2 结果

2.1 木蝴蝶水提物对家兔离体小肠平滑肌活动的影响 组内比较，正常对照组给药前后平均张力变化无差异(P>0.05)；木蝴蝶低、高浓度组给药前后比较，平均张力均下降，差异有统计学意义(P<0.01)；收缩频率组内比较无显著变化(P>0.05)；组间比较，给药前平均张力组间两两比较，无明显变化(P>0.05)；给药后木蝴蝶低、高浓度组平均张力较正常对照组明显降低，差异均有统计学意义(P均<0.01)；低、高浓度组互相比较，差异无统计学意义(P>0.05)；给药前后的小肠平滑肌活动频率组间两两比较，差异无统计学意义(P>0.05)；实验结果显示，木蝴蝶水提物在本实验剂量下，对离体小肠平滑肌的活动有抑制作用，使其平均张力下降，对频率无影响，且无量效关系，见表1。

表1 木蝴蝶水提物对离体小肠平滑肌自主活动的影响

注：与给药前比较，a：P<0.01；与给药后的正常对照组比较，b：P<0.01

2.2 木蝴蝶水提物对乙酰胆碱诱导平滑肌收缩活动的影响 组内比较，正常对照组给药前后平均张力变化无差异(P>0.05)；乙酰胆碱组给药前后比较，平均张力上升，差异有统计学意义(P<0.01)；乙酰胆碱+木蝴蝶高浓度组给药前后比较，平均张力下降，差异有统计学意义(P<0.01)；各组给药前后频率变化不明显(P>0.05)；组间比较，给药前的平均张力比较，三个组两两比较，差异无统计学意义(P>0.05)；给药后平均张力比较，与正常对照组比较，乙酰胆碱组给药后平滑肌平均张力上升，差异有统计学意义(P<0.01)；与乙酰胆碱组比较，乙酰胆碱+木蝴蝶水提物高浓度组给药后离体小肠平滑肌平均张力下降，差异有统计学意义(P<0.01)；各组间离体小肠平滑肌活动频率差异无统计学意义(P>0.05)；实验结果显示，本实验剂量下的木蝴蝶水提物对乙酰胆碱诱导的平滑肌收缩活动有拮抗作用，但对频率无影响，见表2。

2.3 木蝴蝶水提物对阿托品诱导平滑肌舒张活动的影响 组内比较，正常对照组给药前后平均张力和频率变化无差异(P>0.05)；阿托品组给药前后比较，平均张力下降，频率减少，差异有统计学意义(P<0.01)；阿托品+木蝴蝶高浓度组给药前后比较，平均张力下降，频率减少，差异有统计学意义(P<0.05)；组间比较，给药前平均张力三个组两两比较差异不明显(P>0.05)；给药后平均张力比较，与正常对照组比较，阿托品组给药后平滑肌平均张力下降，差异有统计学意义(P<0.01)；与阿托品组比较，阿托品+木蝴蝶水提物高浓度组平滑肌平均张力下降，差异有统计学意义(P<0.01)，给药前后频率组间差异无统计学意义(P>0.05)；实验结果显示，本实验剂量下的木蝴蝶水提物对阿托品诱导的平滑肌舒张活动有协同作用，促使平滑肌平均张力进一步下降，见表3。

表2 木蝴蝶水提物对乙酰胆碱诱导平滑肌收缩活动的影响

注：与给药前比较，a：P<0.01；与正常对照组比较，b：P<0.01；与乙酰胆碱组比较，c：P<0.01

表3 木蝴蝶水提物对阿托品诱导平滑肌舒张活动的影响

注：与给药前比较，a：P<0.05，b：P<0.01；与正常对照组比较，c：P<0.01；与阿托品组比较，d：P<0.01

3 讨论

木蝴蝶是紫葳科木蝴蝶属木蝴蝶植物，其性凉，味甘、苦。常用于肝胃胀痛、肺热咳嗽等病症。有文献[2，7]报道，木蝴蝶的化学成分较为复杂，以苷类化合物、黄酮多见，也有一些如有机酸类化合物、对羟基苯乙醇等化合物，其多数药理作用得以在临床应用。本实验结果显示，本实验浓度的木蝴蝶水提物对平滑肌自主收缩活动有抑制作用，能够拮抗乙酰胆碱诱导的平滑肌收缩作用，同时对于阿托品诱导的平滑肌舒张活动有协同作用，这一实验结果在一定程度上与民间药用效果是一致的。

小肠的常见运动形式有紧张性收缩、蠕动和分节运动，其节律性收缩活动易受神经递质和激素等因素的影响，小肠离体后，虽然失去了外来神经支配，但其壁内神经丛还存在，如果将小肠放置于适宜的环境条件下，小肠依然可以自主收缩活动。我们通过小肠平滑肌收缩和舒张活动情况以及频率变化来判断小肠兴奋性[8]。

本实验中，在乙酰胆碱的作用下，离体小肠平滑肌出现了胆碱能激动的效果，表现为平滑肌收缩加强，平均张力上升；在阿托品作用下，出现了胆碱能阻断效果，表现为收缩减弱，平均张力下降，这些结果显示实验用的离体小肠对药物反应正常[9]。实验中设定乙酰胆碱和阿托品为模型对照组，旨在探明木蝴蝶水提物的作用位点。多数研究认为，平滑肌上有M受体，α、β受体，组胺受体等，以及一些离子通道，如钙离子通道等[10-11]。乙酰胆碱激动M受体后，可促使细胞中的第二信使三磷酸肌醇和二酰甘油浓度增加，导致细胞内钙离子的释放，引发收缩反应。使得平滑肌张力上升。乙酰胆碱引起的小肠平滑肌收缩，跟细胞中的钙离子浓度增多有关[11-12]。所以，推测木蝴蝶水提物抑制小肠平滑肌收缩活动也有可能与降低细胞中钙离子浓度有关。

阿托品是胆碱能M受体的阻断剂，可与M受体结合并占领其位点而导致竞争性拮抗乙酰胆碱的激动作用[13-14]。本实验结果显示，先加入阿托品，阻断小肠平滑肌M受体使其舒张，平均张力下降，再加入木蝴蝶水提物，其平均张力进一步下降，实验结果提示，木蝴蝶水提物有可能是通过阻断M受体而导致小肠平滑肌收缩活动受到抑制。

综上所述，本实验研究结果显示，木蝴蝶水提物可抑制离体小肠平滑肌的自主收缩活动，降低平均张力，可能与降低平滑肌细胞中钙离子浓度，以及阻断M受体有关。是否还有其它作用机制，有待于进一步研究。本实验也为木蝴蝶用于治疗胃肠痉挛性疾病提供实验依据。