番石榴果、叶水提液体外抑菌效果的比较研究

赵天野

（吉林省农安县万顺乡畜牧兽医站，吉林农安 130200）

番石榴（Psidium Guajave）属于桃金娘科植物，为绿色灌木或者小乔木，俗称为鸡屎果，主要分布于热带和亚热带地区。我国南方以云南、广西、四川、海南等地分布最为广泛[1]。番石榴含有大量的槲皮素等黄酮类物质、挥发油、鞣质、齐墩果酸、熊果酸绿原酸、咖啡酸、山柰酚、铁乌立克酸和山柰酚苷[2]。有报道称番石榴叶精油中所含有的挥发性成分有镇痛、镇静、抗菌等功能[3]。现代医学研究发现，番石榴叶对于抵御病毒、延缓氧化、抵抗细菌、降低人体血糖有一定作用[4]。番石榴叶还具有令人愉悦、消除炎症、止血、解决口渴、驱散蚊虫和止痒止泻等药理作用[5]。本试验主要对番石榴果、叶的抑菌效果进行比较研究。

1 材料与方法

1.1 药品

1.1.1 药材

番石榴果实和叶，购自吉林省长春市农安县国医大药房，产地四川。

1.1.2 培养基

蛋白胨，北京奥博星生物技术有限责任公司；牛肉浸粉，北京奥博星生物技术有限责任公司；酵母浸粉，河南森汉生物科技有限责任公司；琼脂粉，天津市光复细化工研究所；胰化蛋白胨，天津市光复细化工研究所；氢氧化钠，沧州云港化工有限公司；氯化钠，东莞市乔科化学有限公司；蒸馏水。

1.1.3 实验菌种

大肠杆菌菌种、金黄色葡萄球菌菌种，农安县动物疫病防控中心。

1.2 仪器

DHP-9052电热恒温培养箱，江苏天翎；DDHZ-300空气式恒温振荡器，上海和恒；DZKW-S-4数显恒温水浴锅，上海一凯；BBS-DDC-A超净工作台，苏州三星净化；YX600W压力蒸汽灭菌消毒锅，上海三伸；DL-1电子万用炉，富兴电子；LG-08A万能高速摇摆粉碎机，上海新诺仪器；DHG-9240A台式恒温电热鼓风干燥箱，上海仪器仪表厂；FA1204B电子天平，上海天美天平仪器；打孔器等。

1.3 试验方法

1.3.1 煎煮法提取番石榴果、叶

用粉碎机将番石榴果实和叶粉碎，各取40 g置于500 mL烧杯中，加入400 mL蒸馏水，于55 ℃水浴中加热2 h后用纱布过滤，残渣中再分别加入100 mL蒸馏水置于55 ℃水浴中加热1 h，再次过滤，合并滤液，分别得到果实和叶水提取液，并浓缩至20 mL，得到提取原液，放于冰箱备用[6]。

1.3.2 药敏片的制备

用打孔器将滤纸片打成直经为6 mm的小圆片若干，放入烧杯中并用多层报纸将瓶口包扎紧密。160 ℃条件下干热灭菌1.5 h，在60 ℃条件下烘干备用。取上述浓缩后的提取液稀释2倍、4倍、8倍成1.00、0.50、0.25 g/mL，各取4种浓度的提取液2 mL置于平皿中，把制备好的滤纸片在各浓度提取液中浸泡8 h，之后取出放置在培养皿中，在恒温箱37 ℃条件下烘干24 h，并做好标记，置于冰箱中保存备用[7]。

1.3.3 大肠杆菌的接种培养

（1）制备LB液体培养基：称取胰化蛋白胨10.0 g、酵母浸粉5.0 g、NaCl 110.0 g于1 L的大烧杯中，加入800 mL蒸馏水，用4 mol/L NaOH和0.1% HCl调节pH为7.0，加水定容至1 000 mL，放于高温蒸汽灭菌锅中设置温度121 ℃，灭菌20 min，于4 ℃保存备用[8]。

（2）接种培养：将大肠杆菌菌种用接种环在酒精灯旁接种于LB液体培养基中，在温度37 ℃、转速160 r/min条件下进行培养12 h[9]，浓度约为5×107cfu/mL的菌量。

1.3.4 金黄色葡萄球菌的接种培养

（1）培养基制备：取15 g琼脂置于1 000 mL烧杯中，加入蒸馏水至1 000 mL并加热煮沸至琼脂完全溶解，将5 g蛋白胨加入琼脂中，并用玻璃棒搅拌至完全溶解，再加入1 g牛肉浸粉和2 g酵母浸粉，搅拌至完全溶解，用10%的NaOH调pH值至7～8，分装，经121 ℃高压灭菌 15 min[10]，备用。

（2）接种培养：在无菌操作台上，在培养皿底部做好记号后，用接种枪取大肠杆菌培养液1 mL，涂于营养琼脂培养皿上，将三角架涂菌器旋转一周，使菌液均匀分布在培养皿上。用同样的方法取金黄色葡萄球菌培养液，涂于营养琼脂培养基上[11]。

1.3.5 贴药敏片

用镊子将不同浓度果实和叶的药敏片放置在已接种细菌的营养琼脂培养皿表面的4个区域，在4 ℃条件下预扩散4 h，于37 ℃下培养4 h[12]。

1.3.6 测量抑菌圈大小

取出培养皿，用游标卡尺在抑菌圈的不同方向测量2次，得到2组数据，计算平均值得抑菌圈直径（D）。抑菌效果的判定标准：D＞19 mm为高度敏感；13 mm＜D≤19 mm为中度敏感；8 mm＜D≤13 mm为低度敏感；D＜8 mm为不敏感[13]。

2 结果与分析

2.1 番石榴果实和叶水提液的抑菌效果

由表1可以看出，番石榴叶的水提液及其2倍稀释液对大肠杆菌的抑菌圈直径分别为16.03 mm、14.06 mm，对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径分别为15.04 mm、13.28 mm，表示番石榴叶提取液有比较强的抑菌效果，4倍液叶对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径分别是12.10 mm、9.06 mm，表明抑菌效果较弱。而番石榴果实的提取液对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌抑菌圈分别为12.54 mm、12.02 mm，表明抑菌效果较弱，其余浓度时抑菌圈直径都小于8 mm，表明几乎没有抑菌效果。

表1 番石榴果实和叶水提液的抑菌圈直径

2.2 番石榴果实和叶水提物对细菌的敏感度

由表2可以看出，大肠杆菌及金黄色葡萄球菌对番石榴果实提取原液为低强度敏感；对2倍液不敏感，即耐药；4倍液和8倍液没有抑菌效果。大肠杆菌及金黄色葡萄球菌对番石榴叶提取原液和2倍液为中度敏感，对4倍液为低度敏感，而8倍液没有抑菌效果。根据实验数据分析，番石榴叶的水提液抑菌效果更明显，浓度越高抑菌效果越好。

表2 番石榴果实和叶水提物对细菌的敏感度

黄艳等[14]采取不同溶剂对番石榴叶进行提取，不同提取物对猪大肠杆菌的抑菌效果差异不明显,石油醚提取物对猪金黄色葡萄球菌的抑菌效果较好（0.195 mg/mL）。周浓等[15]采用超声波辅助技术提取番石榴果实中多酚，并测其抑菌活性，结果显示，番石榴多酚对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌及金黄色葡萄球菌具有抑制作用，最低抑菌浓度（MIC）分别为3.00 mg/mL、1.50 mg/mL、1.50 mg/mL。

3 结论

番石榴叶水提取液有较好的抑菌作用，水提取液的浓度越高，抑菌效果越显著；且在相同浓度条件下，叶水提取液的抑菌效果较强于果实水提液。对番石榴叶和果实水提取液进行的体外抑菌效果研究中，存在一些欠缺，如受试菌较少，今后将扩大抑菌菌种的范围，同时要进一步对其化学成分和影响因素进行研究，为新药开发与鉴定提供依据。