美丽芍药中酚酸类成分的研究

梁文娟 郗建宇 尹 迪 孙春吉 王洪玲

（1.云南农业大学食品科学技术学院， 云南 昆明650201； 2.江西中医药大学中药资源与民族药研究中心， 江西 南昌330004）

芍药科世界上仅一属［1-2］，芍药属植物大多可供药用，其中的常用药材白芍、赤芍和牡丹皮等收录于历代本草和历版《中国药典》；对芍药属植物的化学成分研究主要集中在芍药苷及其同系物等单萜苷类物质，对其药理活性的研究主要围绕中枢神经和心血管系统保护、抗炎保肝、抗肿瘤和止痛等作用［3-5］。为丰富对芍药属植物化学成分和药用资源的认识，本研究对采自云南巧家的美丽芍药的根进行化学成分研究。美丽芍药Paeonia maireiLevl.为芍药科芍药属多年生草本植物，分布于云南东北部、贵州西部、四川中南部、甘肃和陕西南部，模式标本采自云南巧家；美丽芍药的根可药用，具有行瘀活血、止痛之效［6］，在云南当地有一定的用药基础。目前关于美丽芍药的化学成分和药理活性研究较少［7-8］。迄今为止，已知成分主要包括生物碱、萜、甾体、蒽醌类的19个化合物［7-8］。本实验对美丽芍药干燥根的70%乙醇部位进行化学成分研究，共分离鉴定出9个酚酸类化合物，其中化合物1～8 为首次从该植物中分离得到。

1 材料

岛津LC-MS-IT-TOF 质谱仪（日本岛津公司）；Waters AutoSpec Premier P776 离子井飞行时间质谱仪、高效液相色谱（美国Waters 公司）；核磁共振仪Brucker DRX-500（德国布鲁克公司）；薄层色谱硅胶、柱层析硅胶（200～300目，烟台江友硅胶开发有限公司）；柱层析葡聚糖凝胶LH-20（美国Pharmacia 公司）；Milli-QAdvantageA10 超纯水系统（美国Millipore 公司）。分析纯甲醇、乙醇、二氯甲烷、丙酮（天津化学试剂有限公司）；显色剂为自制H2SO4（10%） 乙醇溶液。

样品于2016 年9 月采自云南巧家，由中国科学院昆明植物研究所张书东副研究员鉴定为美丽芍药Paeonia maireiLevl.，标本存放于云南农业大学食品学院（20160926）。

2 提取与分离

美丽芍药干燥根3.5 kg，经粉碎后用70% 乙醇，回流提取3 次，每次1 h，提取液经减压浓缩至小体积，将浓缩液过D101 大孔树脂，分别用水、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇洗脱得水部位（Fr.1：210 g）、30%乙醇部位（Fr.2：72 g）、50%乙醇部位（Fr.3：32 g）、70%乙醇部位（Fr.4：23 g）。Fr.4 经硅胶柱色谱，以二氯甲烷-丙酮梯度洗脱，得 5个部分 Fr.4-1～ Fr.4-5。Fr.4-2 经Sephadex LH-20（甲醇） 洗脱，再经反复硅胶柱层析和HPLC 等方法分离纯化得化合物1（5 mg）、2（4 mg）、3（6 mg）、9（5 mg）。Fr.4-3 经反复硅胶柱色谱和Sephadex LH-20 凝胶柱层析，得化合物5（4 mg）、7（4 mg）、8（5 mg）。Fr.4-5 通过硅胶柱层析，经甲醇-二氯甲烷体系梯度洗脱（10∶90、20∶ 80、30∶ 70、50∶ 50、100∶ 0），再 经Sephadex LH-20 多次纯化，得化合物4（6 mg）、6（5 mg）。

3 结构鉴定

化合物1：白色无定型粉末，C9H8O3，ESI-MSm／z：165.2［M＋H］＋。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：7.59（1H，d，J＝15.9 Hz，H-2），7.44（2H，dd，J＝8.6，1.9 Hz，H-5，9），6.80（2H，dd，J＝8.6，1.9 Hz，H-6，8），6.27（1H，d，J＝15.9 Hz，H-3）；13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：171.0（s，C-1），115.6（d，C-2），146.6（d，C-3），127.2（s，C-4），131.1（d，C-5，9），116.8（d，C-6，8），161.2（s，C-7）。以上数据与文献［9］基本一致，故鉴定为反式对羟基肉桂酸。

化合物2：白色无定型粉末，C9H8O2，ESI-MSm／z：149.1［M ＋H］＋。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：7.67（1H，d，J＝16.0 Hz，H-3），7.59（2H，m，H-5，9），7.39（3H，m，H-6，7，8），6.47（1H，d，J＝ 16.0 Hz，H-2）；13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：171.0（s，C-1），119.4（d，C-2），146.3（d，C-3），135.8（s，C-4），130.0（d，C-5，9），129.2（d，C-6，8），131.4（d，C-7）。以上数据与文献［10］基本一致，故鉴定为反式肉桂酸。

化合物3：白色无定型粉末，C10H10O4，ESI-MSm／z：195.2［M ＋H］＋。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：7.59（1H，d，J＝15.9 Hz，H-3），7.17（1H，d，J＝2.0 Hz，H-5），7.05（1H，dd，J＝8.2，2.0 Hz，H-9），6.80（1H，d，J＝8.2 Hz，H-8），6.30（1H，d，J＝15.9 Hz，H-2），3.88（3H，s，-OCH3）；13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：171.0（s，C-1），115.9（d，C-2），146.9（d，C-3），127.8（s，C-4），111.7（d，C-5），150.5（s，C-6），149.4（s，C-7），116.4（d，C-8），124.0（d，C-9），56.4（s，-OCH3）。以上数据与文献［11］基本一致，故鉴定为阿魏酸。

化合物4：白色无定型粉末，C9H8O4，ESI-MSm／z：203.1［M ＋Na］＋。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：7.52（1H，d，J＝15.9 Hz，H-3），7.02（1H，d，J＝2.1 Hz，H-5），6.92（1H，dd，J＝8.2，2.1 Hz，H-9），6.76（1H，d，J＝8.2 Hz，H-8），6.21（1H，d，J＝15.9 Hz，H-2）；13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：171.0（s，C-1），115.5（d，C-2），147.0（d，C-3），127.8（s，C-4），115.1（d，C-5），149.5（s，C-6），146.8（s，C-7），116.5（d，C-8），122.8（d，C-9）。以上数据与文献［12］基本一致，故鉴定为咖啡酸。

化合物5：白色无定型粉末，C7H6O4，ESI-MSm／z：177.1［M ＋ Na］＋。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：7.42（2H，overlapped，H-3，H-7），6.78（1H，d，J＝8.0 Hz，H-6）；13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：170.2（s，C-1），123.1（s，C-2），117.7（d，C-3），146.1（s，C-4），151.5（s，C-5），115.7（d，C-6），123.9（d，C-7）。以上数据与文献［11］基本一致，故鉴定为原儿茶酸。

化合物6：白色无定型粉末，C8H8O3，ESI-MSm／z：153.2［M ＋ H］＋。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：9.74（1H，s，H-1），7.42（2H，overlapped，H-3，H-7），6.93（1H，d，J＝7.9 Hz，H-6），3.91（3H，s，-OCH3）；13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：192.9（d，C-1），130.7（s，C-2），111.3（d，C-3），149.7（s，C-4），154.7（s，C-5），116.3（d，C-6），127.9（d，C-7），56.3（s，-OCH3）。以上数据与文献［13］基本一致，故鉴定为香草醛。

化合物7：黄色无定型粉末，C15H14O6，ESI-MSm／z：413.2［M ＋Na］＋。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：6.85（1H，d，J＝2.0 Hz，H-2′），6.76（2H，overlapped，H-5′，6′），5.97（1H，d，J＝2.3 Hz，H-8），5.87（1H，d，J＝2.3 Hz，H-6），4.58（1H，d，J＝7.6 Hz，H-2），4.00（1H，m，H-3），2.85（1H，m，H-4a），2.53（1H，m，H-4b）；13C-NMR CD3OD，125 MHz）δ：82.7（d，C-2），68.8（d，C-3），28.5（t，C-4），157.6（s，C-5），96.3（d，C-6），157.9（s，C-7），95.5（d，C-8），156.9（s，C-9），100.8（s，C-10），132.2（s，C-1′），115.2（d，C-2′），146.2（s，C-3′），146.3（s，C-4′），116.1（d，C-5′），120.0（d，C-6′）。以上数据与文献［14］基本一致，故鉴定为儿茶素。

化合物8：黄色无定型粉末，C15H14O6，ESI-MSm／z：389.1［M-H］-。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：6.96（1H，d，J＝2.0 Hz，H-2′），6.79（2H，overlapped，H-5′，6′），5.93（1H，d，J＝2.3 Hz，H-8），5.90（1H，d，J＝2.3 Hz，H-6），4.81（1H，s，H-2），4.16（1H，m，H-3），2.86（1H，m，H-4a），2.73（1H，m，H-4b）；13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：79.9（d，C-2），67.5（d，C-3），29.3（t，C-4），157.7（s，C-5），96.4（d，C-6），158.0（s，C-7），95.9（d，C-8），157.4（s，C-9），100.0（s，C-10），132.3（s，C-1′），115.3（d，C-2′），145.8（s，C-3′），145.9（s，C-4′），115.9（d，C-5′），119.4（d，C-6′）。以上 数据与文献［14］基本一致，故鉴定为表儿茶素。

化合物9：白色无定型粉末，C7H6O5，ESI-MSm／z：193.2［M ＋Na］＋。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：7.05（2H，s，H-3，H-7）；13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：170.4（s，C-1），121.9（s，C-2），110.3（d，C-3，7），146.4（d，C-4，6），139.6（d，C-5）。以上数据与文献［7］基本一致，故鉴定为没食子酸。

4 讨论

本研究从美丽芍药根70%乙醇部分离鉴定出9个化合物，主要涉及小分子酚酸类成分，其中化合物1～8 为首次从该植物中分离得到。以上酚酸类成分都有不同程度活性研究报道，其中Zeni 等［15］发现阿魏酸具有抗抑郁作用，其逆转CUMS 诱导的抑郁行为可能与影响5-羟色胺能神经系统有关。尹雪等［16］发现原儿茶酸对1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶诱导的帕金森病模型小鼠有保护作用，通过提高帕金森病模型小鼠中脑和纹状体内多巴胺D2 受体和酪氨酸羟化酶表达，降低诱导型一氧化氮合酶的表达发挥作用。肉桂酸作为桂枝茯苓丸的主要起效物质，具有活血化瘀、消炎止痛、镇静等作用［17］。前期药理学研究指出咖啡酸具有抗氧化、抗炎、镇痛、免疫调节等药理作用，提示其在防治氧化应激和炎症反应中可能的应用前景［18］。基于此，为了丰富对美丽芍药植物资源的认识，有必要对分离得到的单体化合物进行更深入的活性筛选，为该植物药用资源的开发利用提供数据支撑。