黄柏化学成分部位的提取分离及活性研究

候海玲，刘彬

（乌海市检验检测中心乌海樱花医院，内蒙古 乌海 016000）

0 引言

黄柏为芸香科植物黄皮树或黄檗的干燥树皮。前者习称“川黄柏”，后者习称“关黄柏”，为临床常用中药之一，具有清热燥湿、泻火解毒、退虚热之功效[1]。现有文献资料表明，黄柏所含的主要有效成分为小檗碱（Berberine）[2]。传统提取分离黄柏的方法有酸水法[3]、石灰乳法[4]和醇提法[5]等。在这些方法中，或者在提取过程中破坏了化学成分，或者操作繁琐，本文对传统方法进行改进与创新，避免了高温加热对黄柏有效成分的破坏。

1 仪器与试药

1.1 仪器。TDL5M 台式大容量冷冻离心机（湖南湘仪仪器有限责任公司）；SPX--150B--Z 型生化培养箱（上海博讯实业有限公司医疗设备厂）；LGI---18 型冷冻干燥机（北京松原华兴科技发展有限公司制造）；冷冻干燥机.FD-1A-50（北京博医康实验仪器有限公司）；FA1004 型上皿电子天平（中华人民共和国上海精科天平）；UV-2600 紫外可见分光光度计（岛津）。

1.2 试药。黄柏（购于中蒙药材批发市场）；细菌（中国食品药品检定研究院）。

2 方法和结果

2.1 黄柏化学成分部位的提取分离。首先将黄柏粉碎成粉末，以冷浸的方法水提，冷冻干燥，制成水提干粉[6]。然后将剩余的药渣用70%乙醇重复提取两次，冷冻干燥制成干粉[7-8]。回流时水浴温度不得超过50℃，使用的是10000 分子的透析膜。提取工艺路线见图1。

2.2 黄柏不同提取部位的成分鉴别

2.2.1 吸光度值的测定：将黄柏的四种不同部位的提取物分别配制成浓度为0.02 mg/mL 的溶液，用微孔滤器过滤后，在波长为230-350 nm 范围内测紫外吸光度值，用蒸馏水做空白[9-10]。

结果表明，黄柏提取物中主要含有生物碱类。四种不同提取物紫外吸收峰（所测波长范围为230-350 nm）均有两个，且吸收峰位置相近，第一个吸收峰位置在280 nm 左右，第二个吸收峰位置在330 nm 左右，可见在同样条件下，黄柏醇提膜外的吸光度值高于其它三种提取物的吸光度值，说明同样条件下，黄柏醇提膜外的提取物比其他三种提取物所含的生物碱含量高。

图1 黄柏不同部位的提取分离图

2.2.2 薄层鉴别实验

①对照品溶液制备：精密称取盐酸小檗碱对照品10 mg，加水溶解制成每1 mL 含小檗碱1 mg 的溶液。

②薄层鉴别：取黄柏的四个不同部位的提取物及对照品溶液各5 μl，照薄层色谱法（中国药典2015 版四部0502）点于5‰羧甲基纤维素钠溶液制备的硅胶GF254 薄层板上，对以下几种不同展开系统进行了比较：①氯仿-甲醇-水（6:4:1），②正丁醇-醋酸-水（4:1:5），③苯-冰醋酸-甲醇（30:1:3），④醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水（10:7:1:1），⑤苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨试液（12:6:3:3:1）。结果以系统②展开效果较好，因此选择此展开剂展开，取出，晾干，波长365 nm 的紫外灯下观察，四种不同部位提取物在与对照品相同位置处有颜色相同的荧光斑点。

结果表明黄柏的不同部位提取物中都含有小檗碱，但各提取物中小檗碱含量不等。

2.3 黄柏不同提取部位的抑菌试验研究。采用钢管法对黄柏的不同提取部位进行抑菌实验，采用的菌种为大肠杆菌、痢疾杆菌、绿脓杆菌、变形杆菌、白色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌[11]。

实验方法：配制培养基、营养琼脂培养基，待溶解后，15P20 高压灭菌，置于已消毒好的培养皿中，每一块板加入的培养基为18-20 mL，待培养基完全凝固后，采用划线法接种已培养好的菌种，将高压过的小钢杯放入培养皿中，将已提取的黄柏四个不同部位的提取物分别配成20 mg/mL 的溶液，把已稀释好的药液加入到钢杯中，每一只钢杯加入250 μl 黄柏提取物溶液，然后将培养皿置于37℃温箱中培养24 h，观察抑菌圈的直径，抑菌圈的直径用标长尺测量，直径的单位以mm 计量，结果见表1。

结果表明，黄柏水提膜内对绿脓杆菌抑菌效果最好，黄柏水提膜外对绿脓杆菌及白色葡萄球菌抑菌效果相当且最好，抑菌圈达23 mm，黄柏醇提膜内对痢疾杆菌和绿脓杆菌效果最好，黄柏水提膜外对绿脓杆菌及白色葡萄球菌抑菌效果最好，可见黄柏有很好的抑菌能力，对不同菌的感染，可以使用不同提取部位的提取物，做抑菌药物使用。同一种药物不同提取物对不同菌株作用不同，表明不同提取方法提取的活性有效成分有所不同。

表1 黄柏四种提取物对6 种菌的抑菌

3 讨论

3.1 采用低温提取的优点。根据植物的本质，绝大部分的物质都是水解物，如水解植物蛋白、多肽、糖等，这些物质几乎都是人类所需的，易吸收，尤其是肽类的物质，更是受欢迎的，既稳定活性又好。因此采用冷浸提取的方法，不仅破坏植物细胞壁，把植物细胞内的物质浸出来，而且在此做过比较，有些物质加热后很快被破坏，有些物质加热出现不可逆的反应，成为胶体物，很难溶解，用有机物才能溶解，但遇到水后还原回去了，这样的物质进到机体很麻烦。所以采用低温提取，不破坏物质的成分。

3.2 先水提再醇提的优点。先进行水提，然后再醇提，因先醇提把一些物质给破坏了，有些植物蛋白遇到醇就变性，变成另外一种物质，有的活性被降解，因此我们采用本方法先水提再醇提，这样物质绝大部分不被破坏，产量高，用量少，活性强。