茶籽多糖羧甲基化修饰及其对油脂抗氧化作用研究

周丽明, 张 勇

(上饶师范学院 生命科学学院，江西 上饶 334001)

食用植物油中含有甾醇、生育酚、多酚、β-胡萝卜素等生物活性物质，其中生育酚和多酚具有抗氧化作用[15-16]。但在油脂精炼过程中会造成生物活性物质减少，因此添加油脂抗氧化剂就成为保障油脂品质的一种常见方法[17]。目前，食用油脂天然抗氧化剂分为油源性天然抗氧化剂和非油源性天然抗氧化剂[18]。油源性天然抗氧化剂来源于油料，既能保障油脂品质，又能加强油料的综合利用，从而具有重要的经济和社会价值。目前，将茶籽多糖作为油源性油脂抗氧化剂的研究还不多见。本项目组的前期研究[19]表明，茶籽多糖对油脂具有一定的抗氧化作用，但效果比传统的油脂抗氧化剂稍弱。多糖的生物功能与其结构有着紧密联系，通过修饰多糖结构以加强其生物功能已成为增强多糖应用价值的一条有效途径。

1 材料与方法

1.1 试验材料

油茶粕，江西华尔圣实业有限公司提供。金龙鱼食用植物调和油，购于超市，氯仿、正丁醇、三羟甲基氨基甲烷、盐酸、邻苯三酚、乙二胺四乙酸、柠檬酸、特丁基对苯二酚、乙醚、无水乙醇、丙酮、氢氧化钠、一氯乙酸钠等均为分析纯。

UV-2102.PC型紫外可见分光光度计，尤尼柯上海仪器有限公司；HH-6数显恒温水浴锅，江西省博力仪器设备有限公司；AL204型电子天平，梅特勒-托利多仪器上海有限公司；TGL-16C型离心机，上海安亭科学仪器厂；FD-1A-50型真空冷冻干燥机，上海继谱电子科技有限公司；GZX-9076MBF型电热恒温鼓风干燥箱，上海博迅实业有限公司医疗设备厂。

1.2 试验方法

1.2.1 茶籽多糖制备

以油茶粕为原料，按文献[6]操作，经80%乙醇沉淀，离心，丙酮和乙醚分别洗涤沉淀，真空冷冻干燥后得茶籽多糖。

准确称取250 mg茶籽多糖，加入25 mL一定体积分数的乙醇溶液，在一定温度下充分搅拌1 h以混匀，然后加入一定质量的NaOH，搅拌1 h以使多糖充分碱化，再缓慢加入一定质量的一氯乙酸钠，继续搅拌一定时间后，自来水辅助快速冷却至室温，冰醋酸调pH至7.0，加入同体积无水乙醇，4℃静置12 h，4 500 r/min离心10 min，将沉淀用蒸馏水溶解并定容至500 mL，得羧甲基化茶籽多糖(COSPC)溶液。

茶籽多糖溶液质量浓度=茶籽多糖质量(mg)/500 mL

1.2.3 羧甲基化茶籽多糖取代度的测定

在最佳羧甲基化修饰条件下按1.2.2操作，离心后的沉淀真空冷冻干燥即为羧甲基化茶籽多糖。按文献[21]操作，测定羧甲基化茶籽多糖取代度。

1.2.4 茶籽多糖羧甲基化修饰前后对油脂的抗氧化作用

以30%乙醇为溶剂，配制质量浓度分别为5、10 mg/mL的羧甲基化茶籽多糖溶液和茶籽多糖溶液。采用Schaal烘箱法研究茶籽多糖羧甲基化修饰前后对食用油脂的抗氧化作用。准确称取50.0 g食用调和油8份，分别置于250 mL锥形瓶中，其中2份分别加入1 mL 5 mg/mL的茶籽多糖溶液和羧甲基化茶籽多糖溶液，使多糖添加量为0.01%；2份分别加入1 mL 10 mg/mL的茶籽多糖溶液和羧甲基化茶籽多糖溶液，使多糖添加量为0.02%；以不添加任何物质的食用调和油为空白对照；以添加1 mL 30%乙醇溶液的食用调和油为阴性对照；以分别加入1 mL 10 mg/mL柠檬酸的30%乙醇溶液、1 mL 10 mg/mL特丁基对苯二酚的30%乙醇溶液的食用调和油为阳性对照。同时做平行试样。将全部样品混合均匀后置于(65±1)℃恒温干燥箱中强化贮存，定时振荡混匀并改变样品在干燥箱中的相对位置，每隔2 d取样，按照GB/T 5009.37—2003测定过氧化值。研究茶籽多糖羧甲基化修饰前后对食用油脂的抗氧化作用，并与10 mg/mL的柠檬酸和特丁基对苯二酚溶液比较对食用油脂的抗氧化效果。

2 结果与分析

2.1 单因素试验

图1 乙醇体积分数对羧甲基化茶籽多糖对 的比清除率的影响

图2 茶籽多糖与NaOH、一氯乙酸钠的质量比对羧甲基化 茶籽多糖对的比清除率的影响

图3 反应温度对羧甲基化茶籽多糖对的 比清除率的影响

图4 反应时间对羧甲基化茶籽多糖对的 比清除率的影响

2.2 正交试验

表1 正交试验设计及结果

2.3 茶籽多糖羧甲基化修饰前后对油脂的抗氧化作用(见图5)

图5 茶籽多糖羧甲基化修饰前后 对油脂的抗氧化作用

3 结 论