高效液相色谱—串联质谱法同时检测猪肉中125种兽药残留

徐伟 耿士伟 刘路 杨晨 程凤科 刘立军

摘    要：本方法建立了豬肉中包括磺胺类、喹诺酮类、硝基咪唑类、氯霉素类、β-受体激动剂类、大环内酯类、苯并咪唑类、糖皮质激素类等在内的125种兽药的高效液相色谱—串联质谱（HPLC-MS/MS）同时检测方法。样品经使用WondaPak QuEChERS多兽药残留专用提取包和净化包快速前处理后，通过多反应监测模式检测。对空白样品添加浓度1.0，5.0和10.0 μg·kg-1后，考察回收率和相对标准偏差（RSD），结果显示：1.0 μg·kg-1加标浓度的平均回收率为42.06%～121.14%，RSD为2.36%～19.07%;5.0 μg·kg-1加标浓度的平均回收率为55.10%～112.84%，RSD为2.50%～19.65%;10.0 μg·kg-1加标浓度的平均回收率为56.44%～114.57%，RSD为1.08%～18.45%。结果表明该方法具有前处理简便、测定时间短、通量大、重现性和准确度好等优点。

关键词：高效液相色谱-串联质谱法;同时检测;125种兽药;残留

中图分类号：TS251.5+1; S859.84         文献标识码：A          DOI 编码：10.3969/j.issn.1006-6500.2020.02.012

Simultaneous Determination of 125 Veterinary Drug Residues in Pork by High Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry

XU Wei1， GENG Shiwei2， LIU Lu1， YANG Chen1， CHENG Fengke1， LIU Lijun3

（1.Suqian Inspection Center of Agricultural and Animal Products Quality， Suqian， Jiangsu 223800， China; 2. Jiangsu Provincial Inspection and Test Center of Animal Product Quality， Nanjing， Jiangsu 210036， China; 3.Yangzhou University， Yangzhou， Jiangsu 225009， China）

Abstract：A high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry （HPLC-MS/MS） method was developed for the simultaneous quantification of 125 veterinary drugs in pork including sulfanilamides， quinolones， nitroimidazoles， chloramphenicola， β-agonists， macrolides， benzimidazoles and glucocorticoids. The meat samples were extracted and purified with WondaPak QuEChERS kits designed for multi-veterinary drug preparation， and then quantified by HPLC-MS/MS in multiple reaction monitoring mode. The method accuracy was investigated by calculating the recovery rates by adding standard mixture into blank sample at different concentrations of 1.0， 5.0 and 10.0 μg·kg-1， respectively. The experiments were repeated three times to evaluate the method reproducibility. The recovery rates of different adding concentrations of 1.0， 5.0 and 10.0 μg·kg-1 were 42.06%～121.14%， 55.10%～112.84% and 56.44%～114.57%， respectively. Correspondingly， the relative standard deviation （RSD） of replications were 2.36%～19.07%， 2.50%～19.65% and 1.08%～18.45%， respectively. The method was indicated to have many merits， including easy sample preparation， short analysis time， high reproducibility and accuracy， which can be used for high-throughput analysis of veterinary in meat samples.

Key words： high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry method; simultaneous determination; 125 veterinary drug; residue

3 结论与讨论

3.1 优化了净化方法

固相萃取因其选择性高且净化效果好而成为样品净化的首选方式[11-14]，但也正是由于其高选择性而限制了靶向分析物的范围。本方法中使用的多兽药残留专用净化包的主要成分是硫酸镁、N-丙基乙二胺固相吸附剂（PSA）、C18和石墨化碳黑，其中硫酸镁作用是去除水分，促进水相和有机相分离;PSA的作用是去除脂肪酸类和糖类干扰;C18作用是去除脂肪和非极性化合物干扰;石墨化碳黑的作用是去除色素和甾醇类干扰。试验结果表明，多残留净化包可以有效去除样品中大部分基质干扰，提高检测灵敏度，净化效果明显，在高通量、多残留检测筛选方面优势突出。

3.2 提升了检测效率

当前非法使用违禁药物、滥用抗菌药和药物添加剂等行为，是造成我国动物源性食品中兽药残留超标、引起畜禽产品安全和食品贸易争端的主要原因，也给食品安全监管增加了难度。本方法在样品前处理方面使用了多兽残专用提取包和净化包，仅需20 min左右;在上机检测方面，通过Shimadzu公司的Shim-pack GIST色谱柱16 min对125种兽药进行分离。整个流程操作简便，分析速度快，具有良好的重现性和准确度，可以为食品安全检测机构开展多种兽药快速筛查提供技术支持，为食品安全监管、执法提供有效的科学依据。

3.3 减少了试剂投入

传统的兽药残留检测前处理顺序为提取、净化、浓缩和定容[15-16]，其中的净化环节分為活化、上样、淋洗和洗脱步骤，基本每个环节（步骤）都需要使用有机试剂，需要有机试剂总量大，对人体伤害和环境污染均造成不同程度的影响。本方法在前处理过程仅需加入10 mL的5%甲酸乙腈溶液，省略了净化步骤中有机试剂的使用，相对传统的检测方法表现出了“低投入、高产出”的优势，特别是在大批量样品药物多残留检测时优势更为明显，极大减少了有机试剂的投入使用，减轻有机试剂对人体伤害和环境污染程度，更加符合当今环保趋势。

参考文献：

[1]曲斌.QuEChERS在动物源性食品兽药残留检测中的研究进展[J].食品科学，2013，34（5）：327-331.

[2]郝杰，姜洁，余建龙，等.固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法同时测定动物源性食品中多种兽药残留[J].食品科学，2017，38（12）：266-271.

[3]郭德华，邓晓军，赵善贞，等.固相萃取-高效液相色谱/串联质谱同时检测动物源性食品中76种兽药残留[J].分析化学，2010，38（3）：318-324.

[4]孙雷，王亦琳，叶妮，等.猪肉中92种兽残残留的UPLC-Qtrap高通量筛查和定量方法的研究[J].中国兽药杂志，2017，51（9）：36-42.

[5]郭海霞，肖桂英，张禧庆，等.QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法同时检测猪肉中121种兽药[J].色谱，2015，33（12）：1242-1250.

[6]罗辉泰，谢梦婷，黄晓兰，等.分散固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法同时测定畜禽肉中63种兽药残留[J].色谱，

2015，33（4）：354-362.

[7]左志辉，高立勤，唐素芳.固相萃取-液相色谱串联质谱法同时定量检测蜂蜜中28种类药物残留的研究[J].药物分析杂志，2009，29（7）：1196-1201.

[8]曹慧，陈小珍，朱岩，等.同位素稀释-固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱技术同时测定畜禽肉中四类兽药残留[J].质谱学报，2013，34（4）：202-214.

[9]李娜，张玉婷，刘磊，等.QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定动物源食品中4类29种禁限用兽药残留[J].色谱，2014，32（12）：1313-1319.

[10]冯楠，路勇，姜洁，等.QuEChERS结合LC-MS/MS同时测定虾肉中72种兽药残留[J].分析测试学报，2012，34（16）：221-227.

[11]刘红，曾建勇，温贤有，等.固相萃取技术及其影响因素[J].现代农业科技，2010（11）：351.

[12]陈加娜，宾赞，谢晖，等.固相萃取技术及其在水样分析中的应用[J].广州化工，2014（24）：40-41.

[13]刘长武，翟广书，买光熙，等.固相萃取技术的原理及进展[J].农业环境与发展，2003，20（1）：42-44.

[14]张哲.固相萃取技术在环境监测领域中的应用及研究进展[J].现代科学仪器，2013（3）：33-36.

[15]钱琛，李静，陈桂良.动物源性食品兽药残留分析中样品前处理方法的研究进展[J].食品安全质量检测学报，2015，6（5）：1666-1674.

[16]高金芳，岳婷婷，赵袆，等.兽药多残留样品前处理技术研究进展[J].畜牧兽医学报，2017，4（1）：8-22.