乳粉中沙门氏菌检测能力验证结果分析

孙春玲 ，王亚慧 ，王东玉 ，朱 静 ， 郝苗苗

（1.锡林郭勒职业学院，内蒙古锡林浩特 026000；2.锡林郭勒食品药品检验检测和风险评估中心，内蒙古锡林浩特 026000）

0 引言

沙门氏菌是一种常见的食源性致病微生物，误食会导致人体出现伤寒、急性肠胃炎、菌血症和败血症等症状[1]。由于其广泛存在于自然界中，是引起的细菌性食物中毒的头号细菌[2]，因此沙门氏菌是食品微生物检测中常检项。在日常检测中极少检出沙门氏菌，为了保证检测结果的准确性，检测机构需要进行实验室质量控制。参加能力验证是实验室质量控制的重要方法之一，通过能力验证，可以检验实验室试剂和耗材的品质，能够验证检测人员的检测能力，也可以识别实验室存在的问题并启动改进措施等[3]。为提高检测室检测能力，检测中心参加了内蒙古自治区组织的乳粉样品中沙门氏菌能力验证，样品编号为SLM9-19153，获得了满意的结果。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样品来源

乳粉中沙门氏菌检出能力验证样品，内蒙古自治区食品检验检测中心提供，编号为SLM9-19153。

1.1.2 试剂和仪器

（1） 试剂。缓冲蛋白胨水（BPW）、亚硫酸铋琼脂（BS）、亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）、四硫磺酸钠煌绿增菌液基础（TTB）、HE琼脂、木糖懒氨酸脱氧酸盐琼脂（XLD）、沙门氏菌干制生化鉴定试剂盒、沙门氏菌显色培养基、0.1%煌绿溶液、碘液等，北京陆桥技术股份有限公司提供；沙门氏菌属诊断血清，宁波天润生物药业有限公司提供。

（2） 仪器。BagMixer 400CC型均质器、BSC-1360ⅡA2型生物安全柜、IGS400型微生物培养箱、MLS-3751L-PC型压力蒸汽灭菌器等。

1.2 检测步骤

1.2.1 样品的制备

样品的制备参照样品作业指导书，具体做法如下：检测前先将未开封的能力验证样品置于室温条件下；待样品恢复至室温后，无菌开启铝塑盖和胶塞，将西林瓶中样品完全溶解于25 mL无菌生理盐水中。

1.2.2 检测过程

沙门氏菌检验参照《GB 4789.4-2016食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验》[4]方法进行。

2 结果与分析

2.1 沙门显色培养基、XLD、HE和BS平皿上菌落形态

不同培养基上菌落形态见表1。

由表1可知，不同培养基上菌落形态不尽相同，同一种培养基上从TTB或SC转接后形成的菌落也不尽相同。根据GB 4789.4—2016及沙门显色培养基说明书可以初步判断，沙门显色培养基上呈紫色的菌落为疑似沙门氏菌，XLD上黄色和黑色菌落疑似沙门氏菌，XLD上黑色菌落为疑似沙门氏菌，BS上带金属光泽的黑色菌落疑似沙门氏菌。

表1 不同培养基上菌落形态

2.2 生化试验及血清学鉴定结果

由于沙门氏菌血清型众多，为了做到不漏检，将不同类型的菌落全部都进行生化试验及血清学鉴定。

生化试验及血清学鉴定结果见表2。

表2 生化试验及血清学鉴定结果

由表2可知，生化鉴定结果与血清学鉴定结果一致，经综合判定，XLD上的黑色菌落、沙门显色培养基上的紫红色菌落、HE上的黑色菌落、BS上的带金属光泽的黑色菌落为沙门氏菌，即该能力验证样品判定为沙门氏菌阳性样品。

3 结论

采用GB 4789.4—2016对沙门氏菌进行检测的过程中，从选择性培养基上分离培养典型菌落十分重要[5]。试验中可以看出不同选择性培养基上的菌落形态不尽相同，由于沙门氏菌有众多的血清型，虽然国标中只需要BS和其他1种选择性培养基即可，但是为了不漏检，也为了相互验证，在选择性分离时应选择多种培养基。

在GB 4789.4—2016中沙门氏菌在BS上的菌落特征为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色，菌落周围培养基可呈黑色或棕色，有些菌株形成灰绿色的菌落，周围培养基不变。在HE上的菌落特征为蓝绿色或蓝色，多数菌落中心黑色或几乎全黑色，有些菌株为黄色，中心黑色或几乎全黑色。在XLD上的菌落特征为粉红色，带或不带黑色中心，有些菌株可呈现大的带光泽的黑色中心，或呈现全部黑色的菌落；有些菌株为黄色菌落，带或不带黑色中心。这3种选择性培养基中，典型沙门氏菌的形态有多种，而在沙门显色培养基上，典型沙门氏菌为紫红色，其他菌为蓝色或者其他颜色，能更方便有效地将目标菌和杂菌区分开，可以作为沙门氏菌检测的首选培养基。

沙门氏菌作为食品微生物检测中的常检项，传统国标方法符合食品安全法的强制标准，方法成熟，对菌体浓度要求不高，但是耗时较长，一般需要4～7 d，而且对检测者的能力要求较高。随着试验技术的不断发展，沙门氏菌的检测技术也在不断完善，分子生物学方法和免疫学方法也被用于沙门氏菌的检测中。刘立兵等人[6]建立了一种利用RPA（Recombinase polymerase amplification） 技术检测沙门氏菌的方法，该方法经过8 h就可完成不同浓度沙门氏菌的检测。文其乙等人[7]利用沙门氏菌特异性抗体建立了检测沙门氏菌的直接ELISA方法，该方法在检测肉样时能在48 h内得出结果。在检测的过程中，可以采用多种方法进行确认，以确保检测结果的正确性。