温肾益精散对断奶仔猪生长性能和免疫水平的影响

高珍珍，穆祥，高魁，吕博，杨英*

(1. 内蒙古农业大学兽医学院，内蒙古 呼和浩特 010018；2. 北京农学院，北京 102206；3. 内蒙古鄂尔多斯市东胜区成郊动物卫生监督站，内蒙古 鄂尔多斯 017000)

仔猪断奶后因其各项生理机能发育尚未完全，胃酸分泌不足，内源性消化酶活性较低，加之断奶、换料及饲养环境等发生变化，容易引起断奶仔猪应激，表现为胃肠道菌群失衡、腹泻、生长缓慢、免疫力下降，严重者可导致死亡，给养殖户造成重大的经济损失。此阶段猪群的各类疾病曾常用抗生素来预防控制，然而抗生素的长期大量使用已使猪群病原菌产生了耐药性，造成疾病防控的效果不理想，同时抗生素的残留也给人类健康带来诸多影响。许多国家已经开始限制抗生素在动物饲粮中的使用，因此，开发安全高效的防控疾病和提高生产性能的药物与添加剂，在养猪业生产中显得尤为重要。中草药由于具有安全、毒副作用低、资源丰富等优点现被广泛应用于仔猪饲粮中[1-2]。谢红兵等[3]将从白术、黄芪、牛膝中提取的多糖添加到饲粮中用于改善肠道内环境，降低腹泻率，提高仔猪的生长性能。

课题组前期研究结果表明，温肾益精散(主要组成：五味子、熟地黄、肉苁蓉等)可以显著提高肾阳虚模型大鼠生长性能[4]。因仔猪在断奶期间生长特点和疾病发生规律与肾阳虚病证相似，为此，本研究将进一步探讨饲粮中添加不同剂量温肾益精散对断奶仔猪生长性能及免疫水平的影响，为温肾益精散在断奶仔猪饲粮中的临床应用提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验所用温肾益精散由北京农学院提供，以五味子、熟地黄、肉苁蓉为主要功能性成分。

1.2 试验设计

选择120头、35日龄、平均体重(10.05±0.25)kg的“杜长大”断奶仔猪，随机分为3组：空白对照组，温肾益精散高剂量组，温肾益精散低剂量组。每组4个重复，每个重复10头断奶仔猪，对照组饲喂基础日粮(由正大集团提供)，温肾益精散高、低剂量组分别在饲喂基础日粮的基础上，添加0.5%、0.25%的温肾益精散。

1.3 饲养管理

动物试验在内蒙古鄂尔多斯市德鑫种猪场进行。试验前1周对圈舍进行消毒。试验猪饲养在封闭式断奶仔舍内，自由采食和饮水，按常规养殖场操作规范进行管理和免疫。每日分上、下午、晚上3次观察各重复猪只生长及采食情况，并记录每日采食量。适应性饲养一周，试验期为40 d。

1.4 指标测定及方法

1.4.1 生长性能指标

试验期，记录每个重复的初始体重和终末体重，计算每头仔猪的平均日增重(ADG)。记录每个重复的喂料量和剩料量，计算每头仔猪的平均日采食量(ADFI)。料重比(F/G) 为平均日采食量除以平均日增重。

试验第0，30及40天，分别从每个重复中随机选择体况相近的2头仔猪，于前腔静脉处采血，室温静置30 min，3 000 r/min离心10 min，分离血清，-20 ℃下冷冻保存。胰岛素样生长因子1(IGF-1)、生长激素(GH)、生长抑素(SST)试验操作严格按照试剂盒(由北京利德曼生化技术有限公司提供) 说明书进行。

1.4.2 免疫相关指标

试验第0，30及40天，分别从每个重复中随机选择体况相近的2头仔猪，于前腔静脉处采血，室温静置30 min，3 000 r/min 离心10 min，分离血清，-20 ℃下冷冻保存。免疫球蛋白A(IgA)，免疫球蛋白G(IgG)，免疫球蛋白M(IgM)，白介素2(IL-2)和白介素4(IL-4)，试验操作严格按照试剂盒(由北京利德曼生化技术有限公司提供) 说明书进行。

1.5 数据统计分析

试验数据采用SPSS 20.0统计软件进行单因素方差分析(one-way ANOVA)，用Duncan氏法进行多重比较，P<0.05为差异显著。试验结果用平均值±标准差(X±SD)表示。

2 结果与分析

2.1 温肾益精散对断奶仔猪生长性能的影响

2.1.1 温肾益精散对断奶仔猪ADG、ADFI和F/G的影响

由表1可知，给药结束(第30天)时，温肾益精散高、低剂量组的平均日增重显著高于空白对照组(P<0.05)，高、低剂量组之间的平均日增重差异不显著(P>0.05)；温肾益精散高、低剂量组的平均日采食量和料重比与空白对照组差异不显著(P>0.05)。

表1 温肾益精散对断奶仔猪ADG、ADFI和F/G的影响

组别ADG/kgADFI/kgF/G高剂量0.412±0.010 a0.713±0.092 a1.731±0.242 a低剂量0.413±0.033 a0.800±0.775 a1.940±0.237 a空白对照0.352±0.029b0.717±0.753 a2.037±0.234 a

注：同列数据标不同字母者差异显著(P<0.05)，相同字母者无显著差异(P>0.05)。下同

2.1.2 温肾益精散对断奶仔猪IGF-1、GH和SST的影响

由表2可知，试验前(第0天)，空白对照组、低剂量组、高剂量组之间IGF-1、GH、SST的差异不显著(P>0.05)；给药结束(第30天)，低剂量组与高剂量组的IGF-1和GH含量显著高于空白对照组(P<0.05)，低剂量组与高剂量组的SST含量显著低于空白对照组(P<0.05)；试验结束(第40天)，高剂量组与低剂量组IGF-1、GH含量显著高于空白对照组(P<0.05)，高剂量组与低剂量组SST含量与空白对照组差异不显著。给药结束(第30天)和试验结束(第40天)，高剂量组与低剂量组相比，IGF-1、GH、SST含量差异均不显著(P>0.05)。

表2 温肾益精散对断奶仔猪血清中IGF-1、GH、SST含量的影响 ng/mL

2.2 温肾益精散对断奶仔猪免疫功能的影响

2.2.1 温肾益精散对断奶仔猪IgA、IgG、IgM的影响

由表3可知，试验前(第0天)，空白对照组、低剂量组、高剂量组三组IgA、IgG、IgM的差异不显著(P>0.05)；给药结束(第30天)，低剂量组与高剂量组的IgA、IgG、IgM含量显著高于空白对照组(P<0.05)；试验结束(第40天)，高剂量组与低剂量组IgA、IgG、IgM含量显著高于空白对照组(P<0.05)；给药结束(第30天)和试验结束(第40天)，低剂量组与高剂量组相比，IgA、IgG、IgM含量差异均不显著(P>0.05)。

表3 温肾益精散对断奶仔猪血清中IgA、IgG、IgM含量的影响 ng/mL

2.2.2 温肾益精散对断奶仔猪血清IL-2、IL-4的影响

由表4可知，试验前(第0天)，空白对照组、低剂量组、高剂量组三组IL-2、IL-4的差异不显著(P>0.05)；给药结束(第30天)，低剂量组与高剂量组的IL-2、IL-4含量显著高于空白对照组(P<0.05)；试验结束(第40天)，高剂量组与低剂量组IL-2、IL-4含量显著高于空白对照组(P<0.05)；给药结束(第30天)和试验结束(第40天)，低剂量组与高剂量组相比，IL-2、IL-4含量差异均不显著(P>0.05)。

表4 温肾益精散对断奶仔猪血清中IL-2、IL-4含量的影响 pg/mL

3 讨论

散剂作为中药传统剂型之一，具有易分散、吸收快、制作工艺简单、生产不污染环境、生物活性稳定、储运方便、不易发霉变质等优点，可以有效节约中药资源，提高经济价值。研究表明，仔猪断奶后生长迟缓主要与由应激造成的肠道损伤、胃肠酶活性下降、肠道微生态环境紊乱等相关[5-6]。中兽医将各因素导致的内分泌功能紊乱，进而引起的生长迟缓归纳为肾阳虚证。笔者认为仔猪在断奶期间生长迟缓特点和疾病发生规律为肾阳虚病证[4]。因此，以五味子、熟地黄、肉苁蓉等温补肾阳的中药为主要成分组成温肾益精散，防治仔猪生长迟缓，以期替代抗生素和激素的使用，服务于食品安全。其中，五味子具有益肾固精，涩肠止泻，改善仔猪胃肠道微生物菌群平衡，调节胃液及促进胆汁分泌，提高生长速度，降低仔猪腹泻率的作用；肉苁蓉温而不燥，补而不峻，是性质温和的滋补强壮药，可激活肾上腺、释放皮质激素，促进机体生长；熟地黄能够补血滋阴，填精益髓,增强机体免疫力[7-8]

平均日增重是反映动物生长过程中的一个重要指标，本试验给药结束(第30天)，温肾益精散高、低剂量组的平均日增重显著高于空白对照；高、低剂量组的料重比与对照组相比，虽然差异不显著，但总体还是低于对照组的。IGF-1是动物机体中由肝细胞、肾细胞、脾细胞等多种细胞通过自分泌/旁分泌途径产生的一种活性蛋白多肽物质，具有促进肌肉发育，骨骼生长，葡萄糖代谢等多种功能[9-10]。GH是动物脑垂体远侧部腺垂体合成并分泌一种单链蛋白质类激素，广泛存在于各种脊椎动物中，与机体生长、发育、繁殖等密切相关[11]。SST能够抑制生长素、胃泌素、胰岛素和促胰液素等激素的合成和释放，减少胃、肠和胰液的分泌，因此，在一定范围内，降低SST含量，有利于动物的生长发育[12]。本试验给药结束(第30天)和试验结束(第40天)时，温肾益精散高、低剂量组断奶仔猪血清中IGF-1和GH含量显著高于空白对照组；给药结束(第30天)，温肾益精散高、低剂量组血清中SST含量显著低于空白对照组。这些结果表明，温肾益精散可以促进饲粮中营养成分的消化吸收，提高对饲粮的转化率，通过提高断奶仔猪血清中的IGF-1和GH，降低SST含量，提高断奶仔猪生长性能。

机体免疫包括体液免疫和细胞免疫。体液免疫是由B淋巴细胞介导的特异性抗原抗体反应[13]。免疫球蛋白是由浆细胞合成和分泌的一组能与抗原发生特异性结合的球蛋白，是体液免疫的主要抗体，血清中抗体的高低在一定程度上反映机体对疾病的抵抗能力[14-15]。IgA在维持肠道微生物组的正常稳态平衡中起重要作用[16]；IgG在动物体内的合成和分泌时效长、含量高，在感染或人工免疫后，可显著提高机体的免疫调节作用[17]；IgM是机体抗感染和免疫刺激后首先产生的抗体成分，产量少，时效短，但是在早期免疫防御中起重要作用[18-19]。试验给药结束(第30天)和试验结束(第40天)时，温肾益精散高、低剂量组的血清中IgA、IgG和IgM含量显著高于空白对照组，说明温肾益精散可显著提高断奶仔猪血清中IgA、IgG和IgM含量，从而提高断奶仔猪机体的体液免疫功能。

细胞免疫主要由T淋巴细胞分化成效应性T淋巴细胞和分泌细胞因子而发挥免疫作用[20]。T淋巴细胞主要包括Th1和Th2 两个细胞亚群，IL-2是由Th1细胞分泌[21]，对T、B细胞、自然杀伤性细胞、单核巨噬细胞及少数胶质细胞都能直接促进其生长[22]。IL-4由Th2细胞分泌，作用于Th2细胞，促进其增殖、分化[23]。据报道，Th1和Th2之间的动态平衡在维持生物体的正常免疫功能中起重要作用[24]。本试验结果显示：给药结束(第30天)和试验结束(第40天)时，温肾益精散高、低剂量组中IL-2、IL-4含量显著高于空白对照组，说明温肾益精散可以通过调节Th1和Th2之间的动态平衡，更好地协调机体的细胞免疫应答。

4 结论

饲粮中添加适量温肾益精散可以提高断奶仔猪的生长性能和免疫水平。在本试验条件下，断奶仔猪饲粮中添加0.5% 的温肾益精散效果为最佳。