斯里兰卡姜黄中α-姜黄烯含量测定的方法学研究

杨 瀚，白雪飞，杨丽英，聂 扬，彭红芳，郑取韬,3，金 玲,3，高 岚，郭利群

(1．云南省科学技术院 云南现代民族药工程技术研究中心，云南 昆明 650106；2.国家中药现代化工程技术研究中心 云南民族药分中心，云南 昆明 650106；3.楚雄医药高等专科学校 药学系，云南 楚雄 675005)

斯里兰卡具有资源丰富性、生态环境独特性和大健康文化特有性的特点.斯里兰卡人的餐桌离不开咖喱，而咖喱的主要成分之一就是姜黄.

姜黄(CurcumalongaL.)为姜科(Zingiberaceae)植物姜黄(CurcumalongaL)的根茎，又名：郁金、宝鼎香等.味辛、苦，温.归脾、肝经，有破血行气、通经止痛的功效[1].姜黄的挥发油种含有多种化学成分，主要为单萜、倍半萜类化合物[2].药理学实验表明姜黄类药物对急性心肌缺血具有协同保护作用[3-4]，其提取物具有抗肿瘤活性[5].而姜黄挥发油对皮肤鳞状细胞癌具有较好的抑制作用[6].同时姜黄又可作烹调配料或制成酱菜、糖姜.茎、叶、根茎均可提取芳香油，用于食品、饮料及化妆品香料中[7].

α-姜黄烯为姜黄中主要的指标成分.文中以α-姜黄烯含量为指标，采用气相色谱法测定斯里兰卡姜黄中α-姜黄烯的含量.旨在“一带一路”政策部署下，充分将云南的地域和技术优势与斯里兰卡的资源和地域优势相融合，为斯里兰卡姜黄质量评价提供依据.为后续大健康产品开发提供技术支持和保障.

斯里兰卡姜黄样品由云南现代民族药工程技术研究中心总工程师郭毅新鉴定，标本存放于云南现代民族药工程技术研究中心标本室，标本号：CDYN-HS-00112-1.

1 仪器与材料

Agilengt 7890B气相色谱仪，电子天平(赛多利斯 SI-224，d=0.1 mg)，超声波清洗器(天津恒奥科技 HU-15-005)，α-姜黄烯标准品(EXTRASYNTHESE，批号：2016)，石油醚(60～90 ℃)：(四川西陇化工有限公司，批号：160810)，姜黄(干品)，2019年6月20日购于斯里兰卡).

2 方法与结果

2.1 测定条件

Agilent 7890B气相色谱仪(FID检测器)，色谱柱：DB-1(30 m×0.25 mm×0.25 μm)，进样口温度250 ℃，检测器温度300 ℃，分流比 5∶1，氮气流速：1 mL/min.程序升温：初始温度50 ℃，以50 ℃/min升温至 165 ℃，保持 8 min.

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品储备溶液配制

取α-姜黄烯标准品 20 mg，精密称定，置于 10 mL 的容量瓶中，加石油醚定容至刻度，摇匀，即可得(质量浓度为 2 mg/mL).

2.2.2 对照品上机溶液配制

量取对照品储备溶液 1 mL 至 10 mL 容量瓶中，用石油醚稀释至刻度，摇匀即可得(质量浓度为 0.2 mg/mL).

2.2.3 标准曲线溶液的配制

分别量取对照品储备溶液10、20、40、100、250 μL于 1 mL 量瓶中，用石油醚稀释至刻度，摇匀即可，质量浓度分别为20、40、80、200、500 μg /mL.

2.2.4 样品溶液的制备

称取过2号筛的试样约 3 g，精密称定，置于 100 mL 具塞锥形瓶中，精确加入石油醚(60～90 ℃)25 mL，密封.置于超声提取器内(提取温度25 ℃)提取 30 min，静置 10 min，取上清液用 0.45 μm 滤膜滤过，即得.

3 方法学考察

3.1 线性关系与线性范围考察

取配置好的对照品溶液，进样 1 μL.以峰面积为纵坐标、进样(ng)量为横坐标，得到标准曲线回归方程Y=2.339 70X+33.455 08(R= 0.996)，进样量在20～500 ng 范围内，线性关系良好,结果分别见表1、图1.

表1 α-姜黄烯线性关系

3.2 精密度试验

取对照品上机溶液连续进样6针，记录峰面积，结果见表2.

表2 α-姜黄烯精密度试验

3.3 重复性试验

参照样品溶液的配制方法，制备6份样品溶液，分别依次进样 1 μL.记录α-姜黄烯的保留时间和相应的峰面积，并计算α-姜黄烯的含量，结果见表3.

表3 α-姜黄烯重复性试验

3.4 稳定性试验

参照样品溶液的配制方法，制备2份样品溶液，每隔2、6、8、24 h 分别依次进样 10 μL.记录α-姜黄烯的保留时间和相应的峰面积，结果见表4.

表4 α-姜黄烯稳定性试验

3.5 准确度试验

取制备好的供试品试液，密封，在4 ℃冰箱分别摆放0、0.5、1、2、4、8、12 h 分别进样 1 μL.记录α-姜黄烯的保留时间和相应的峰面积，结果见表5.

表5 α-姜黄烯准确度试验

3.6 专属性试验

参照对照品溶的配制方法，配制对照品溶液1份，用配制对照品的溶剂作为溶剂空白溶液，分别进样，在对照品主要成分保留时间左右的位置，空白溶液相对应的时间应无杂质干扰峰，结果见图2、图3、图4.

4 提取方法的优化

4.1 提取溶剂的影响

取斯里兰卡姜黄样品 5 g(精密称定)6份，分别置于 100 mL 具塞锥形瓶中，分别加入乙醚溶液、石油醚(30～60 ℃)溶液、石油醚(60～90 ℃)各 25 mL，超声提取 30 min(温度25 ℃)，静置冷却 10 min，取上清液于 0.45 μm 滤膜过滤，即得.测定结果见表6.

表6 提取溶剂对α-姜黄烯含量的影响

测定结果表明石油醚(60～90 ℃)溶液提取斯里兰卡姜黄中α-姜黄烯的含量较高，故选取石油醚(60～90 ℃)溶液为提取溶剂.

4.2 称样量及提取溶液剂量的影响

分别精密称定斯里兰卡姜黄样品3、5 g ，于 100 mL 的锥形瓶中，并编号为A、B.A精密加入石油醚溶液 25 mL；B精密石油醚溶液 50 mL，摇匀，超声提取 30 min(25 ℃)，静置 10 min，取上清液于 0.45 μm 滤膜过滤，即得.测定结果见表7.

表7 称样量及提取溶液剂量对α-姜黄烯含量的影响 %

结果表明称取量为 3 g，提取溶剂 25 mL 即可.

4.3 样品浸泡提取时间的影响

称取斯里兰卡姜黄样品 3 g 精密称定6份，分别于 100 mL 的锥形瓶中，精密加石油醚溶液 25 mL，摇匀，浸泡0、30 min、1、2、3、4 h、过夜，超声提取 30 min，静置 10 min，取上清液于 0.45 μm 滤膜过滤，即得.分别精密吸取对照品溶液、各样品溶液 1 μL 注入气相色谱仪测定.结果见表8.

表8 样品浸泡提取时间对α-姜黄烯含量的影响

结果表明，浸泡时间对样品提取率没有影响，可以不用浸泡处理.

4.4 样品超声提取时间的影响

称取斯里兰卡姜黄样品 3 g 精密称定5份，分别于 100 mL 的锥形瓶中，精密加石油醚溶液 25 mL，摇匀，分别超声提取10、15、30、45、60 min，静置 10 min，取上清液于 0.45 μm 滤膜过滤，即得.分别精密吸取对照品溶液、各样品溶液 1 μL 注入气相色谱仪测定.结果见表9.

表9 样品超声提取时间对α-姜黄烯含量的影响

结果表明，超声提取时间以 30 min 为宜.

综上所述斯里兰卡姜黄中α-姜黄烯含量测定，取样量为 3 g，采用油醚(60～90 ℃)作为提取溶剂，超声提取时间 30 min.

5 结语

本研究建立了斯里兰卡姜黄α-姜黄烯的含量测定方法，对线性范围、精密度、准确度等各方面进行考察，发现该方法专属性好、实用性强，结果稳定可靠.优化提取工艺，确定取样量为 3 g，采用油醚(60～90 ℃)作为提取溶剂，超声提取时间 30 min 为姜黄中α-姜黄烯最佳含量测定.