HFABP在急性缺血心肌中的表达及在法医病理诊断中的意义

2020-02-28 03:51田桂花郭凤英
宁夏医学杂志 2020年1期
关键词:光密度肉眼胞质

王 娟,田桂花,颜 贝,常 越,郭凤英,景 丽

心型脂肪酸结合蛋白(HFABP)是心脏中富含的一种新型小胞质可溶性蛋白质,在哺乳动物的小肠、肝、脂肪、心、脑、骨骼肌等多种细胞中广泛存在,具有高度心脏特异性,它在长链脂肪酸进入线粒体进行β氧化过程中起着重要作用。心肌细胞对缺血缺氧高度敏感,当心肌缺血缺氧时可以动员脂肪酸供能, 这会引起心肌细胞中HFABP的迅速升高,由于HFABP是心肌胞质中一种可溶性且分子量很小的蛋白质,当心肌受损时,HFABP可较早从心肌细胞胞质渗出到血液中[1-2],而存留在心肌细胞中的HFABP的含量即会出现变化。本实验选取尸体解剖中的心脏标本,通过肉眼观察、HE染色、免疫组化染色观察正常组、冠脉狭窄组及心肌梗死组中心肌形态及HFABP表达量的差异,从而探讨检测HFABP在法医病理诊断中的意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料:选取2007-2016年宁夏医科大学病理系尸检心肌组织标本30例为研究对象,按如下标准分为3组。对照组:①该例尸检者生前没有心脏病史;②在系统解剖过程中未发现心脏存在器质性病变;③可以导致心肌直接或间接受损的其他系统性疾病未检出;④HE染色未发现心肌形态学改变。冠脉狭窄组:①尸检中发现冠状动脉左前降支Ⅲ~Ⅳ级狭窄;②系统解剖、组织病理学观察、毒物分析中未发现其他死因;③肉眼观察、HE染色均未发现心肌梗死的改变。心肌梗死组:①尸检中发现冠状动脉左前降支Ⅲ~Ⅳ级狭窄;②肉眼观察或HE染色可见致死性急性和(或)陈旧性心肌梗死;③排除其他死因。

1.2 试剂:①HE染色试剂。苏木素-伊红(HE)染色液(Beijing Leagenem生物科技公司)。②免疫组化染色试剂:H-FABP单克隆抗体(Abcam公司);羊抗兔二抗(中杉金桥公司)。

1.3 方法:HE及免疫组化染色,所取标本经10%中性福尔马林固定,石蜡包埋切片,HE 染色,采用免疫组化SP法。细胞质中出现棕黄色颗粒视HFABP表达阳性,以PBS代替一抗作为阴性对照。应用IPP 图像自动分析系统,选取组织阳性表达区,选定具有代表性的5个视野,获得所选视野的平均光密度(optical density,OD)值。比较各组HFABP的表达情况。

2 结果

2.1 肉眼及HE染色观察冠状动脉左前降支:结果见图1(目录后)。对照组:肉眼可见管腔完整通畅,未见狭窄。镜下,①冠脉:内膜完整,无受损,内皮细胞排列整齐,未见脂质沉积;中膜层平滑肌细胞整齐排列,外层正常。②心肌组织:心肌细胞排列紧密,胞质染色淡红,均染,胞核未见固缩、凝集、碎裂。冠脉狭窄组:肉眼可见管腔明显狭窄,狭窄程度达Ⅲ~Ⅳ级。镜下,①冠脉:内膜受损,内皮下层及内弹性膜有大量脂质沉积,形成较为明显的粥样斑块;中膜层平滑肌细胞受压,细胞层数减少;外层有较多的脂肪组织,HE染色呈空泡状。②心肌组织:心肌细胞胞质染色淡红,胞核部分固缩、凝集、碎裂,组织间隙未见炎细胞浸润,与对照组心肌细胞无明显区分。心肌梗死组:肉眼可见管腔明显狭窄,狭窄程度达Ⅲ~Ⅳ级。镜下,①冠脉:内膜严重受损,内皮下层及内弹性膜有大量脂质沉积,形成明显的粥样斑块,并且粥样斑块内部有机化和出血,管腔明显狭窄(>75%);中膜层平滑肌细胞受压,平滑肌细胞层数减少;外膜层无明显改变。②心肌组织:心肌细胞排列紊乱,部分心肌有断裂,细胞核固缩、凝集、深染,并有核碎裂、核溶解,间质出血,可见大量中性粒细胞浸润。

2.2 HFABP在各组心肌组织中的表达:心肌梗死组HFABP的表达量(平均光密度值0.14±0.01)明显低于冠脉狭窄组(平均光密度值0.19±0.005)及对照组(平均光密度值0.26±0.01),冠脉狭窄组HFABP的表达量明显低于对照组。

3 讨论

HFABP 是一种在心肌细胞胞浆中含量丰富的小分子量蛋白质,由132个氨基酸组成,分子量为15 kDa,其基因位于1号染色体,特定位置为1p33p32。HFABP通过与长链多不饱和脂肪酸结合将其运输到胞浆中的过氧化物酶体、线粒体、内质网和细胞核等部位,在这些部位实现长链脂肪酸自身储存、氧化、合成生物膜、信号转导和激活核内受体等功能,参与生命活动的重要环节[3]。前期有研究者制作动物急性心肌梗死模型,并通过检测HFABP来检测心肌梗死的情况。研究发现,心肌缺血一定时间后可引起心肌细胞膜的损伤,位于胞浆里的HFABP由于分子量小且水溶性好,可以迅速进入血液循环中[4]。以往在临床上急性心肌梗死(AMI)的诊断主要通过病史、临床症状体征、心电图检查结果等[1,5]。有些患者病史模糊,临床症状体征不明显,心电图难以捕捉到心肌缺血的时刻,这些都使得以往的这三种指标存在一定的局限性,对超极期AMI的诊断尚有困难。前期研究发现仅在心肌损伤30 min后,HFABP就可在血液中被检出,AMI发生2 h,HFABP阳性的患者比例高达43.5%[6]。临床研究表明HFABP可以作为早期诊断AMI的理想标志物[7]。

目前在尸检中我们往往遇到这样的问题,冠状动脉狭窄程度已达75%以上,但在心肌组织中没有发现心肌梗死的任何表现,对于冠脉的狭窄是否引起了一定程度的心肌缺血无从考证。在活体中可以通过测量血液中HFABP含量反映AMI情况,在尸检中由于患者死亡时间已较长且可以获得心肌标本,那是否可以采用测定心肌组织中HFABP含量来反映心肌缺血的情况呢?带着这个问题我们进行了此次研究,研究发现心肌梗死组HFABP的表达量明显低于冠脉狭窄组及对照组,冠脉狭窄组HFABP的表达量明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。这说明在尸检中测定心肌组织中HFABP含量对反映心肌缺血程度有重要意义。

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