2017—2019 年江苏省兽医系统实验室检测能力比对

（江苏省动物疫病预防控制中心，江苏南京 210036）

为全面了解江苏省兽医系统实验室检测能力和动物疫情监测预警水平，促进各级兽医实验室重视实验室检测工作，按照农业农村部统一要求，2017—2019 年，江苏省动物疫病预防控制中心连续3 年组织全省兽医系统实验室开展检测能力比对工作。各实验室以检测能力比对为契机，更新仪器设备配置，完善质量管理体系，加强理论培训与操作演练，动物疫病检测能力和实验室管理水平得到了较大提升，检测能力比对工作达到了预期效果。

1 比对项目设计

2017—2019 年根据动物疫病防控工作需要设置检测能力比对项目。鉴于市级和县级实验室检测能力不同，每年比对分别设置市级比对项目和县级比对项目两大类，每个实验室每年参加3～4 个比对项目（表1）。

2 材料和方法

2.1 比对方法、标准和试剂

针对不同的比对项目，采用国家标准或国家参考实验室推荐的方法进行比对。所用试剂全部由参加比对的实验室自行准备（表2）。

2.2 比对样品

由江苏省动物疫病预防控制中心完成所有比对项目样品的制备、标定、分装、编号和保存。每个比对项目设置3～5 份样品。定性样品设置了阳性和阴性样品，定量样品设置了不同的滴度，有些项目还设置了重复。所有样品随机分发，分发时将样品用装有冰袋的冷藏箱运送。

2.3 结果评判标准

2.3.1 高致病性猪蓝耳病病毒检测、小反刍兽疫抗体检测、小反刍兽疫病毒检测、猪伪狂犬病gE抗体检测、非洲猪瘟病毒检测、猪伪狂犬病gB 抗体检测项目评判标准 样品检测值与参考值完全一致判为正确，即阳性样品的检测值应为“阳性”，阴性样品的检测值应为“阴性”，否则判为错误。

表1 2017—2019 年江苏省兽医系统实验室检测能力比对项目

表2 2017—2019 年江苏省兽医系统实验室检测能力比对项目的方法和标准

2.3.2 布鲁氏菌抗体检测、H5 亚型高致病性禽流感（Re-8 株）抗体检测、O 型口蹄疫抗体检测、新城疫抗体检测项目评判标准 检测值与参考值的偏差不超过1 个滴度，判为正确，否则判为错误。

2.3.3 细菌分离与鉴定项目评判标准 检测值与参考值一致判为正确，否则判为错误，乙型副伤寒沙门氏菌的鉴定结果还可为“沙门氏菌”或“副伤寒沙门氏菌”，金黄色葡萄球菌的鉴定结果还可为“葡萄球菌”，铜绿假单胞菌的鉴定结果还可为“绿脓杆菌”，“枯草芽孢杆菌”的鉴定结果还可为“芽孢杆菌”或“枯草杆菌”，大肠埃希氏菌的鉴定结果还可为“埃希氏大肠杆菌”或“大肠杆菌”。

3 结果

2017—2019 年共开展了11 个项目的比对，不同年度、不同比对项目不同实验室类别的结果差异较大（表3）。

3.1 年度检测能力比对

按照不同年度进行统计，3 个年度检测能力比对结果见表4。实验室正确率和样品正确率逐年提高，分别从2017 年的38.64%和89.08%提高到2019 年的93.51%和99.32%。

3.2 2017—2019 年均参加比对的实验室正确率

对3 个年度均参加比对的实验室正确率进行统计，1 个年度出现错误、2 个年度出现错误、3个年度均出现错误和3 个年度均正确的实验室占比情况见图1。3 个年度中，1 个年度比对结果出现错误的实验室最多，占45.45%；3 个年度均出现错误的最少，占3.90%。

表3 2017—2019 年江苏省兽医系统实验室检测能力比对结果

表4 2017—2019 年各年度检测能力比对结果

图1 3 个年度均参加比对实验室正确率分布

3.3 检测能力比对均正确实验室分布

对3 个年度比对结果均正确的实验室按照不同市进行统计（图2）。2017—2019 年，参加检测能力比对且比对结果均正确的实验室22 个，市级实验室6 个，分别为南京、常州、苏州、盐城、镇江和宿迁；县级实验室16 个，分属南京、常州、苏州、南通、盐城、镇江和宿迁。其中，南京、常州、苏州、镇江和宿迁5 个市级实验室均正确，辖区内的县级实验室也有近3 年比对均正确的，只是数量不等；相反，无锡、徐州、连云港、淮安、扬州、泰州等6 个市的市级和县级实验室都没有近3 年全部正确的。

图2 3 个年度检测能力比对均正确实验室分布

4 分析与讨论

4.1 比对项目设置

各年度均根据当前动物疫病防控实际，结合江苏省中长期动物疫病防治规划（2012—2020 年），设置比对项目。以常见动物疫病检测项目为主体，分别设置了高致病性猪蓝耳病病毒检测、小反刍兽疫病毒检测、H5 亚型高致病性禽流感（Re-8 株）抗体检测、新城疫抗体检测、O 型口蹄疫抗体检测、小反刍兽疫抗体检测、布鲁氏菌病抗体检测、细菌分离与鉴定项目；2018 年兼顾动物疫病净化工作，设置了猪伪狂犬病gE 抗体检测、猪伪狂犬病gB 抗体检测项目；2019 年考虑到非洲猪瘟疫情流行现状，设置了非洲猪瘟病毒检测项目，使检测能力比对工作紧贴疫病防控实际，紧跟疫情变化状况，使各级兽医实验室真正在动物疫病防控中发挥应有的作用。在比对项目设置过程中，基于对病原微生物生物安全、样品质量和相关检测试剂的可选择性等方面的考虑，目前兽医系统实验室比对项目设置遇到了一些问题。建议各国家参考实验室和有关单位加快检测用标准物质和试剂研究，为检测能力比对工作提供便利，为疫病监测工作规范化、标准化强心助力，为科学预警、科学防控提供技术支持[1]。

4.2 不同检测方法比对

将比对中涉及的各种检测方法进行分类统计，H5 亚型高致病性禽流感（Re-8 株）抗体检测、新城疫抗体检测归为HI 类，O 型口蹄疫抗体检测、小反刍兽疫抗体检测、猪伪狂犬病gB 抗体检测、猪伪狂犬病gE 抗体检测归为ELISA 类，非洲猪瘟病毒检测、高致病性猪蓝耳病病毒检测、小反刍兽疫病毒检测归为荧光PCR 类，布鲁氏菌病抗体检测归为试管凝集类，细菌分离与鉴定单独列为一类。经计算，5 类方法的样品正确率分别为：94.78%、97.39%、99.43%、74.32%和95.08%，试管凝集方法的样品正确率最低，为74.32%，其他4 类均高于90%，说明定量的试管凝集方法，其操作难度和要求远大于定性的ELISA、荧光PCR、细菌分离与鉴定以及定量的HI 方法[2-4]，试管凝集方法需要操作人员主观判定结果，受操作熟练程度影响较大。荧光PCR 方法的样品正确率最高，为99.43%，可能与该类比对项目主要是市级实验室参加，且市级的检测能力水平较高有关。

4.3 市级和县级实验室比对

各年度数据中，无论是实验室正确率还是样品正确率，市级实验室都高于同期县级实验室水平。不同年度中，市级和县级实验室的差距在逐渐缩小。2017 年，市级和县级实验室正确率均低于50%，处于较低水平；2018 年市级正确率大幅提升，高于90%，县级略高于50%，仍处于较低水平；2019 年市级和县级均继续提升，县级提升幅度显著加大，两者均达到近3 年最好水平，市级实验室正确率达到峰值100%。样品正确率方面，县级2017 年数据低于90%，其余均高于90%，且逐年上升；市级也呈现逐年上升的趋势，2019 年达到峰值100%。结果表明：在检测能力比对工作中，市级的整体成绩好于县级，但差距正在缩小。

4.4 不同年度比对

从各年度比对结果来看，各级兽医实验室检测能力逐年提升，反映出各级兽医主管部门对兽医系统实验室检测能力比对工作的重视，实验室的建设与管理得到了进一步加强，检测能力和动物疫病监测预警水平逐年提高。

4.5 参加比对实验室数量

2017 年，有13 个市级和75 个县级实验室参加比对。2018 年因1 个市级、3 个县级实验室搬迁，参加比对的实验室数量为12 个市级和72 个县级。2019 年新增2 个县级实验室拆迁，5 个县级实验室功能调整，参加比对的实验室数量再次减少，为12 个市级和65 个县级。由于拆迁、功能调整等不利因素的影响，参加检测能力比对的实验室数量逐年减少，这提示要进一步加强兽医系统实验室管理，尽可能采取各种措施保证实验室正常有序运转。此外，2019 年有21 个具备分子生物学检测能力的县级实验室首次参加非洲猪瘟检测能力比对，实验室正确率95.24%，样品正确率98.10%，取得了较好的成绩。但仍有44 个县级实验室不能正常开展分子生物学检测，需要加强相关仪器设备配置、人员培训等工作，进一步提升县级分子生物学检测能力。

4.6 3 个年度均参加比对实验室正确率及分布

3 个年度均参加比对实验室正确率结果显示，3 个年度比对结果均正确的实验室共22 个，占28.57%，说明这些实验室的质量管理长效机制比较完善，而检测值出现错误的实验室应提高质量管理，注重全面提升。

3 个年度检测能力比对均正确实验室分布情况显示，各市检测能力稳定性差异较大，这提示应加强对检测能力稳定性较差市的监督与指导，督促其持续增强实验室检测能力建设，切实提高检测能力水平。同时，市级与所辖县级实验室检测能力有一定的相关性，市级对检测能力比对工作的重视程度与全市的比对结果优劣密切相关，市级结果好，县级结果也相对较好。这提示在加强对市级实验室的检测技术和管理能力培训的同时，应督促并通过市级将能力提升要求向县级延伸，更好地发挥市级的引领和指导作用。