冰醋酸在胸腔液基细胞学制片中的应用研究

汪贻苑 王 琦 李 增 李传应

近年来，肺癌已经成为发展中国家和发达国家恶性肿瘤相关死亡的主要原因之一，是一个重大的公共卫生问题[1]。胸腔液基涂片作为肺癌筛查的常用方法，其制片质量与HE染色结果密切相关，进而影响检测结果的判断。若标本含有大量血液、淋巴液、脱落细胞或细菌，这些细胞或杂质贴附在制片区，影响病理细胞的判读[2]。因此，高质量的细胞学制片对临床病理诊断显得尤为重要。本实验将围绕这一问题，探讨冰醋酸作为辅助裂解液在胸腔液基细胞学制片中的应用价值，以期优化液基细胞学制片方法和质量。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器 冰醋酸（AR 国药集团化学试剂有限公司）、无水乙醇（AR 无锡市展望化工试剂有限公司）、HE染液（珠海贝索生物技术有限公司）、生理盐水（石家庄四药有限公司）、液基薄层细胞制片机（南京健邦锦源医疗仪器有限公司，JY-8000B）。

1.2 方法

1.2.1 试剂配制 取50 mL冰醋酸与50 mL生理盐水混匀配成体积分数为50%冰醋酸；另取两支洁净无菌试管分别加入50 mL生理盐水，采用倍比稀释的方法依次配成25%冰醋酸和12.5%冰醋酸溶液，备用。

1.2.2 涂片制备 ①所有标本来源为本医院2019年-2020年疑似肺癌患者行将胸腔液基细胞学检查的标本，选取其中90例，分为正常组、血性液组和浑浊液组，各组30例。②取正常组、血性液组和浑浊液组标本离心处理，弃上清液，取沉渣于细胞保存液，混匀后分别置于制片机上制片，作为对照组。③如上相同的方法处理血性液组和浑浊液组标本，分别取沉渣于细胞保存液，混匀后分别加入50%冰醋酸、25%冰醋酸、12.5%冰醋酸，混匀后置于自动制片机上制片。④所有标本制片后行HE染色，光学显微镜观察染色情况。

2 结 果

2.1 肉眼观察结果 ①液基细胞学检查正常胸腔液呈黄色或浅黄色、澄清透明状液体，或有少量细胞均匀分布；浑浊液组胸腔液为深黄色，悬浮有大量细小颗粒状物；血性液组胸腔液呈红棕色、灰褐色或暗红色，内含大量血细胞，不透明。②将各组标本制成直径约13 mm的圆形细胞薄层片，后行HE染色，结果显示，正常组呈一薄层细胞均匀分布，表面平整，边缘整齐，染色均匀；血性液组和浑浊液组未经冰醋酸处理的涂片厚薄不一，染色不均匀，表面不平整；经冰醋酸处理组涂片外观似正常组涂片，且随着冰醋酸浓度变化，着色深浅不同。

2.2 镜下观察结果 ①正常组涂片背景干净，少量细胞，无明显杂质，分布均匀，着色对比清晰（图1-P）。②浑浊液组和血性液组，未经冰醋酸处理的涂片染色不均匀，有较多细胞碎片或细胞堆积，可见大片的红染区，着色对比不明显（图1-A，图1-E）；经50%冰醋酸处理的涂片背景杂乱，细胞破坏较多，血性液组可见较多红染区，着色对比不清晰（图1-B，图1-F）；经25%冰醋酸处理的涂片与正常组涂片相似，背景较为干净，细胞分布均匀，红染区大幅减少，着色对比清晰（图1-C，图1-G）；经12.5%冰醋酸处理的涂片染色不均匀，有较多细胞碎片和细胞堆积，着色对比不清晰（图1-D，图1-H）。

注：P：正常胸腔液所制涂片HE染色结果；A浑浊胸腔液未经冰醋酸处理所制涂片HE染色结果；B：浑浊胸腔液经50%冰醋酸处理所制涂片HE染色结果；C：浑浊胸腔液经25%冰醋酸处理所制涂片HE染色结果；D：浑浊胸腔液经12.5%冰醋酸处理所制涂片HE染色结果；E：血性胸腔液未经冰醋酸处理所制涂片HE染色结果；F：血性胸腔液经50%冰醋酸处理所制涂片HE染色结果；G：血性胸腔液经25%冰醋酸处理所制涂片HE染色结果；H：血性胸腔液经12.5%冰醋酸处理所制涂片HE染色结果

3 讨 论

液基细胞薄层涂片检测（TCT）是利用重力沉淀或滤膜原理，制作标准化优良细胞学病理薄片的技术[3]。与传统细胞直接涂片相比，其优势在于：一方面避免直接涂片造成细胞干燥，影响染色[4]。另一方面，自动化程序制作的薄片均匀，乙醇作为固定液使得细胞核结构清晰，细胞分布均匀易于染色和观察[5～6]。

肺癌是引起胸腔积水的主要病因之一，因此鉴别胸腔液的性质是排查肺部癌性病变的重要手段。然而，不同疾病引起胸腔液的颜色、透明度、蛋白和细胞的含量及分类有所不同。因此，胸腔液基细胞学检查是肺部肿瘤筛查、诊断和治疗必不可少的手段。若胸水中含有大量血液、淋巴液、脱落细胞或细菌等，在行液基细胞学检查时就会严重影响观察、制片和染色。一方面红细胞碎片、部分大分子蛋白、细菌颗粒会贴附在制片区或炎症细胞、上皮细胞过度重叠，甚至覆盖病理细胞造成背景杂乱，导致无法观察而影响诊断；另一方面被染液染色的血细胞或细菌颗粒等粘附于玻片上，造成染色背景复杂，着色对比不清晰，影响病理细胞的判读[2]，因此正确处理血细胞或其他杂质蛋白是液基细胞学制片成功的关键。研究表明，冰醋酸能够改变血红细胞膜[7～8]和细菌细胞壁的通透性，促进大分子蛋白质的变性。目前临床上普遍采用高浓度的冰醋酸来处理上述标本，方法是直接向标本中加入一定比例的冰醋酸，裂解红细胞后离心去除红细胞碎片，但是大量的高浓度冰醋酸会将一部分正常细胞以及病变细胞也一同裂解，因此在去除红细胞同时可能会因为病变细胞也被裂解而造成漏检。所以需要通过合适方法来排除过多血液或大分子蛋白等杂质的干扰。

本实验中我们用不同浓度的冰醋酸处理标本，以探究其在胸腔液基细胞学制片中的应用价值，取得了良好的效果。本实验结果与相关文献结果一致[9]，即冰醋酸体积分数为25%左右为最适浓度，冰醋酸的浓度过高或过低裂解效果均不明显，这可能是由于高浓度的冰醋酸不仅能裂解红细胞，也会影响上皮细胞等有核细胞的通透性，使部分正常的细胞也遭到裂解，从而影响制片的质量。因此，在胸腔液基细胞学制片中用适当浓度的冰醋酸作为裂解液，有助于提高涂片染色效果和制片的质量，从而提高异常细胞的检出率，具有较好的临床应用价值。