云南春燥证动物模型的评价指标选择

魏宁颐，杜玲玉珊，杨 梅

(云南中医学院，昆明 650500)

云南春燥证动物模型的研制已经开展一段时间，课题组成员在采用人工气候箱的办法下，结合致病外因-气候、内因-饮食模拟云南春燥气候环境并给予香燥食物制作小鼠模型，采用“以方测证”对比临床常见症状的变化，确认复制模型小鼠符合云南春燥证的临床特征[1]。现课题组在已研制的模型小鼠上选取与云南春燥证候相关的生化指标进行测量，从而揭示云南春燥证生理变化的实质，进一步完善对云南春燥小鼠模型评价指标的选择。

1 气道内分泌型免疫球蛋白A(sIgA)

近年来，在外燥证动物实验研究中，有学者发现[2-3]动物模型气道内分泌型免疫球蛋白A(sIg A)等免疫分子及活性物质的变化同外燥证动物模型有密切的相关性，在一定程度上可以反映出外燥证动物模型肺气卫外功能变化的规律。免疫球蛋白A(sIgA)主要存在于上呼吸黏膜，是上呼吸道防御病原微生物侵害极为重要的免疫球蛋白，在气道内对抗外来邪气起着重要的作用，反映出了呼吸道的免疫防御情况。机体sIgA的水平可以提高呼吸道黏膜局部抗感染能力[4]， sIgA含量升高，则提示邪气盛而正不虚，机体鼓动正气卫外抗邪；sIg A含量降低，则提示正虚邪凑，燥邪伤肺，会损伤肺气卫外的功能[5]。选用该指标可以直接反映出云南春燥证小鼠的呼吸道免疫防御情况。除了各类燥证模型研究选择该指标作为特异性指标外，国内诸多对肺脏疾病的研究也将该指标作为观察指标之一。

2 气道内分泌型免疫球蛋白G(IgG)

IgG对病原微生物具有一定的吞噬作用，是气道内广谱、高效的抗体球蛋白，在疾病早期发挥防御功能。免疫球蛋白G水平增高可能与某些外来抗原或自身抗原有关，这些抗原刺激了淋巴系统，引起免疫球蛋白G合成。有研究发现，痰热壅肺证、痰湿阻肺证、痰蒙神窍证等IgG均值逐渐偏低[6]。在临床研究时期，总结出云南春燥证的主要证型有：肺卫皮孔燥证、风燥犯肺证、肝热肺燥证、脾湿胃燥证这四证。由此可见，痰、湿等病因是构成云南春燥证的主要因素，从一定层面影响了机体。故课题组借鉴其他研究办法，选取免疫球蛋白G作为云南春燥证的观察指标之一。

3 肺表面活性物质相关蛋白 A(SP-A) 、D(SP-D)

现代研究发现，相关蛋白 A(SP-A)、相关蛋白 D(SP-D)是肺表面活性物质的中重要成分，其主要分布于肺泡上皮内侧，由肺泡Ⅱ型上皮细胞和呼吸性细支气管上皮Clara细胞合成及分泌，具有降低肺泡表面张力、维持肺泡稳定性等作用，是肺部重要的天然免疫防御分子。两者可以通过调理吞噬、结合过敏原与多种免疫分子互相作用来调节急慢性炎症反应[7-8]。由此把SP-A、SP-D对机体的功能看作是中医中正气的一种表达。正气强则机体虽然感受春燥之邪气，但是临床表现会不同。SP-A的剂量用于调节炎细胞因子的合成与释放，从而抑制炎症反应，但其是增强还是减弱炎性反应则主要取决于病原菌、反应细胞及细胞因子微环境。SP-D能抑制淋巴细胞的增殖，而且与肺泡巨噬细胞有高亲和力，能增加它的活性，从而达到抑制过敏反应和杀灭微生物的作用[9]。课题组试图用表面活性蛋白指标参数来解释云南春燥证在发生过程中机体正气抗邪的变化。如果取得相关规律性数据，将选择其为云南春燥证特异性指标。

4 气道黏液中黏蛋白Muc5ac

研究表明，小鼠气道黏液层中凝胶层和溶胶层的变化可以在一定程度上反映出吸入空气对气道津液代谢的影响规律。至今已发现19气道黏蛋白，但只有Muc5ac和Muc56的基因产物构成了正常人体气道分泌物中的黏蛋白[10]。在受到外界因素刺激时，小鼠气道表皮细胞 Muc5acmRNA表达丰富且定位于致敏源诱导的杯状细胞[11]，故考虑采用Muc5ac的测定来检测模型组小鼠中气道发生的微观改变，进一步解释云南春燥证机体病理的改变。

5 细胞膜选择性水通道蛋白(AQPs)

水是气道黏液的另一重要成分，其运转通过细胞膜选择性水通道蛋白(AQPs)来进行。研究显示，AQP5基因剔除的小鼠，其气道黏膜上下腺分泌液体的功能明显减低，而且肺部感染病毒的小鼠在第7天、第14天均出现AQP5mRNA及蛋白表达下降。由此可见，气道Muc5acmRNA及其蛋白的表达可反映出气道黏液黏度的变化。而气道AQP5 mRNA机器蛋白的表达可以提示气道水分的变化，故本课题预观察云南春燥证小鼠肺脏津液代谢的规律。

6 结语

结合云南春燥证的定义及在临床研究中的主要证型肺卫皮孔燥证、风燥犯肺证、肝热肺燥证、脾湿胃燥证四证，可见鼻腔干燥、干咳的临床表现[12]。拟对云南春燥证动物模型在呼吸系统选择以上5种呼吸道相关指标进行检测，意在从另一个角度解释云南春燥证小鼠机体免疫活性物、免疫功能、津液分布规律等病理改变情况。获得相关数据后，对小鼠该指标与对应的中医学症状科学进行对比分析，解释云南春燥证模型小鼠机体产生变化和中医邪气入侵、正气抗邪等理论的关系，为云南春燥证模型特异性指标的筛选奠定基础。