HPLC法快速测定两种液体食品中的山梨酸

赵 欧

(贵州师范大学化学与材料科学学院，贵州 贵阳 550001)

很多的食品中会添加食品防腐剂[1]，常添加的食品防腐剂有山梨酸和苯甲酸以及他们的盐类等[2]，而在众多的防腐剂中山梨酸是安全性比较高[3]，但在食品卫生标准中都会规定他们的用量[4]，部分的食品中添加的防腐剂量会超过规定量[5]。本实验采用的是高效液相色谱法[6]测定酱油、果汁中山酸梨酸含量，各类食品的前处理方法虽有新的规定，但是还不够简便[7]本实验参考有关资料[8-9]，操作方法简单，便于快速的检验样品中山梨酸的含量。

1 材料与试剂

1.1 仪 器

LC2000D高效液相色谱仪，天美科学仪器有限公司；T2000P色谱工作站；CQ-100B-ST型超声波清洗机，上海跃进医用光学机械厂；SHB-B95型循环水式多用真空泵，郑州长城科工贸易有限公司；pH酸度计，福州化志科学仪器有限公司；HZY-A200电子天平，福州化志科学仪器有限公司；FD.JH.JS型玻璃砂芯过滤装置，飞达公司。

1.2 试 剂

品防腐剂山梨酸标准物质，中检所BW3507 ；乙酸铵(分析纯)，天津市化学试剂一厂；氨水，烟台三河化学试剂有限公司；甲醇(色谱纯)，天津市科密欧化学试剂；酱油(20190709)，产地广东省佛山市高明区沧州江工资园东园；瑞丽江牌芒果汁，产地昆明瑞丽江食品饮料有限公司；1.54 g/L乙酸铵溶液：准确称取0.3850 g乙酸铵用蒸馏水溶解，最后定容至250 mL的容量瓶中，经0.45 μm滤膜过滤，备用。

2 方法与实验

2.1 色谱分析方法

色谱柱：LVNA-5U-C18(2)-100A色谱柱(150 mm×4.6 mm)；流动相：甲醇+1.54 g/L乙酸铵(5+95)；柱温：25 ℃；流速：1.5 mL/min；检测波长：UV-230 nm；进样量：10 μL。山梨酸分离较好，分离度大于1.5，拖尾因子基本符合要求，结果见图1。

图1 标准品、酱油和果汁中山梨酸的分离色谱图

2.2 对照品溶液的制备

4.146 g/mL山梨酸储备液：准确称取0.2073 g山梨酸倒入小烧杯中，加甲醇溶解，移入50 mL容量瓶中，定容至刻度，摇匀，放入样品瓶中备用。

2.3 供试品溶液的制备

称取酱油、瑞丽江牌芒果汁1.00 g分别置于10 mL比色管中，加水至9 mL，用1+10的氨水调pH至7.0，定容至10 mL刻度，经0.45 μm滤膜离心过滤后直接进样。

2.4 方法学考察

2.4.1 线性关系考察

分别配置不同浓度的山梨酸标准溶液，然后经过0.45 μm滤膜过滤，分别进样10 μL，在上述色谱条件下进行HPLC分离测定。以山梨酸各标准的浓度为横坐标，所得的峰面积为纵坐标绘制标准曲线，通过回归计算得线性回归方程为Y=136.49x-118.00，R2=0.9990。标准曲线图见图2。

图2 山梨酸标准工作曲线图

2.4.2 精密度实验

准确吸取果汁同一号10 μL，按照“2.1色谱测定方法”下测定。准确吸取酱油的同一号10 μL，按照“2.1色谱测定方法”下测定。测得两组峰面积的RDS分别为0.45%、0.87%，表明方法的精密度良好。

2.4.3 重复性实验

分别取果汁和酱油按“2.3 供试品溶液的制备”下要求平行制备5份供试液，分别进样测定， 测得峰面积的RSD为0.98%、1.06%，表明方法重复性良好。

2.4.4 稳定性实验

精确吸取果汁和酱油同一号供试液样品，分别于0、2、4、8、16 h测定面积并记录，通过计算RSD分别为1.04%和0.92%。结果表明两种样品在16小时内稳定性良好。

2.4.5 样品测定结果

以高效液相色谱仪作为检测仪器，按照“2.1色谱测定方法”下测定供试品溶液各组样品进样10 μL，测其峰面积并记录(见图1)，平均含量计算结果：果汁中含山梨酸量为0.07077 g/kg(表1)，酱油中含山梨酸量为0.2894 g/kg(表2)。

表1 果汁中山梨酸的测定(n=5)

表2 酱油中山梨酸的测定(n=5)

2.4.6 加样回收实验

表3 加样回收实验结果(n=3)

果汁与酱油样品中山梨酸的提取方法是一致的，请参见“2.3 供试品溶液的制备”下的制备方法。 因此加样回收以酱油

样品为例，称取酱油50.00 g左右置于1.00 L容量瓶中，加入适量的标准品，加水至900 mL，用1+10的氨水调pH至7.0，定容至1.00 L刻度，经0.45 μm滤膜离心过滤后直接进样，测定含量、计算回收率。结果见表3，结果表明本方法的回收率良好。

3 结 论

该方法在3.445～27.560 μg的浓度范围内有良好的线性关系(r=0.9990)，回收率也较好。经方法学验证表明，HPLC法测定酱油与果汁中的山梨酸操作简便、灵敏度高、进样量小、分析速度快，可作为山梨酸的快速检测方法。中国《食品添加剂使用卫生标准》[10]规定酱油中的山梨酸含量不得超过1.0 g/kg，果汁(果味)型饮料中的山梨酸含量不得超过0.5 g/kg。经测定该品牌酱油中山梨酸的含量为0.2894 g/kg，瑞丽江芒果果汁中山梨酸的含量为0.07077 g/kg，两种样品中的山梨酸含量均符合国家标准。