硫酸蒽酮法测定柑橘属植物多糖的研究

程立超，徐祺

(黑河学院，黑龙江 黑河 164300)

柑橘属(CitrusL.)属芸香科(Rutaceae)植物，在我国主要分布于长江流域及以南地区，资源丰富，有些种类可作为中药材用于临床治疗[1-3]。柑橘属植物中的维生素C、维生素P的含量非常丰富，作为食用和药用，具有增强免疫力、疏通血管、保护肝脏、健脾养胃、消除疲劳、抗癌等作用[4-9]。本研究采取硫酸蒽酮法检测丑橘、甜橙、甜心柚、血橙、芦柑果皮多糖的含量，可为以后的实验做好铺垫准备，更科学的选择实验材料。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验仪器、试剂及材料

仪器：电子天平(1/10000)，恒温水浴锅(上海精宏实验设备有限公司)，分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)，容量瓶，玻璃棒，试管，量筒，研钵。

试剂：浓硫酸，蒽酮，无水乙醇，无水葡萄糖。

材料：丑橘果皮，甜橙果皮，甜心柚果皮，血橙果皮，芦柑果皮。

1.1.2 供试药品的制备

取5支试管，分别加入冷冻处理后研磨过的丑橘、甜橙、甜心柚、血橙、芦柑果皮，加80%的乙醇溶液8 mL，在90 ℃水浴锅中加热1 h，之后过滤出提取液放置在新试管中，标号为丑橘、甜橙、甜心柚、血橙、芦柑。

向空试管中加入80%的乙醇溶液8 mL，然后加入蒽酮溶液2 mL，置于90 ℃水浴锅中1 h。作为空白对照组。

1.1.3 实验材料的处理

分别称取丑橘、甜橙、甜心柚、血橙、芦柑5种新鲜果皮10 g，将其放入冰箱中冷冻8 h，将研钵放入冰箱内冷冻8 h，之后将丑橘、甜橙、甜心柚、血橙、芦柑新鲜果皮研磨至颗粒状，分别置于烧杯中备用。

1.1.4 硫酸蒽酮溶液的配制

取0.4 g蒽酮粉末溶于100 mL 80%硫酸中，边加边搅拌至黄色透明溶液，转移在磨口瓶中，充分溶解后冷却至室温，现用现配制。

1.2 实验步骤

移取丑橘、甜橙、甜心柚、血橙、芦柑的5组果皮多糖提取液1 mL加入10 mL容量瓶中，定容后取2 mL加入到10 mL容量瓶中，加入2 mL硫酸蒽酮溶液，加蒸馏水定容。摇匀后，放置室温5 min，后移到试管中放到90 ℃水浴锅中加热15 min，冷却至室温。将分光光度计预热后，将对照组移入第一个比色皿中，其余3个分别放芦柑，丑橘，甜橙的提取液。选择620 nm波长检测。检测完毕后对照组不动，其余3组取出，换上血橙、甜心柚进行检测，得出5种材料吸光度。带入到标准曲线中，得到含糖量。

2 标准曲线的制备

第一步取无水葡萄糖1.04 g加入10 mL容量瓶中，以蒸馏水混合溶解稀释并定容，定容后浓度为1 mg/mL。第二步分别移取0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL，置于已编号的10 mL容量瓶中，加蒸馏水定容。第三步分别吸取上述溶液各1.0 mL，再加入5 mL硫酸蒽酮溶液，摇匀后，室温5 min，90 ℃水浴15 min，冷却至室温。空白对照：1 mL蒸馏水加入硫酸蒽酮溶液5 mL，摇匀后，室温放置5 min，然后置于90 ℃水浴15 min，冷却至室温；通过计算得浓度C与吸光度A的线性方程y=0.5346x+0.0814。实验数据见图1。

图1 葡萄糖标准曲线

葡萄糖标准液浓度为0时吸光度为0.0814；当浓度为0.5 mg/mL时，吸光度为0.3956；标准液浓度为1 mg/mL时，吸光度为0.6357；标准液浓度为1.5 mg/mL时，吸光度为0.8358；标准液浓度为2 mg/mL时，吸光度为1.0862；标准液浓度为2.5 mg/mL时，吸光度为1.4179。

3 结果与分析

3.1 柑橘属5种果皮的吸光度比较

使用硫酸蒽酮法对研磨后的丑橘、甜橙、甜心柚、血橙、芦柑果皮进行处理，选用分光光度计在620 nm处检测5种果皮吸光度。丑橘、甜橙、甜心柚、血橙、芦柑5种果皮吸光度如表1。

表1 柑橘属5种果皮的吸光度

柑橘属植物5种果皮的吸光度分别为：丑橘果皮1.506、甜橙果皮0.535、甜心柚果皮0.528、血橙果皮0.281、芦柑果皮0.894。血橙果皮的吸光度最低，甜心柚和甜橙果皮吸光度相近，丑橘果皮的吸光度最高。

3.2 柑橘属5种果皮的多糖含量分析

将得出的数据带入标准曲线公式y=0.5346x+0.0814得到含糖量。柑橘属植物5种果皮含糖量分别为丑橘果皮2.665 mg/mL、甜橙果皮0.8485 mg/mL、甜心柚果皮0.8354 mg/mL、血橙果皮0.3734 mg/mL、芦柑果皮1.52 mg/mL。见图2。

图2 柑橘属5种果皮的多糖含量

通过计算得出柑橘属植物5种果皮的含糖量百分比为丑橘果皮26.65%、甜橙果皮8.49%、甜心柚果皮8.35%、血橙果皮3.73%、芦柑果皮15.2%。

根据图中数据可得知，血橙果皮中含糖量在5种果皮中最低，其次为甜心柚果皮、甜橙果皮、芦柑果皮，丑橘果皮中含糖量在5种果皮中最高。甜橙果皮和甜心柚果皮含糖量差距不大。

利用分光光度计采用硫酸蒽酮法检测柑橘属丑橘、甜橙、甜心柚、血橙、芦柑果皮的多糖含量。结果显示，血橙果皮中含糖量在5种果皮中最低，其次为甜心柚果皮、甜橙果皮、芦柑果皮，丑橘果皮中含糖量在5种果皮中最高。甜心柚果皮和甜橙果皮的含糖量差距不大。