2016—2019 年云南省临沧市中缅边境牛口蹄疫血清学检测

杨静竹，苗海生，陈云明，蔡高萍，谭 东，李亚琴，黄晓雨，李 乐，寇美玲，廖德芳，李华春

（1.临沧市动物疫病预防控制中心，云南临沧 677000；2.云南省畜牧兽医科学院，云南昆明 650224）

口蹄疫（foot-and-mouth disease，FMD）是由口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus，FMDV）引起的，主要侵害猪、牛、羊等偶蹄动物的一种高度接触性传染病[1]。世界动物卫生组织（OIE）将其列为须通报动物疫病，我国将其列为一类动物疫病。FMDV 有7 个血清型，型间无交叉免疫保护。在东南亚国家，流行的FMDV 毒株主要有O 型的SEA/Mya-98、Cathay、ME-SA/PanAsia、ME-SA/Ind-2001d 毒株以及A 型的ASIA/Sea-97 毒株。其中ME-SA/Ind-2001d 毒株2015 年首次传入老挝，随后在越南、缅甸流行，2017 年初传入我国新疆喀什地区[2-3]。Asia-1型流行的报告极少，近15年来，只有2017 年缅甸报道过G-VIII 毒株[4]。与我国接壤或邻近的东南亚国家A、O 和Asia-1 型FMD 常年流行，动物隐性带毒情况较普遍。从分子流行病学分析结果来看，近年引起我国FMD 疫情的流行毒株均来源于东南亚国家，因此东南亚地区已成为传入我国FMDV 的主要疫源地[5-7]。

临沧市地处云南省西南部，辖1 个区7 个县，其中镇康、耿马和沧源3 个县与缅甸山水相连，国境线长290.8 km（镇康县段96.36 km、耿马县段47.35 km 与缅甸禅邦第一特区果敢县接壤，沧源县段147.09 km 与缅甸佤邦第二特区接壤），有镇康南伞、耿马孟定清水河以及沧源永和3 个国家级口岸和数量众多的边境通道，边民互通频繁，畜牧业生产长期处于频繁互市与混牧状态。因东南亚、南亚大多数国家存在FMD，国与国之间的正常活畜流动和畜产品正常贸易被严格禁止。但因国内牛羊肉供需矛盾突出，价格逐年上涨，使得边民跨境非法贩运活畜入境行为频繁发生。加之，缅北地区战事时有发生，大量牲畜随边民不断涌入临沧境内，造成大量活畜非法频繁跨境流动，给临沧市动物疫病防控带来极大挑战。为了解临沧市边境地区外来牛FMD 血清学背景，对2016—2019 年采自镇康、耿马和沧源3 个县的入境牛血清1 688 份进行了FMDV 血清抗体检测，并对检测结果进行统计分析，以评估当地入境牛FMDV 血清抗体水平和传入的潜在风险。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 血清采集 按照随机抽样原则，在云南省临沧市镇康、耿马和沧源3 个县中缅边境采样。每个县先按采样点所属地理位置划定采样区域，再将划定区域内的养殖场、活畜交易市场和散养户分别进行编号，并随机抽取养殖场2～3 个、活畜交易市场1 个、散养户40～60 个。样品采集由县级动物疫病预防控制中心负责实施，场群内按饲养牛只的耳标号，随机选取采样个体。2016—2019年，3 个县共在168 个采样点，累计采集牛血样品1 688 份（表1）。将采集的血液样品分离血清，56 ℃灭活30 min，-20 ℃保存备用。

表1 2016—2019 年检测点血液样品的采样数量及分布

1.1.2 主要试剂 FMDV O、A、Asia-1 型C-ELISA血清抗体检测试剂盒，参照Mackay等[8]、Paiba等[9]的方法，由云南省畜牧兽医科学院国家口蹄疫专业实验室（昆明）自行研制[10]；FMDV 非结构蛋白抗体单抗阻断ELISA 试剂盒，购自北京世纪元亨动物防疫技术有限公司和深圳真瑞生物技术有限公司；FMDV O、A、Asia-1 型标准阳性、阴性血清，由云南省畜牧兽医科学院国家口蹄疫专业实验室（昆明）提供。

1.2 检测方法

1.2.1 血清抗体检测 采用 O、A、Asia-1 型C-ELISA 抗体检测试剂盒进行抗体检测，各型试剂盒的操作方法相同，均参照说明书进行。结果判定：当阳性对照孔平均OD 值≥0.8，阴性对照孔平均OD 值≤0.3 时，试验结果成立；抑制率≥40%判定为阳性，抑制率＜40%判定为阴性。

1.2.2 非结构蛋白抗体检测 采用FMDV 非结构蛋白抗体单抗阻断ELISA 试剂盒，按照试剂盒说明书操作。结果判定：阻断率=（阴性对照OD450平均值-样品孔OD450平均值）/阴性对照OD450平均值×100%。当阳性对照OD450平均值≥55%、阴性对照OD450平均值-阳性对照OD450平均值≥0.6时，试验结果成立；被检样品阻断率≥40%判定为阳性，介于25%～40%判定为可疑，＜40%判定为阴性。

1.3 检测结果分析

从血清型分布、时间分布、区域分布和群间分布等方面，应用SPSS软件进行抗体阳性率统计分析。

2 结果与分析

2.1 血清型分布

血清型统计数据（表2）显示：1 688 份血清样品中，共检出O 型抗体阳性675 份，抗体阳性率为39.99%；A 型抗体阳性662 份，抗体阳性率为39.22%；Asia-1 型抗体阳性487 份，抗体阳性率为28.85%。非结构蛋白抗体阳性345 份，抗体阳性率为20.44%。

2.2 区域分布

区域统计结果（表3）显示：沧源县采集血清样品558 份，O、A、Asia-1 型抗体阳性率分别为49.28%、56.27%、43.19%，非结构蛋白抗体阳性率为24.91%；耿马县采集血清样品560 份，O、A、Asia-1 型抗体阳性率分别为48.39%、44.64%、32.32%，非结构蛋白抗体阳性率为17.68；镇康县采集血清样品570 份，O、A、Asia-1 型抗体阳性率分别为22.63%、17.19%、11.40%，非结构蛋白抗体阳性率为18.77%。总体来看，沧源县和耿马县抗体阳性率相当，但镇康县显著偏低（P＜0.01）。

2.3 时间分布

时间分布统计结果（表4）显示：2016—2019年3 个边境县的O、A 型抗体阳性率总体呈显著上升趋势（P＜0.05），均由2016 年的15%左右上升到2019 年的40%以上；Asia-1 型抗体阳性率呈下降趋势，由2016 年的33%左右下降到2019 年的25%左右；非结构蛋白抗体阳性率呈现波浪状变化趋势，2017 年降至7.56%，2018 年又上升至37.05%，2019 年再次下降到17.00%。

表2 2016-2019 年中缅边境牛FMD 血清抗体检测结果统计

表3 3 个边境县2016—2019 年牛FMD 血清抗体阳性率统计

2.4 群间分布

2.4.1 境内牛和入境牛 累计检测的1 688 份牛血清样品包括入境牛血清样品1 238 份、境内牛450 份。统计结果（表5）显示：境内牛O、A、Asia-1 型抗体阳性率分别为44.89%、43.11%、33.33%，入境牛分别为38.21%、37.80%、27.22%，境内牛显著高于入境牛（P＜0.05）；境内牛非结构蛋白抗体阳性率为7.56%，入境牛为25.12%，差异极显著（P＜0.01）。

表4 2016—2019 年3 个边境县入境牛FMD 血清抗体阳性率统计

2.4.2 黄牛与水牛 从入境牛的种属来看，水牛O、A、Asia-1 型抗体阳性率分别为63.08%、50.00%、29.20%，非结构蛋白抗体阳性率为26.92%；黄牛O、A、Asia-1 型抗体阳性率分别为57.78%、35.93%、23.70%，非结构蛋白抗体阳性率为12.22%。水牛O、A 型抗体阳性率以及非结构蛋白抗体阳性率均高于黄牛（表6）。

3 讨论

从血清学监测结果可以看出，2016—2019 年云南省临沧市中缅边境牛FMD 免疫水平不高，且存在一定的病毒感染，O、A、Asia-1 型和非结构蛋白抗体平均阳性率介于20%～40%。东南亚国家大多经济不发达，部分国家并未实施强制免疫策略，导致FMD 免疫率低，而病毒感染率偏高。较高的非结构蛋白抗体水平，说明近期牛感染过病毒或隐性带毒。镇康县和沧源县2018 年入境牛非结构蛋白抗体分别高达46.70%和40.00%，隐性带毒风险极高，因此如何控制FMD 跨境传播，是今后边境地区FMD 防控面临的难题。

检测发现，边境地区牛群中存在一定的Asia-1型抗体阳性（28.85%），而多数东南亚国家多年来未报告发现Asia-1 型疫情。这其中除因免疫引起的抗体阳性外，还有两种可能：一是不同血清型的交叉免疫导致cELISA 检测出现假阳性；二是Asia-1型FMDV在东南亚部分地区仍呈隐性流行。因此我国要警惕东南亚地区Asia-1 型的传入。

2017 年O、A 型抗体阳性率比2016 年均显著上升，但非结构蛋白抗体阳性率显著下降，说明云南省自2017 年获批在云南边境实施跨境动物疫病区域化管理试点工作以来，通过建立FMD 控制区，指定入境通道，控制偶蹄活畜向控制区外流动等措施，有效阻断了FMD 的传播，降低了传入风险。但2018 年非结构蛋白抗体阳性率明显上升，这可能与国内肉价上涨以及2018 年境外口蹄疫流行加重、地方武装战事等，导致大量活牛非法跨境输入有关。

与入境牛相比，境内牛O、A、Asia-1 型抗体阳性率较高，非结构蛋白抗体阳性率较低，说明境内牛口蹄疫免疫效果略优于入境牛，但不管是境内牛还是境外牛，总体血清抗体阳性率偏低，疫情发生风险较高。当然，Asia-1 型抗体阳性率偏低也与我国2017 年Asia-1 型疫苗退出强制免疫计划有关。检测发现，水牛的非结构蛋白抗体阳性率高于黄牛，说明水牛携带FMDV 的风险偏高，其原因有待探讨。

表5 境内牛和入境牛FMD 血清抗体检测结果统计

表6 入境水牛和黄牛口蹄疫血清抗体检测结果统计

本次检测仅采集入境牛样本1 238 份、境内牛450 份，样本数量偏少，也不排除采样时，部分散养户提供信息不准确等因素的存在，这些都会导致检测分析结果有偏倚。下一步可考虑增加境内牛的样本数量，采集有详细背景信息的牛群。

4 结论

检测发现，云南省临沧市中缅边境地区入境牛FMD 免疫水平较低，隐性带毒率较高，存在较高的疫情传入和发生风险。提议在边境地区连续系统开展FMD 病原学和血清学监测，加强免疫，提高免疫密度和抗体水平，同时严格监控牛的非法跨境移动，警惕FMD 传入。