宫颈癌及癌前病变中Aurora-A 的表达特征及与HR-HPV 感染相关性

初 虹，林振文，余志英，伍敏红

1 深圳市第二人民医院 深圳大学第一附属医院 妇科，广东深圳 518035；2 深圳市人民医院 暨南大学第二临床医学院 南方科技大学第一附属医院 介入科，广东深圳 518020

流行病学调查显示，宫颈癌(cervical cancer，CC)是仅次于乳腺癌的第二大严重危害女性生命及健康的恶性肿瘤[1-2]。其中，长期持续性的高危型人乳头瘤病毒(high risk-human papilloma virus，HR-HPV)感染是导致癌前鳞状上皮内病变(squamous intraepithelial lesion，SIL)及宫颈癌的高危因素，90%以上的宫颈癌患者被检测出有HRHPV的存在[3]。Aurora-A是Aurora激酶家族的一员，是一种丝/苏氨酸蛋白激酶，作为一类新的癌基因，在人类的多种肿瘤中都存在过表达现象，其作为中心体相关的蛋白，基因扩增及高表达时均易导致中心体的复制扩增和功能异常，从而诱发细胞的恶变，导致肿瘤的生成。中心体的缺陷可在宫颈癌早期通过染色体的不稳定性发挥致癌作用[4-6]。由此本研究通过对正常宫颈组织、鳞状上皮内病变组织及CC 组织内Aurora-A 的表达进行检测，拟揭示HR-HPV 与Aurora-A 的相关性，为鳞状上皮内病变及CC 的诊断及治疗提供参考。

材料与方法

1 标本来源 选取2016 年3 月- 2019 年8 月深圳市第二人民医院(深圳大学第一附属医院)存储的HR-HPV 病理组织及CC 手术切除的蜡块标本，患者年龄31 ～ 57 岁，有2 年以上的性生活史及术后随访的资料。HR-HPV 阳性宫颈病变标本65 份，HR-HPV 阴性宫颈病变标本45 份，低级别鳞状上皮内病变(low squamous intraepithelial lesion，LSIL)标本22 份、高级别鳞状上皮内病变(high squamous intraepithelial lesion，HSIL) 标 本44 份、CC 标 本22 份。22 例正常患者的宫颈标本均取自因子宫肌瘤入院进行子宫切除的患者，经检查无宫颈病变。

2 实验方法及评价指标 应用免疫组织化学检测组织中的Aurora-A 表达[4]。选取4 个不同的高倍镜(200 倍)视野，对宫颈组织的Aurora-A 进行着色程度评判，若胞浆及胞核内出现棕色颗粒状物，则判断为Aurora-A 阳性，并计算出阳性细胞所占的比重。1 分，Aurora-A 阳性细胞率低于25%；2 分，Aurora-A 阳性细胞率为25% ～ 50%；3 分，Aurora-A 阳性细胞率为50% ～ 75%；4 分，Aurora-A 阳性细胞率高于75%。不染色为1 分，染色较弱为2 分，中等染色为3 分，强染色为4 分。将染色程度得分与阳性细胞率得分相乘，低于4分(-)，4 ～ 8 分(+)，8 ～ 12 分(++)，12 ～ 16 分(+++)，(-)或(+)为阴性/弱阳性，(++)或(+++)为强阳性。

3 统计学分析 使用SPSS23.0进行研究资料分析。观测资料主要为计数资料，以例数及率描述。多组间比较为整体+分割χ2检验(统计量为χ2)。等级资料的多组间比较为整体+分割秩和检验(统计量为Z)。此外，相关分析为Spearman 相关检验。统计推断的检验水准α=0.05。

结 果

1 Aurora-A 在各类宫颈组织内的表达及与病变程度的相关性 LSIL 和HSIL 组织中，Aurora-A以胞浆内着色的中等强度表达为主；CC 组织中，Aurora-A 以胞浆及胞核着色的棕黄色强表达为主，阳性细胞数较多；正常的宫颈组织内几乎没有Aurora-A 的表达。Aurora-A 在正常、LSIL、HSIL及CC 组织中阳性表达率分别为4.55%、18.18%、45.45%、63.64%，差异有统计学意义(P ＜0.05)，见表1。Aurora-A 在各类宫颈组织内的表达染色图见图1。Aurora-A 阳性率随着宫颈病变程度的升高而升高，Aurora-A 与宫颈病变程度相关性分析显示r=0.486，P=0.032，呈正相关，见图2。

表1 Aurora-A 在各类宫颈组织内的表达及与病变程度的相关性Tab. 1 Aurora-A expression in various cervical tissues and its correlation with the degree of lesions

图 1 Aurora-A在各类宫颈组织内的表达(200×)A: 正常； B: LSIL； C: HSIL； D: CCFig. 1 Aurora-A expression in various cervical tissues (200×)A: Normal cervical tissure; B: LSIL; C: HSIL; D: CC

2 HR-HPV 在各类宫颈组织中的表达及与病变程度的相关性 HR-HPV 在正常、LSIL、HSIL 和CC 组织中阳性表达率分别为22.73%、36.36%、68.18%、100%，差异有统计学意义(P ＜0.05)(表2)。HR-HPV 感染率随着宫颈变程度的升高而升高，HR-HPV 感染率与子宫颈的病变程度相关性分析显示r=0.596，P=0.029，呈正相关(图3)。

3 Aurora-A 和HPV 相关性分析 Aurora-A 阳性率越高，HPV 阳性率越高，Aurora-A 与HPV 相关性分析显示r=0.625，P=0.023。见图4。

表2 HR-HPV 在各类宫颈组织中的表达及与病变程度的相关性Tab. 2 Expression of HR-HPV in various cervical tissues and its correlation with the malignant degree of lesions

图 2 Aurora-A在各类宫颈组织内的表达及与病变程度的相关图Fig. 2 Correlation between Aurora-A expression and the malignant degree of lesions

图 3 HR-HPV在各类宫颈组织中的表达及与病变程度的相关图Fig. 3 Correlation of HR-HPV expression with the malignant degree of lesions

图 4 Aurora-A与HPV相关图Fig. 4 Correlation of Aurora-A with HR-HPV

讨 论

流行病学调查研究显示，HR-HPV 持续反复感染是鳞状上皮内病变及CC 的主要原因。当前已发现的HR-HPV DNA 约有200 余种，高危致癌的有20 余种，如HR-HPV16、18、31、33、35 等，多数人在其一生中会感染HR-HPV，一般会在半年至1 年内被免疫系统清除，持续高危型HRHPV 或者反复的HR-HPV 感染才是导致鳞状上皮内病变甚至CC 的主要原因[7]，Hansen 等[8]的研究表明，HR-HPV 持续或者反复感染将患者患CC 的概率大大提高。如本文结果显示，HR-HPV 的阳性率随鳞状上皮内病变程度的升高而升高，与宫颈病变呈正相关，该结果佐证了HR-HPV 感染与CC 的关系，且与文献报道一致[9-10]。

Aurora-A 可过表达于许多恶性癌症组织中，如卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌等，可能导致中心体相关的蛋白异常表达致上皮细胞异常复制、染色体稳定性遭破坏、异倍体形成、从而与肿瘤的发生有关[11-15]。Ma 等[16]采用多元回归分析显示，Aurora-A 表达与CC 的淋巴结转移及复发显著相关，是CC 患者生存的不利因素。本文结果也佐证了文献报道，Aurora-A 在正常、LSIL、HSIL 及CC 组织中阳性表达率显著增高，在CC 组织中表达最高，Aurora-A 表达与宫颈病变程度呈正相关关系，提示Aurora-A 参与了CC 的发生发展过程，该结果与文献报道类似。

研究表明，HR-HPV 患者宫颈细胞内中心体的数目变化显著，使双级纺锤体形成受阻，导致异倍染色体及基因组稳定性改变[17-19]，故可推测出，Aurora-A 过表达主要是因为中心体异常导致染色体稳定性失衡，基因组稳定性改变，从导致CC 的发生[20]，给予Aurora-A 抑制剂有助于改善HRHPV 感染的CC 动物模型的癌细胞生长[21]，由此可见Aurora-A 表达一定程度地影响了HPV 感染导致的CC，Aurora-A 表达与HPV 感染紧密相关[22]。本研究也显示，Aurora-A 在各类宫颈组织中的阳性表达呈现病变逐级升高的趋势，Aurora-A 阳性表达与HR-HPV 感染率呈正相关，Aurora-A 可能在鳞状上皮内病变进展为CC 中发挥着一定的作用。

综上，Aurora-A 过表达可能与CC 发生相关，Aurora-A 或可作为诊断鳞状上皮内病变及CC 的参考指标，从而成为潜在的抗CC 药物的治疗靶点，为CC 的药物研发提供依据。