降脂通络方对高脂血症模型大鼠胆固醇逆转运蛋白的影响

徐则林 陈新宇 李晓屏 蔡虎志

摘要 目的：观察降脂通络方对高脂血症模型大鼠胆固醇逆转运蛋白的影响。方法：健康SD大鼠40只，随机抽取10只为正常对照组，余30只建立高脂血症模型后随机分为模型对照组、降脂通络组和辛伐他汀组，每组10只。各组连续干预30 d。检测实验末各组大鼠血清血脂和ABCA1/apoA-I/LCAT的表达水平。结果：与正常对照组比较，实验各组血脂水平升高明显（P<0.05），降脂通络组和辛伐他汀组较模型对照组升高相对缓慢（P<0.05）。与正常对照组比较，实验各组血清ABCA1/apoA-I/LCAT的表达明显降低，降脂通络组、辛伐他汀组较模型对照组降低相对缓慢（P<0.05），其中降脂通络组对血清ABCA1和LCAT延缓下调作用较辛伐他汀组更为显著（P<0.05）。结論：降脂通络方对高脂血症的治疗作用可能是通过上调胆固醇逆转运蛋白ABCA1、apoA-1和LCAT，进而促进成熟HDL-C的形成而实现的，这可能是其治疗高脂血症的重要机制之一。

关键词 高脂血症;降脂通络方;ABCA1;apoA-I;LCAT;胆固醇;大鼠;中医药

Effect of Jiangzhi Tongluo Recipe on Cholesterol Reverse Transport Protein in Hyperlipidemic Rats

XU Zelin，CHEN Xinyu，LI Xiaoping，CAI Huzhi

（The First Affiliated Hospital of Hunan University of Chinese Medicine，Changsha 410007，China）

Abstract Objective：To observe the effects of Jiangzhi Tongluo Recipe on cholesterol reverse transport protein in hyperlipidemic rats.Methods：A total of 40 healthy SD rats were randomly divided into a control group，a Jiangzhi Tongluo group and a simvastatin group，with 10 rats in each group.And another 10 rats were set as a normal control group.Each group was given corresponding treatment for 30 days.Serum lipids and ABCA1/apoA-I/LCAT levels in each group were detected at the end of the experiment.Results：Compared with the normal control group，the serum lipid level of the experimental groups increased significantly（P<0.05）.Compared with the model control group，Jiangzhi Tongluo group and simvastatin group increased relatively slowly（P<0.05）.Compared with the normal control group，the expression of ABCA1/apoA-I/LCAT in serum decreased significantly.Compared with the model control group，the Jiangzhi Tongluo group and simvastatin group decreased relatively slowly（P<0.05）.The effect of Jiangzhi Tongluo group on serum ABCA1 and LCAT was more significant than that of simvastatin group（P<0.05）.Conclusion：The therapeutic effects of Jiangzhi Tongluo Recipe on hyperlipidemia may be realized by up-regulating the cholesterol reverse transporter ABCA1，apoA-1 and LCAT，and then promoting the formation of mature HDL-C.This may be one of the important mechanisms for treatment of hyperlipidemia.

Keywords Hyperlipidemia; Jiangzhi Tongluo Recipe; ABCA1; apoA-I; LCAT; Cholesterol; Rats; Traditional Chinese medicine

中图分类号：R285.5文献标识码：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2020.01.010

高脂血症是人体内脂质代谢失常，血清中一种或多种脂质成分异常增高的一種病症，可表现为高胆固醇血症、高三酰甘油血症、混合型高脂血症，其实质是指机体内脂肪代谢和（或）转运失常。近年来，医学界逐渐认识到血清中高密度脂蛋白降低也是一种重要的血脂代谢紊乱[1]。现在普遍认为升高高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）是影响动脉粥样硬化疾病的负相关危险因子[2]，能够起到胆固醇逆转运作用，而在成熟HDL-C的形成过程中，重要的逆转运蛋白ATP结合盒转运蛋白A1（ABCA1）、载脂蛋白A-I（apoA-I）和卵磷脂胆固醇脂酰转移酶（LCAT）的表达发挥重要功能[3]。鉴于此，为探究降脂通络方在治疗高脂血症的过程中是否对血清ABCA1/apoA-I/LCAT的表达起某种调控功能而进行此实验研究。报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 健康SPF级SD大鼠40只，雌雄各半，体质量200～220 g，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供。动物许可证号SCXK（湘）2018-002。通过为期7天的自由喂养，使其能够尽快适应环境。喂养环境包括：光/暗时间均为12 h，白天光照时间为早上6：00至晚上6：00、温度参数为（18±3）℃、周围噪声为（35±15）db。

1.1.2 药物 降脂通络方由湖南中医药大学第一附属医院治未病中心提供。辛伐他汀（甘肃益尔药业股份有限公司，国药准字H20123110）。

1.1.3 实验仪器和试剂 电子称（湖南湘仪天平仪器生产企业，型号：TP-1500）、全自动生化检测仪（德国罗氏试剂诊断中心，型号：Cobas c800）、智能双重纯水蒸馏器（山东玻璃仪器四厂，型号：SZ-93）、低速离心机（北京医用离心机厂，型号：LD522A）。低密度/高密度胆固醇脂蛋白检测试剂盒、三酰甘油/总胆固醇检测试剂盒，均由德国罗氏试剂诊断中心提供;ABCA1、apoA-I和LCAT Elisa检测试剂盒购自武汉博士德生物工程公司。

1.2 方法

1.2.1 模型建立与分组 依照参照文献[4]方法，对30只建模大鼠进行高脂乳剂灌胃，连续45 d，灌胃结束后，断尾采血检测血脂水平，以评价模型建立情况。使用随机区组设计将30只已成模大鼠分为模型对照组、降脂通络组和辛伐他汀组3组，另设10只正常大鼠为正常对照组。

1.2.2 给药方法 降脂通络组、辛伐他汀组分别按0.46 mg/kg、1.33 mg/kg的剂量灌胃给药，1次/d，连续30 d;正常对照组、模型对照组给予等量的蒸馏水灌胃，连续30 d。在给药干预过程中，降脂通络组、辛伐他汀组和模型对照组持续高脂乳剂灌胃，截止到实验全部完成。

1.2.3 检测指标与方法

1）血脂测定：用1.0 mLEP管量取0.5 mL血清，使用全自动生化检测仪对其进行组分测定，确定样本位，开启后确定含量值。

2）血清ABCA1/apoA-I/LCAT的检测：各组大鼠自腹主动脉取血，静置10 min后，3 000 r/min离心15 min，后将其放在-80 ℃冰箱中。以ELISA法对血清ABCA1、LCAT和apoA-I进行测定，具体操作步骤需要参照试剂盒标准说明行。

1.3 统计学方法 采用SPSS 20.0统计软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，选择单因素方差分析法对各组均数组间进行比较，在方差齐时采用LSD法，若方差不齐，则选择Tamhane′T2法。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组大鼠的体质量值比较 与正常对照组比较，实验后所有实验大鼠体质量均明显增加，差异有统计学意义（P<0.05）;降脂通络组和辛伐他汀组体质量升高较为缓慢，与模型对照组比较差异有统计学意义（P<0.05），降脂通络组和辛伐他汀组进行比较，差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。

2.2 各组大鼠血脂变化比较 与正常对照组比较，各实验组大鼠血清LDL-C、TG、TC水平均有所上调，而HDL-C水平有所下调，差异有统计学意义（P<0.05）;辛伐他汀组、降脂通络组血清LDL-C、TG、TC的水平上调稍缓，HDL-C水平下调稍缓，与模型对照组比较差异有统计学意义（P<0.05），辛伐他汀组、降脂通络组之间的比较，差异无统计学意义（P>0.05）。见表2。

2.3 各组血清ABCA1/aPoA-I/LCAT变化比较 与正常对照组比较，各实验组大鼠血清ABCA1、aPoA-I、LCAT均呈降低趋势，差异有统计学意义（P<0.05）。与模型对照组比较，降脂通络组和辛伐他汀组血清ABCA1、aPoA-I、LCAT表达下调略缓，差异有统计学意义（P<0.05），且降脂通络组较辛伐他汀组在延缓血清ABCA1和LCAT水平降低方面比较，差异有统计学意义（P<0.05）。见表3。

3 討论

高脂血症发展过程中，研究者们越来越重视HDL-C水平的原因是它介导了逆胆固醇转运（Reverse Cholesterol Transport，RCT）[5]。RCT即将肝外组织的胆固醇转运到肝脏，在肝内转化成胆汁酸并排出体外，这一过程是人体中脂蛋白和胆固醇进行循环代谢的一个必要步骤，能够降低胆固醇在血管壁的附着量。RCT的主要作用为促使外周细胞内游离的胆固醇转移至肝脏，经肝脏代谢完成体内循环。现今发现，外周细胞内胆固醇流出的主要路径即为ABCA1/aPoA-I/LCAT通路[6-7]。作为主要的胆固醇逆转运蛋白，ABCA1基因于1994年被克隆获得[8-9]。ABCA1属于ATP结合转运蛋白家族中的一个重要分子，其通过ATP降解的方式形成，可以促进各种底物例如脂质等实现有效传递，属于RCT的一个核心机制[10-11]。在胆固醇逆转运的过程中，ABCA1蛋白发挥介导作用，包括2个环节[12-13]：1）外周细胞膜中的ABCA1将细胞中的磷脂介导转运出胞，和细胞外的aPoA-I结合形成具有盘旋结构的磷脂复合物;2）细胞内的胆固醇通过扩散跨膜流出，被此复合物捕获，形成前β高密度脂蛋白（HDL），在LCAT的作用下，转变成富含胆固醇脂球状的成熟HDL，将胆固醇转运至肝脏，代谢排出体外。

降脂通络方由丹参、西洋参、田三七、川芎、茯苓、薏苡仁、山楂、决明子组成。丹参，味苦，性微寒，归心、肝经。《神农本草经》云其“治心腹邪气，肠鸣幽幽如走水，寒热积聚，破癥除瘕，止烦满，益气”。《本草纲目》曰“丹参色赤味苦，气平而降，阴中之阳也。入手少阴、厥阴经。心与包络血分药也”。可见丹参为血分要药，既能活血化瘀又能养血，不论虚实皆可用之。西洋参，味甘、微苦，性凉，归心、肺、肾经。《医学衷中参西录》言之“味甘微苦，性凉。能补助气分，兼能补益血分，为其性凉而补，凡欲用人参而不受人参之温补者，皆可以此代之”。西洋参益气扶正以治本，与丹参共为方中君药。田三七，味甘、微苦，性温，归肝、胃经。《景岳全书》说其“味甘气温，乃阳明、厥阴血分之药，故善止血散血定痛”。田三七既能助丹参活血化瘀，又有补虚强壮之效[14]。川芎，味辛，性温，归肝、胆、心包经，为治气滞血瘀诸痛症之要药，气行则血行。田三七、川芎共助丹参活血化瘀之功，为方中臣药。茯苓利水渗湿，健脾，宁心[15];薏苡仁利水渗湿，健脾止泻，除痹，排脓，解毒散结[16]。茯苓、薏苡仁既能健脾，杜绝痰湿生成之源，又能直接利水渗湿，为方中佐药。山楂消食健胃，行气散瘀，化浊降脂[17]。《本草备药》曰“泻滞气，消积，散瘀，化痰”。决明子清肝明目，润肠通便。现代药理学研究明确，山楂、决明子有降血脂、抗动脉粥样硬化的作用，亦为佐药。全方共奏活血化瘀、健脾渗湿、降脂通络之功。本实验研究发现，降脂通络方对高脂血症的治疗作用是通过上调RCT过程的关键蛋白ABCA1、aPoA-1和LCAT，进而促进成熟HDL-C的形成而实现的，这可能是其治疗高脂血症的重要机制之一。

参考文献

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（2018-12-09收稿 责任编辑：芮莉莉）

基金项目：湖南省干部保健委员会资助项目（B2017-06）作者简介：徐则林（1986.05—），女，硕士，主治医师，研究方向：中医药防治慢性疾病的研究，E-mail：751825767@qq.com通信作者：蔡虎志（1986.09—），男，博士，助理研究员，主治医师，研究方向：中医药防治心脑血管疾病的研究，E-mail：805032226@qq.com